AGAR FAINĂ DE PORUMB: FUNDAL, PREGĂTIRE ȘI UTILIZARE - BIOLOGIE - 2025

Agarul făină de porumb este un mediu de cultură solid, putere nutritivă scăzută, utilă pentru subcultivare anumitor fungi și pentru demonstrarea clamidiospori in tulpini de Candida albicans complexe. În engleză este cunoscut sub numele de Corn Meal Agar.

Mediul de porumb convențional are o compoziție foarte simplă, conține făină de porumb, agar-agar și apă. Datorită nivelului nutrițional scăzut, este ideal pentru utilizarea în întreținerea tulpinilor fungice pentru perioade moderate de timp, în special ciuperci negri.

A. Reprezentare grafică a complexului Candida albicans pe agar de făină de porumb. B. Clamidozopozele complexului Candida albicans văzut la microscop, format pe agar de porumb. Sursa: A. GrahamColm / B. De: CDC / Dr. William Kaplan, Curtoazie: Public Health Image Library.

Sporularea complexului Candida albicans este favorizată în acest mediu, dacă se adaugă 1% din Tween 80 în timpul pregătirii agarului. Formarea clamidozei este caracteristică acestei specii și practic singura care afectează oamenii.

Există și alte specii care formează clamidozore, dar este puțin probabil să afecteze oamenii, cum ar fi Candida australis, prezentă în excremente de pinguini sau C. clausenii, care este un saprofit întâlnit mai rar. De asemenea, în mod excepțional ar putea forma speciile C. stellatoidea și C. tropicalis.

Pe de altă parte, adăugarea de glucoză la mediul de porumb favorizează formarea de pigmenți în tulpinile de trichophytom rubrum.

Este important de subliniat faptul că există ciuperci care nu formează hipo sau pseudohyphae în agarul de porumb, cum ar fi Cryptococcus neoformans, care diferă de alte genuri.

Agar de făină de porumb poate fi făcut acasă în laborator sau pot fi utilizate și medii comerciale.

Bază

Faina de porumb este substratul, agarul este agentul de solidificare, iar apa este solventul.

Agar de făină de porumb poate fi completat cu tween 80 (monooleat de sorbitan sau poliester 80). Acest compus reduce tensiunea de suprafață a mediului datorită puterii sale de emulsionare.

De asemenea, creează un mediu ostil care inhibă înmulțirea exagerată a celulelor și stimulează creșterea hibazelor, favorizând și producerea de clamidozore; acesta din urmă a considerat structuri de rezistență. Această structură ajută la identificarea speciilor Candida albicans.

La rândul său, glucoza din acest mediu crește capacitatea de formare a pigmenților a unor ciuperci.

Trebuie remarcat faptul că mediul de porumb cu glucoză nu este util pentru demonstrarea clamidozei în complexul Candida albicans.

preparare

Pregătire de agar de făină de porumb

Se cântăresc 47 g de făină de porumb galben și se dizolvă în 500 ml apă distilată. Se încălzește la 60 ºC, în timp ce se agită preparatul pentru o perioadă de aproximativ 1 oră. Apoi filtrați printr-o bucată de tifon și bumbac, opțional poate fi filtrat din nou, trecând preparatul printr-o hârtie de filtru Whatman nr.

Se completează volumul la 1000 ml cu apă distilată. Se adaugă 17 g de agar-agar, se încălzește până se dizolvă. Autoclave timp de 15 minute la 121 ºC.

Serviți în preparate Petri sterile. Păstrați la frigider.

Culoarea mediului preparat este albicioasă, cu un aspect năprasnic.

Dacă doriți să preparați făină de porumb cu glucoză la preparatul descris mai sus, adăugați 10 g glucoză.

Agar comercial din făină de porumb

Se cântăresc 17 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Amestecul poate fi încălzit, agitând ușor pentru a se dizolva complet. Sterilizați într-o autoclavă la 121 ºC, la 15 lb, timp de 15 minute.

Se toarnă în vasele sterile Petri. Să se solidifice. Invertiți și păstrați la frigider până la utilizare. Temperați înainte de utilizare.

PH-ul trebuie să fie de 6,0 ± 0,2 la 25 ºC.

Agar faină de porumb cu Tween 80

Pentru a respecta ISO 18416, agarul de făină de porumb trebuie pregătit după cum urmează:

Se cântăresc 65 de grame pe litru și se adaugă 10 ml de Tween 80. Se încălzește și se fierbe câteva minute până la dizolvare, având grijă să nu se supraîncălzească prea mult. Sterilizați la 121 ºC timp de 15 minute.

