BHI AGAR: FUNDAMENT, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Agarul BHI sau Brain Heart Infusion agar mediu este o cultură solid nutritiv. În spaniolă, ne referim la agar pentru infuzia inimii creierului. Este un mediu de cultură neselectiv, ceea ce înseamnă că se pot dezvolta toate tipurile de bacterii Gram pozitive și Gram negative, precum și unele drojdie și ciuperci filamentoase.

Este compus dintr-o infuzie de creier și inimă de vițel, hidrolizat peptic din țesuturile animale, hidrolizat pancreatic de cazeină, clorură de sodiu, glucoză, fosfat de disod și agar.

Plăci BHI. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

Trebuie menționat că agarul BHI este unul dintre mediile de cultură cele mai des utilizate în laboratoarele de bacteriologie. Poate fi utilizat fără suplimente ca cultură primară, subcultură a coloniilor obținute pe alte medii selective sau pentru întreținerea tulpinilor în laborator.

Pe de altă parte, este un mediu ideal pentru a fi folosit ca bază pentru prepararea mediilor îmbogățite, cum ar fi agarul de sânge și agarul de ciocolată. Ambele sunt ideale pentru izolarea microorganismelor solicitante din punct de vedere nutrițional. Cu toate acestea, trebuie menționat că, deoarece conține glucoză, nu este potrivit pentru respectarea modelelor de hemoliză.

De asemenea, agarul BHI poate fi utilizat pentru prepararea mediilor speciale pentru izolarea microorganismelor patogene dificil de cultivat în medii comune, printre care: Haemophilus sp, Francisella tularensis, Corynebacterium diphtheriae și Histoplasma capsulatum.

Cu aditivul de antibiotice, agarul BHI devine un mediu selectiv pentru izolarea ciupercilor.

Bază

Este un mediu nutritiv de cultură pentru a izola microorganisme care necesită moderat, iar îmbogățirea acestuia poate fi crescută cu adăugarea de sânge și alte suplimente nutritive.

Este un mediu de cultură neselectiv, de aceea permite creșterea majorității bacteriilor Gram pozitive și Gram negative, precum și a unor ciuperci. Cu toate acestea, poate fi făcut selectiv cu adăugarea de antibiotice.

Mediul conține infuzie de creier și inimă de vițel, hidrolizat peptic de țesuturi animale și hidrolizat de cazeină pancreatic; Toți acești compuși acționează ca surse de vitamine, aminoacizi, azot și carbon.

Glucoza este un carbohidrat care furnizează energie microorganismelor odată ce l-au fermentat. Între timp, clorura de sodiu și fosfatul de disod mențin echilibrul osmotic și asigură un pH apropiat de neutralitate. În cele din urmă, agarul conferă consistenței solide medii.

preparare

Cântărește 52 de grame de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Aduceți amestecul la o sursă de căldură până la fierbere, amestecând frecvent în timpul procesului de dizolvare.

Plăcile sau panele de agar BHI pot fi preparate fără aditivi.

wedges

Pentru pregătirea panelor, serviți preparatul până când jumătatea fiecărui tub este umplută, acoperiți și sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute, la plecare, așezați pe o bază până când se solidifică. Ulterior păstrați-l la frigider până la utilizare.

Panouri BHI pentru bacterioteca. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

Farfurii

Amestecul dizolvat este autoclavat la 121 ° C timp de 15 minute, lăsându-l să se răcească la 50 ° C și 20 ml de mediu sunt serviți în vasele Petri sterile. Se lasă să se solidifice, se inversează și se păstrează la frigider până la utilizare. Lăsați plăcile să ajungă la temperatura camerei înainte de însămânțare.

PH-ul mediului trebuie să rămână la 7,4 ± 0,2.

Mediul brut are o culoare bej, iar cel preparat este chihlimbar deschis.

Prepararea agarului de sânge

După sterilizarea mediului, se răcește la o temperatură de aproximativ 45 până la 50 ° C, apoi se adaugă sângele (50 ml), se amestecă ușor pentru a se omogeniza și se servește aseptic 20 ml în fiecare vas Petri. Dacă se formează bule pe placă, flacăra mai ușoară trebuie trecută rapid peste bule pentru a le elimina.

De asemenea, se pot prepara medii speciale prin adăugarea aditivilor corespunzători atunci când amestecul atinge o temperatură de 45 până la 50 ° C.

Mediul rămâne roșu vișin.

Aplicații

Utilizați fără suplimente

Agarul BHI fără aditivi este util ca cultură primară și pentru semănat tulpini pure de microorganisme cu cerințe mici sau medii pentru identificarea ulterioară a acestora.

