Agarul EMB este selectiv și mediu diferențială utilizat pentru izolarea solida cultura negativa bacili Gram, în special Enterobacteriaceae și alte bacterii Gram negativi nesolicitant. Este, de asemenea, cunoscut prin acronimul EAM, care se referă la eozină-albastru de metilen.
Acest mediu a fost creat de Holt-Harris și Teague în 1916. Conține peptone, lactoză, zaharoză, fosfat dipotazic, agar, eozină, albastru de metilen și apă. Este foarte asemănător cu MacConkey Agar, în special atunci când se utilizează Agine EMB modificat Levine, care nu conține zaharoză.
Luciu metalic al Escherichia coli pe agar EMB Sursa: Carmen Moreno González, de la Wikimedia Commons
De fapt, fiecare laborator decide dacă lucrează cu unul sau cu altul, deoarece îndeplinesc aceeași funcție, deși biochimic sunt diferite.
Are chiar același dezavantaj ca și agarul MacConkey clasic în ceea ce privește producția roșie de către genul Proteus. Prin urmare, pentru a evita acest fenomen, concentrația de agar poate fi crescută cu până la 5%.
Bază
Selectiv
Agar EMB este subtil selectiv, deoarece conține coloranți de anilină (eozină și albastru de metilen), care acționează ca inhibitori, împiedicând creșterea majorității bacteriilor Gram pozitive și a unor tije Gram negative.
Cu toate acestea, acest agar are dezavantajul că unele bacterii Gram pozitive pot rezista prezenței substanțelor inhibitoare și cresc sub formă de colonii mici incolore, cum ar fi Enterococcus faecalis și unele Staphylococcus.
De asemenea, anumite drojdii pot crește, cum ar fi complexul Candida albicans, care va da colonii roz foarte mici. Chlamidozourile se pot dezvolta chiar din această drojdie dacă eșantionul este însămânțat adânc.
Diferenţial
Pe de altă parte, agarul EMB este, de asemenea, un mediu diferențial, deoarece acești coloranți împreună (eozină și albastru de metilen) au proprietatea de a forma un precipitat la pH acid, de aceea servesc ca indicatori ai producției sale.
Astfel, bacteriile care fermentează slab lactoza sau zaharoza produc colonii purpurii în 24 până la 48 de ore. De exemplu genurile Klebsiella, Enterobacter și Serratia.
Acele bacterii care fermentează puternic lactoza, cum ar fi Escherichia coli, sau zaharoză, cum ar fi Yersinia enterocolitica sau Proteus penneri, formează un precipitat de culoare verde-negru, oferind un aspect metalic caracteristic de luciu la aceste specii.
Trebuie menționat că, dacă se utilizează mediu de levină EMB (fără zaharoză), Yersinia enterocolitica și Proteus penneri vor produce colonii clare.
Bacteriile care nu fermentează lactoza sau zaharoza sunt hrănite prin prezența peptonelor, care furnizează aminoacizii și azotul necesare creșterii bacteriene și produc colonii clare. De exemplu, genurile Salmonella și Shigella, printre altele.
De asemenea, este important de menționat că genul Acinetobacter poate prezenta colonii de lavanda-albastru, chiar dacă nu este un fermentator lactoză sau zaharoză, dar are proprietatea de a fixa albastru de metilen pe peretele celular. Acest lucru se poate întâmpla și cu alte bacterii oxidative.
preparare
Mediul deshidratat original este de culoare bej deschis.
Pentru a prepara acest mediu de cultură, trebuie să cântărești 36 de grame de mediu deshidratat și suspendat într-un balon care conține un litru de apă distilată.
După ce lăsați amestecul să se odihnească timp de 5 minute, duceți balonul la o sursă de căldură, amestecând energic și constant până când fierbe și se dizolvă complet.
Ulterior, mediul de cultură deja dizolvat trebuie sterilizat folosind autoclavul la 121 ° C timp de 15 minute.
La sfârșitul timpului, este scos din autoclav și lăsat să stea scurt. Apoi, încă cald (45-50 ° C), se servesc 15-20 ml de agar în fiecare vas Petri steril. Mediul trebuie să fie albastru deschis.
