CZAPEK AGAR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE, UTILIZĂRI ȘI LIMITĂRI - BIOLOGIE - 2025

Czapek (CZA) este un mediu solid selectiv proiectat special pentru cultivarea bacteriilor saprofite și fungi. A fost creat de botanistul Friedrich Johann Franz Czapek, de origine poloneză, și de chimistul american Arthur Wayland Dox; din acest motiv, acest agar este cunoscut și ca mediu Czapek-Dox.

Mediul original a fost lichid, dar ulterior s-a adăugat agar pentru a-l face un mediu solid. Mediul Czapek este compus din nitrat de sodiu, fosfat bipotasic, sulfat de magneziu, clorură de potasiu, sulfat feros, zaharoză, agar și apă distilată.

Czapek agar A. Aspergillus parasiticus B. Aspergillus fumigatus Sursa: A. Medmyco / B. Foto: Dr. David Midgley. Wikipedia.com

PH-ul agarului Czapek este de 7,3, dar există o variantă la care se adaugă 10% acid lactic al cărui pH rămâne 3,5. Acest mediu acid este utilizat pentru cultivarea microorganismelor acidofile.

Pe de altă parte, unele case comerciale au modificat compoziția agarului Czapek prin schimbarea sulfatului de magneziu și a fosfatului bipotasic cu glicerofosfat; această modificare împiedică formarea precipitatului de fosfat de magneziu observat cu formula convențională. De asemenea, există o altă variantă la care se adaugă extract de drojdie.

În cele din urmă, Czapek agar este recomandat de Asociația Americană de Sănătate Publică APHA pentru studiul Actinomycetes sp, Aspergillus sp, Paecilomyces sp și Penicillium sp. Aceste specii se caracterizează prin a fi microorganisme de mediu și agenți patogeni oportunisti.

Bază

Acest mediu conține zaharoză; Acest carbohidrat servește ca sursă de carbon, în timp ce azotatul de sodiu este sursa de azot, dar spre deosebire de alte medii, azotul furnizat este anorganic.

Din acest motiv, mediul Czapek este considerat selectiv, deoarece pot crește doar microorganisme capabile să utilizeze compuși anorganici ca singură sursă de azot.

Ca substanță reglatoare a osmolarității mediului este fosfatul bipotasic. La rândul lor, sulfat de magneziu, clorură de potasiu și sulfat feros furnizează minerale esențiale pentru creșterea microorganismelor saprofite (în viață liberă). Această formulă formează un precipitat de fosfat de magneziu.

În cele din urmă, agar-agar este compusul care oferă consistența solidă a mediului, iar apa este solventul pentru toate componentele.

Cu formula de agar Czapek modificată, nu există formare de precipitate și îmbunătățește performanța de creștere a unor ciuperci.

Aciditatea extremă a acidului Czapek Agar îl face un mediu mai selectiv, permițând doar creșterea microorganismelor acidofile, capabile să utilizeze azot anorganic. Între timp, agarul Czapek-drojdie îmbunătățește performanțele anumitor ciuperci.

preparare

Czapek-Dox mediu

Se cântăresc 49 g de mediu de cultură deshidratat și se dizolvă în apă distilată. Aplicați căldura până la fierbere. Agitați amestecul frecvent până la dizolvarea completă.

-Caspek Agar Wedges

Distribuie amestecul dizolvat în tuburi și autoclave la 121 ° C timp de 15 minute. Când scoateți din autoclav, omogenizați înainte de a pune tuburile și lăsați să se solidifice.

-Case de agar Czapek

Autoclavează amestecul dizolvat la 121 ° C timp de 15 minute și lasă-l să se răcească la 50 ° C, omogenizează și toarnă 20 ml în vasele Petri sterile. Lăsați solidificarea, inversarea și păstrarea în frigider până la utilizare.

PH-ul trebuie să rămână la 7,3 ± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este albă, iar mediul preparat este chihlimbar ușor, ușor tulbure din cauza prezenței unui precipitat floculant.

Mediu Czapek la pH acid

Pregătiți așa cum s-a descris deja, dar adăugând 10 ml acid lactic steril 10% pentru fiecare litru de mediu preparat. Mediul Czapek modificat trebuie să fie la pH 3,5 ± 0,2.

Czapek mediu modificat

Se cântăresc 45,4 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă. Restul preparatului este același ca cel descris mai sus. Culoarea mediului deshidratat este albă și mediul preparat este albicios. PH-ul final al mediului este de 6,8 ± 0,2.

Mediu de drojdie Czapek

Numit și Agra de extracție a drojdiei Czapek (CYA). Conține elementele de agar clasic Czapek plus extract de drojdie.

Utilizare

Mediul Czapek este utilizat pentru a căuta microorganisme saprofite în probe de sol, legume, cereale, aer, insecte, printre altele.

Aga Czapek la pH acid este utilizat pentru creșterea microorganismelor acidofile, în timp ce aga Czapek modificată este utilă în special pentru formarea clamidozei la speciile complexului Candida albicans.

În cele din urmă, Czapek-drojdie agar este foarte util pentru izolarea Aspergillus și Penicillium.

însămânțat

-Czapek agar

Pentru a căuta actinomicete în sol, se procedează după cum urmează: proba este tratată cu apă fenolizată timp de 30 min, iar apoi 1 ml de suspensie este semănat pe Czapek agar. Se incubează la 28 ° C timp de 5 până la 7 zile.

Pentru probele de legume, cereale și insecte, acestea sunt plasate direct pe agar. De asemenea, puteți face diluții și semințe 0,1 ml pe suprafața agarului.

-Modificată Czapek agar

Pentru însămânțare, se folosește o buclă dreaptă sau un ac, se impregnează cu tamponul și se inoculează agarul făcând o puncție până când atinge baza plăcii. Se incubează timp de 24 de ore la 28 ° C și se examinează la microscop deasupra și sub placă pentru a se vedea dacă s-au format clamidozore.

Temperatura și timpul de incubație

Temperatura și timpul de incubație variază în funcție de tipul de microorganism care trebuie izolat. Plăcile sunt, în general, incubate timp de una până la două săptămâni într-un interval de temperatură cuprins între 20 și 25 ° C.

Cu toate acestea, există condiții specifice pentru unele tulpini. De exemplu, majoritatea speciilor din genul Aspergillus cresc optim la 30 ° C; cu toate acestea, A. fumigatus crește la 50 ° C.

În ceea ce privește timpul de incubație, una sau două săptămâni este normală, cu toate acestea, Candida albicans se poate dezvolta în 24 până la 48 de ore la 25 ° C.

Caracteristicile unor colonii pe acest mediu

-Penicillium atrovenetum

Se dezvoltă în 12 zile de incubare la 27 ° C. Coloniile lor sunt mici (25 mm).

Coloniile au un aspect catifelat, cu un chenar alb definit și o nuanță albastru-verde în centru care devine gri odată cu înaintarea în vârstă. Partea inversă a coloniei este portocalie, făcând mijlocul aceeași culoare datorită producției de pigment.

-Aspergillus niger

Se dezvoltă cu miceliu alb până la galben și spori negri.

-Candida albicans

Se dezvoltă colonii cremoase de bej deschis. În agarul Czapek modificat formează clamidozporese.

-Aspergillus parasiticus

Un miceliu verde închis se dezvoltă în 7 zile la 25 ° C.

QA

Pentru a evalua calitatea mediului de cultură, se pot planta tulpini de control certificate, cum ar fi: Aspergillus niger MKTA 16404, Candida albicans MKTA 10231.

Aspergillus niger dezvoltă spori de miceliu alb până la galben și negru în aproximativ 5 zile, în timp ce Candida albicans va avea o creștere satisfăcătoare în 24 de ore de incubare la 25 ° C; coloniile sunt de culoare crem.

limitări

Unele studii au relevat că pentru recuperarea Actinomicetelor, agarul cu cel mai bun randament este agar dextroză de cartof, cu Czapek agar pe locul doi, dar pentru recuperarea Aspergillus și Penicillium, Czapek agar este cel care oferă cea mai mare rată de recuperare.

Referințe

1. Dávila M și colab. Actinomicete antagonice împotriva ciupercilor fitopatogene de importanță agricolă. Rev. Mex. Ştiinţă. Agríc 2013, 4 (8): 1187-1196. Disponibil pe: scielo.org.
2. Luna M, Lozada Y, Wheats Á. Izolarea tulpinilor de Aspergillus niger, producând ochratoxină A, în cafea verde păstrată (Coffea arabica). Rev. Mex. Mic. 2010; 32: 63-68. Disponibil la adresa.scielo.org.
3. Colaboratorii Wikipedia. Mediu Czapek. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 13 ianuarie 2019, ora 20:30 UTC. Disponibil la adresa: en.wikipedia.org
4. Laboratoarele Conda Pronadisa. Agar Czapek-Dox modificat. Disponibil la adresa: condalab.com
5. Media Media Microkit. Czapek-Dox Agar. Diosponible în: Medioscultivo.com