Agar faină de porumb cu glucoză

Pentru a îmbunătăți puterea cromogenică a coloniilor de trichophyton rubrum și a le diferenția de T. mentagrophytes, la formula inițială se poate adăuga 0,2% glucoză. Nu este necesar să aveți Tween 80, deoarece glucoza inhibă formarea clamidozei.

Utilizare

În principal, utilizarea agarului de făină de porumb este destinată studiului tulpinilor de Candida, ajutând identificarea acestora prin observarea caracteristică a clamidozei la speciile albicans. Adică, utilizarea acestui agar servește ca metodă auxiliară de identificare a acestor drojdii.

Pe acest agar se pot dezvolta atât specii saprofite cât și patogene, dar fiecare formează structuri micelice caracteristice. De exemplu, speciile din genul Torulopsis nu produc miceliu și se reproduc doar prin blastoconidia.

De asemenea, speciile Trichosporon și Geotrichum produc artroconidia pe agar de făină de porumb și uneori este dificil să se distingă între una și alta.

Artroconidia din genul Geotrichum produce o extensie a hifei asemănătoare cu un baston de hochei.

De asemenea, producerea de pigmenți folosind agar faină de porumb suplimentată cu glucoză este utilă în identificarea trichophytom rubrum.

însămânțat

Coloniile Candida suspecte obținute în mediul de cultură primară - agoura Sabouraud - din probe clinice, produse cosmetice, soluri, printre altele, sunt subcultivate pe agar de făină de porumb. Mediul este însămânțat și incubat la 22 ° C timp de 24 până la 48 de ore. Timpul de incubație poate fi prelungit, dacă este necesar.

Demonstrație Chlamydospore

În acest scop, agarul de făină de porumb cu Tween 80 trebuie inoculat folosind tehnica Dalmau. Această metodă constă în preluarea unei porțiuni a coloniei suspectate cu mânerul de platină și realizarea a trei tăieturi paralele la mijloc, menținând mânerul la 45 °. Tăieturile trebuie separate de o distanță de 1 cm una de cealaltă.

Ulterior, un obiect de acoperire cu flăcări anterior este plasat pe dungile care au fost semănate, astfel încât jumătate este acoperită, iar cealaltă este descoperită.

Incubați plăcile însămânțate la 30 ° C timp de 48-72 de ore și apoi examinați la microscop prin alunecarea capacului.

Întreținerea tulpinilor fungice

Pentru menținerea tulpinilor, plăcile însămânțate și cultivate sunt păstrate la frigider (4 până la 8 ºC). În acest fel, acestea pot dura câteva săptămâni și pot fi utilizate în scopuri didactice sau de cercetare.

QA

Pentru controlul sterilității, o placă este incubată fără inoculare la temperatura camerei, este de așteptat să nu se producă creștere sau schimbare de culoare.

Pentru controlul calității, pot fi semănate tulpini cunoscute precum: Staphylococcus aureus, ATCC 6538, Escherichia coli ATCC 25922, Aspergillus niger ATCC 16404, Candida albicans ATCC 1023, Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763.

Rezultatele așteptate sunt inhibarea parțială pentru S. aureus și E. coli. În timp ce în restul tulpinilor este de așteptat o creștere satisfăcătoare.

Aspergillus niger crește cu colonii negre și sporulate într-un timp aproximativ de 5 zile de incubare.

Candida albicans colonii de drojdie cu producție de clamidospor.

Saccharomyces cerevisiae produc celule mari de drojdie.

limitări

În partea inferioară a plăcii se formează un precipitat galben care nu trebuie confundat cu coloniile.

Referințe

1. Laboratoare Neogen. Agar Meal Meal Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com.
2. Media Media Microkit. Agar Meal Meal Disponibil la: Medioscultivo.com.
3. Linares M, Solís F. Ghid de identificare a drojdiei. Disponibil la adresa: http: //www.guia.revibero.
4. Urcia F, Guevara M. Rev. Perú Med.Exp. Sănătate publică, 2002; 19 (4): 206-208. Disponibil la: Scielo.com
5. Casas-Rincón G. Micologie generală. 1994. Ediția a 2-a Universitatea Centrală din Venezuela, Ediții bibliotecare. Venezuela Caracas.
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
7. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
8. Castillo E. Studiu comparativ al unor metode macro și microscopice pentru izolarea și recunoașterea genului Candida. Rev. Columbian de științe chimice farmaceutice. 1970; 3 (1): 33-57. Disponibil la adresa: Ciencias.unal.edu.co