După servire, plăcile sunt lăsate ușor descoperite până când agarul se răcește ușor. Acestea sunt apoi acoperite și se lasă să se solidifice complet. Ulterior, acestea sunt aranjate în suporturi pentru plăci inversate și păstrate la frigider (8 ° C) până la utilizare.
Această procedură se realizează de preferință într-o capotă cu flux laminar sau în fața unui arzător Bunsen pentru a evita contaminarea.
Este important să rețineți că fiecare casă comercială va indica cantitatea care trebuie cântărită pentru a pregăti mediul de cultură.
PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,2 ± 0,2
Aplicații
Acest mediu este utilizat pentru semănarea urinei și fecalelor sau a oricărui tip de specimen clinic, mai ales dacă se suspectează prezența bacililor Gram-negativi non-fastidiosi, cum ar fi bacilii aparținând familiei Enterobacteriaceae, care cresc foarte bine pe acest mediu.
Bacteriile enteropatogene din genurile Shigella și Salmonella se disting prin coloniile lor incolore sau ușor chihlimbar.
De asemenea, cresc și bacili care fermentează fără lactoză, cum ar fi Aeromonas, Pseudomonas, Acinetobacter, printre altele.
De asemenea, acest mediu este foarte util în analiza microbiologică a alimentelor și a apei, deoarece este ideal pentru faza confirmatoare completă a determinării coliformelor, adică pentru a corobora prezența E. coli de la bulionii CE turbiți de la din tehnica numerelor cele mai probabile (MPN).
QA
Pentru a verifica dacă mediul de cultură proaspăt pregătit funcționează bine, pot fi plantate tulpini de control pentru a observa caracteristicile coloniilor și pentru a verifica dacă acestea dau așa cum este de așteptat.
Pentru aceasta, pot fi utilizate tulpini de ATCC sau tulpini bine identificate de E. coli, Enterobacter aerogenes, Klebsiella sp, Salmonella typhimurium, Shigella flexneri, Pseudomonas aeruginosa și unele bacterii Gram pozitive, precum S. aureus.
E. coli este de așteptat să genereze colonii albastre-negre bine dezvoltate, cu un luciu metalic verde. Întrucât, Enterobacter aerogenes și Klebsiella sp ar trebui să dea colonii de mucoase negre albăstrui bine dezvoltate.
Pe de altă parte, Salmonella typhimurium și Shigella flexneri, trebuie să dezvolte colonii mari, incolore sau cu o ușoară culoare chihlimbară.
În cele din urmă, genul Pseudomonas aeruginosa crește sub formă de colonii incolore de dimensiuni neregulate, în timp ce bacteriile Gram pozitive ar trebui să fie total inhibate sau să crească puțin cu coloniile foarte mici.
Gânduri finale
Uneori sterilizarea face ca albastrul de metilen să fie redus, prezentând o culoare portocalie medie. Pentru ca albastrul de metilen să se oxideze și să recupereze culoarea purpurie, trebuie amestecat ușor până la recuperarea culorii.
De asemenea, după sterilizare, colorantul poate precipita, deci trebuie amestecat bine înainte de a servi vasele Petri.
Referințe
- Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B și Velázquez O. 2009. Tehnici pentru analiza microbiologică a alimentelor. A 2-a ed. Facultatea de Chimie, UNAM. Mexic.
- Carranza C, León R, Falcón N, Neumann A, Kromm C. Caracterizarea și distribuția tulpinilor de Escherichia coli potențial patogenă izolate de puii broiler de la fermele de păsări din Peru. Rev. investiga. veterinar. Peru 2012 23 (2): 209-219. Disponibil pe: scielo.org.
- Laboratorii Conda SA Eosin și Agar albastru de metilen. 2010. Disponibil la adresa: condalab.com
- Laboratoarele Britannia. Levine EMB (cu Eosin și albastru de metilen) 2011. Disponibil la: britanialab.com
- Laboratoare BD. BD EMB Agar (Eosin Metilen Agar Blue), modificat. 2013. Disponibil la adresa: bd.com
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA