PATA DE GRÜNWALD-GIEMSA: RAȚIUNE, TEHNICĂ ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

May Grunwald-Giemsa sau Pappenheim pata este o tehnica de colorare diferentiata care amesteca Giemsa May Grünwald reactivi. Este utilizat pentru diferențierea celulelor sanguine normale și anormale în frotii de sânge periferic și măduvă osoasă, precum și pentru colorarea secțiunilor histologice și a probelor citologice.

Ambii reactivi - Giemsa și May Grünwald - sunt derivate din colorarea de tip Romanowsky, o tehnică care se bazează pe combinația de coloranți acide și bazici.

Frotiu care prezintă un neutrofil segmentat și un milleocit într-un caz de leucemie mieloidă cronică, colorat cu pata de Grünwald Giemsa. Dr. Ramon Simon-Lopez (https://es.m.wikipedia.org/wiki/Archivo:LMC-1.JPG) prin Wikipedia.org.

Giemsa a îmbunătățit tehnica prin stabilizarea amestecului de eozină, albastru de metilen și derivații acestora, cu glicerol. În schimb, May Grünwald folosește eozină și albastru de metilen, folosind metanolul ca solvent. Această combinație strategică a dat rezultate excelente.

Deși în ceea ce privește observația morfologiei celulare, acționează într-un mod similar cu petele Giemsa și Wright, această tehnică îmbunătățește cele anterioare prin rafinarea colorației paraziților care provoacă malaria, boala Chagas, leishmaniaza și tricomoniaza.

În plus, sa dovedit a fi o tehnică foarte utilă pentru studiul citologic al lichidului spermatic. S-a evidențiat nu numai prin arătarea caracteristicilor morfologice ale spermatozoizilor, dar și prin faptul că permite diferențierea leucocitelor, celulelor epiteliale și celulelor spermatogenezei cu o mare eficiență.

Bază

Tehnica urmărește fundamentul petelor Romanowsky, în care coloranții acidi au afinitate selectivă pentru componentele celulare de bază, iar componentele acide atrag petele de bază.

Explicat într-un alt mod, atât structurile celulare, cât și coloranții au sarcini electrice pozitive sau negative; cum ar fi acuzațiile care se resping și diferite taxe atrag.

De exemplu, coloranții de bază precum albastru de metilen sunt încărcați pozitiv și sunt atrași de structurile încărcate negativ. De aceea, acest colorant pătrunde nucleele bogate în ADN și ARN care au grupuri fosfat încărcate negativ.

Sunt de asemenea colorate granulele bazofilelor segmentate și citoplasmele celulelor albe din sânge mononucleare care conțin ARN.

De asemenea, colorantul acid are o sarcină negativă, motiv pentru care se leagă de structuri încărcate pozitiv, cum ar fi eritrocitele și granulele de eozinofile segmentate. În ceea ce privește granulele neutrofilelor segmentate, acestea fixează ambii coloranți.

Varietate de coloranți

În această tehnică, există o combinație de reacții între coloranții ortocromatici și metocromatici. Ortocromaticele (eozina și albastru de metilen) se leagă de structura celulară la care sunt înrudite și oferă o culoare stabilă care nu variază.

Pe de altă parte, metachromatele (derivații azurului albastru de metilen A și azur B) își schimbă culoarea inițială odată atașată la structura specifică și poate exista chiar o varietate de nuanțe.

În cele din urmă, pasul pe care îl face soluția May Grünwald necesită prezența apei, deoarece fără aceasta, colorantul va pătrunde în structuri, dar nu se va repara. Pentru ca acest lucru să se întâmple, colorantul trebuie să devină polar sau să ionizeze, și astfel să poată precipita și să se lege cu structurile conexe.

Tehnică

materiale

- Slide diapozitive.

- Poduri de colorare.

- Soluția May-Grünwald.

- Pata Giemsa.

- Apa distilata.

Poate soluția concentrată de vopsea Grünwald

Trebuie cantarite 0,25 g de eozină-albastru de metilen (pata conform lui Grünwald May) și dizolvate în 100 ml de metanol. Apoi, preparatul este amestecat timp de 1 oră și lăsat să se odihnească timp de 24 de ore. Când timpul a sosit, acesta este filtrat.

Pentru a aplica această tehnică, colorantul May Grünwald trebuie diluat după cum urmează: pentru 200 ml de colorant diluat, măsurați 30 ml soluție concentrată, adăugați 20 ml soluție tampon și 150 ml apă distilată ajustată la pH7.2-7.3 . Ulterior se amestecă și se filtrează.

Concentrat de pete Giemsa

0,5 g de azur-eozină-albastru de metilen (pata conform Giemsa) trebuie cântărit, dizolvat în 50 ml de metanol și 50 ml de glicerină adăugată la amestec.

Pentru a efectua tehnica, diluați 1:10 cu soluție tampon și lăsați-o să se odihnească timp de 10 minute. Poate fi filtrat dacă este necesar.

Prepararea soluției tampon la pH 7,2

Ar trebui cântărite:

- 40 mg fosfat de dihidrogen de potasiu (KH2PO4).

- 151 mg de hidrogen di-sodiu fosfat 12-hidrat (Na2HPO4).

Ambii compuși sunt dizolvați în 100 ml de apă.

Procedura de colorare a frotiei de sânge sau măduvă osoasă

Există două moduri: una clasică și una rapidă.

Modul clasic

1. Acoperiți frotiurile timp de 2 până la 3 minute cu soluția diluată May-Grünwald.
2. Spălați cu apă distilată tamponată pentru a îndepărta soluția anterioară.
3. Acoperiți cu aceeași soluție de spălare tamponată și lăsați timp de 1 minut. Ideea este că colorantul anterior este fixat pe structuri și că, în același timp, celulele sunt hidratate.
4. Adăugați 12 picături de tinctură de Giemsa diluată în apa tamponată și suflați pentru a amesteca și omogeniza. Lăsați-l să se odihnească 15-20 de minute.
5. Spălați frotiile cu apă distilată tamponată și puneți-le la uscat la aer.
6. Concentrați și vizualizați celulele sanguine pătate la un microscop ușor folosind obiectivul 40X. Dacă este necesar, 100X poate fi utilizat.

Mod rapid

1. Acoperiți frotiul cu o pată diluată de Grünwald diluată timp de 1 minut.
2. Se spală cu apă distilată tamponată.
3. Se acoperă cu apă tamponată și se lasă să se odihnească timp de 1 minut.
4. Se adaugă pata de Giemsa diluată și se lasă 5 minute.
5. Se spală cu apă distilată tamponată și se lasă să se usuce.

Tehnicile descrise aici sunt un ghid, dar trebuie avut în vedere faptul că procedurile și timpii de colorare variază în funcție de compania comercială care distribuie reactivii. Este recomandabil să urmați pașii strict indicați de fiecare casă comercială.

Tehnica de colorare a frotiurilor lichidului spermatic

1- Acoperiți frotiul cu un strat subțire de soluție May Grünwald timp de 4 minute.

2- Scoateți colorantul și spălați-l cu apă distilată.

3- Puneți un strat de Giemsa diluat (1:10) în apă distilată timp de 15 minute.

4- Scoateți colorantul și spălați-l cu apă distilată.

5- Lăsați să se usuce și observați la microscop.

Culori așteptate cu pata May Grünwald Giemsa

Specificații importante

Tehnica necesită ca reactivii și soluțiile de spălare să aibă un pH ajustat la 7,2 -7,3, astfel încât afinitățile coloranților pentru structurile celulare să nu fie distorsionate și culoarea finală preconizată să nu varieze.

Aplicații

Această tehnică este utilizată de laboratoarele clinice pentru a colora frotiile de sânge periferic și măduvă osoasă, secțiuni de țesuturi și citologii.

În domeniul hematologic, această tehnică are o importanță vitală în studiul anomaliilor celulelor din punct de vedere al formei, dimensiunii și numărului. Este un instrument foarte valoros pentru diagnosticul anumitor boli, precum leucemii și anemii.

În plus, este de o utilitate deosebită atunci când căutați paraziți în zonele hematologice (Plasmodium sp și Trypanosoma cruzi) sau histologice (Leishmanias sp).

Citologie vaginală

În ceea ce privește citologia vaginală, această tehnică este deosebit de avantajoasă pentru observarea Trichomonas vaginalis. Aceasta este o constatare importantă, deoarece prezența sa simulează carcinomul in imagini care dispar mai târziu la eliminarea parazitului.

Proba de spermă

A fost un instrument ideal pentru studiul probelor de spermă, deoarece oferă informații valoroase despre calitatea spermei.

Datele pe care le oferă are legătură cu numărul și morfologia, precum și cu celulele concomitente care pot fi prezente și care sunt de o importanță vitală, cum ar fi celulele germinale, leucocitele și celulele epiteliale.

Cu această analiză este posibilă descrierea anomaliilor observate la spermatozoizi la nivelul capului, gâtului, piesei medii și piesei principale.

În plus, ele pot ajuta, de asemenea, să prezinte cazuri de hemospermie (prezența globulelor roșii în spermă) și leucospermie sau piospermie (număr crescut de leucocite în spermă).

Referințe

1. Costamagna S, Prado M. Validarea testului proaspăt, May Grünwald-Giemsa și colorații Gram și medii de cultură pentru diagnosticul Trichomonas vaginalis. Parasitol. 2001; 25 (1-2): 60-64. Disponibil în: scielo.
2. Laboratorul Merck KGaA. Poate Grünwald eozin albastru de metilen pentru microscopie.
3. „Pata de mai-Grünwald-Giemsa”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 15 nov 2018, ora 14:37 UTC. 8 ianuarie 2019, 04:29: en.wikipedia.org
4. Laboratorul chimic din sticlă Panreac. Reactivi pentru tehnici histologice, hematologie și microbiologie. Disponibil la: glasschemicals.com
5. Retamales E, Manzo V. Recomandare pentru colorarea frotiilor de sânge pentru citirea hemogramei. Laboratorul biomedical național și de referință. Institutul de Sănătate Publică din Chile.
6. Sarabia L. Spermiograma conform criteriilor OMS. Programul de anatomie și biologie pentru dezvoltare. Scoala de Medicina. Universitatea din Chile. Disponibil la: pp.centramerica.com