Deoarece este un mediu de culoare deschisă, este ideal pentru observarea pigmenților și, întrucât nu conține substanțe interferente, pot fi efectuate unele teste biochimice, cum ar fi oxidaza și catalasa, sau alte teste biochimice pot fi montate din colonii din acest agar.

De asemenea, panele de agar BHI sunt utilizate pe scară largă pentru întreținerea tulpinilor pentru un anumit timp în laborator (bacterioteca).

Plăcile sau panele însămânțate pe suprafață cu tulpini bacteriene sunt incubate la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore. Între timp, la ciuperci temperatura și timpul de incubație vor depinde de tipul de ciupercă căutată.

Ca agar de bază pentru prepararea altor medii

Cu această bază, pot fi preparate medii îmbogățite și selective.

îmbogăţit

Funcția sa principală este de a servi drept bază pentru prepararea agarului de sânge pentru utilizarea de rutină în laboratoarele de microbiologie. Mai ales, baza BHI este favorabilă izolării Streptococcus sp. Cu toate acestea, are dezavantajul de a nu fi potrivit pentru respectarea modelelor de hemoliză, deoarece conține glucoză.

De asemenea, se folosește la prepararea agarului de sânge de iepure sau cal pentru izolarea Haemophilus sp. Pentru cele mai bune rezultate, se poate adăuga un supliment de îmbogățire (IsoVitaleX).

Dacă probele provin din tractul respirator, bacarracină poate fi adăugată la agar pentru a inhiba flora însoțitoare și pentru a crește probabilitatea de recuperare a Haemophilus sp.

Alternativ, agar de sânge (miel sau om) cu telurită de cistină poate fi preparat pentru a izola Corynebacterium diphtheriae. De asemenea, este util să se pregătească agar de sânge de iepure, cu adăugarea de cistină și glucoză pentru izolarea Francisella tularensis.

Plăcile de agar din sânge sunt semănate prin epuizare și sunt incubate la 35-37 ° C timp de 24-48 de ore în microaerofilicitate (5-10% CO ₂ ).

Selectiv

Acest mediu cu adăugarea de antibiotice poate înlocui agarul Sabouraud pentru izolarea ciupercilor.

Combinația de agar BHI cu cloramfenicol - gentamicină sau penicilină -, streptomicină și sânge de cal este ideală pentru izolarea Histoplasma capsulatum.

În funcție de microorganismul care trebuie izolat, se recomandă incubația la 35-37 ° C sau la temperatura camerei în aerobioză. Uneori este necesară incubația în ambele intervale de temperatură, folosind 2 plăci pentru aceasta.

Unii ciuperci, cum ar fi Trichophyton mentagrophytes, trebuie să fie incubate la temperatura camerei până la 7 zile.

QA

Din fiecare lot pregătit, se recomandă să incubați 1 farfurie sau pană la 37 ° C timp de 24 de ore și să verificați dacă nu există creștere; Este deosebit de important atunci când se prepară agar de sânge, deoarece este un mediu ușor contaminat.

Pe de altă parte, calitatea mediului poate fi evaluată prin inocularea tulpinilor standard cunoscute sau certificate și respectarea dezvoltării acestora.

În acest sens, pentru evaluarea agarului BHI fără aditivi, se pot folosi tulpini de Escherichia coli ATCC 25922, Staphylococcus aureus ATCC 25923 sau Candida albicans ATCC 10231, care sunt incubate la 37 ° C în aerobioză timp de 24 până la 48 de ore. În toate cazurile, este de așteptat o creștere satisfăcătoare.

Tulpinile de Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 sau Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533 pot fi însămânțate pentru a evalua plăcile de agar din sânge.

Tulpinile bacteriene sunt incubate la 37 ° C în microaerofilicitate timp de 24 de ore, în timp ce ciuperca este incubată la temperatura camerei într-o cameră umedă până la 7 zile. Creșterea satisfăcătoare este așteptată în toate cazurile.

Referințe

1. Laboratoarele Britannia. Agar de infuzie a inimii cerebrale. 2015. Disponibil la: britanialab.com.
2. Laboratoare BD. Infuzie de Brain Heart Heart (BHI) Agar. 2013. Disponibil la adresa: bd.com.
3. Laboratorios Difco Francisco Soria Melguizo, SA Brain Heart Infusion Agar. 2009.
4. Neogen Laborator. Agar de infuzie a inimii cerebrale. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
5. Gil M. Agar de sânge: fond de ten, utilizări și preparare. 2018. Disponibil la adresa: lifeder.com.
6. Colaboratorii Wikipedia. Infuzie de inimă cerebrală. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 19 septembrie 2018, 03:58 UTC. Disponibil pe: wikipedia.org. Accesat pe 2 martie 2019.
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.