MICROSCOP DE CÂMP ÎNTUNECAT: CARACTERISTICI, PĂRȚI, FUNCȚII - BIOLOGIE - 2025

Microscop cu câmp întunecat este un instrument optic special utilizat în anumite laboratoare. Acesta este rezultatul unei modificări efectuate la microscopie în câmp luminos. Microscopia cu câmp întunecat poate fi realizată prin iluminare trans sau prin iluminare epi.

Primul se bazează pe blocarea razelor de lumină care ajung direct în condensator, prin utilizarea dispozitivelor care se interpun înainte ca razele de lumină să ajungă în condensator.

Microscop de câmp întunecat / Treponemele observate la microscopurile de câmp întunecat. Sursa: Dietzel65 / Judith Miklossy, Sandor Kasas, Anne D Zurn, Sherman McCall, Sheng Yu și Patrick L McGeer

Câmpul întunecat cu lumină transmisă face posibilă evidențierea structurilor, putând observa particule extrem de subțiri. Structurile sunt văzute cu o anumită refracție sau luminozitate pe un fundal întunecat.

În timp ce efectul epi-iluminare este obținut cu lumina incidentă sau oblică. În acest caz, microscopul trebuie să fie echipat cu un filtru special în formă de semilună.

În cazul iluminării incidente, structurile observate se caracterizează prin prezentarea unui efect vizual în relief ridicat. Această proprietate face posibilă evidențierea marginilor particulelor suspendate.

Spre deosebire de microscopia cu câmp luminos, microscopia cu câmp întunecat este utilă în special pentru vizualizarea frescelor care conțin particule suspendate, fără niciun fel de colorare.

Cu toate acestea, prezintă mai multe dezavantaje, inclusiv faptul că nu poate fi utilizat pentru preparate uscate sau preparate pătate. Nu are o rezoluție bună. În plus, pentru a asigura o imagine bună, deschiderea numerică a obiectivelor nu o poate depăși pe cea a condensatorului.

caracteristici

Compoziția microscopului cu câmp întuneric prezintă modificări importante în ceea ce privește câmpul luminos, deoarece elementele fundamentale ale ambelor microscopii sunt opuse.

În timp ce în câmpul luminos razele de lumină sunt concentrate astfel încât acestea să treacă direct prin probă, în câmpul întunecat grinzile sunt împrăștiate astfel încât numai grinzile oblice ajung la probă. Acestea sunt apoi dispersate de aceeași probă, transmitând imaginea către obiectiv.

Dacă ar fi să vă concentrați pe o diapozitivă fără un eșantion, s-ar observa un cerc întunecat, deoarece fără un eșantion nu există nimic care să împrăștie lumina spre obiectiv.

Pentru a obține efectul dorit în câmpul vizual, este necesară utilizarea condensatoarelor specifice, precum și diafragme care ajută la controlul fasciculelor de lumină.

Într-un câmp de vedere întunecat, elementele sau particulele în suspensie apar luminoase și refractive, în timp ce restul câmpului este întunecat, făcând un contrast perfect.

Dacă se utilizează lumină oblică sau incidentă, se obține un efect de margine cu relief mare în structurile observate.

Piese ale microscopului de pe întuneric

Sursa: amazon.com

-Sistem mecanic

Tub

Este dispozitivul prin care imaginea reflectată și mărită de obiectiv se deplasează până când ajunge la ocular sau ocular.

agitație

Este sprijinul în care se află diferitele obiective. Țintele nu sunt fixate, ele pot fi eliminate. Revolverul poate fi rotit în așa fel încât ținta să poată fi modificată atunci când operatorul are nevoie de ea.

Șurub cu macro

Acest șurub este utilizat pentru focalizarea epruvetei, este deplasat înainte sau înapoi pentru a muta epruvetele mai aproape de sau mai departe de țintă, iar mișcarea este grotescă.

Șurub micrometru

Șurubul micrometrului este deplasat înainte sau înapoi pentru a muta epruvetele mai aproape de sau mai departe de țintă. Șurubul micrometric este utilizat pentru mișcări foarte fine sau delicate, aproape imperceptibile. Este cel care atinge accentul final.

Platen

Este suportul în care specimenul se va sprijini pe diapozitiv. Are o deschidere centrală prin care trec fasciculele de lumină. Atunci când șuruburile macro și micrometru sunt mutate, treapta urcă sau coboară, în funcție de mișcarea șurubului.

Mașina

Transportul permite parcurgerea întregului eșantion cu obiectivul. Mișcările permise sunt înapoi și înapoi și invers, și de la stânga la dreapta și invers.

Ținând forceps

Acestea sunt situate pe scenă, sunt confecționate din metal și sunt destinate să țină toboganul pentru a împiedica rularea acestuia în timpul observației. Este important ca eșantionul să rămână fix în timpul observării. Elementele de fixare sunt dimensionate exact pentru a primi diapozitivul.

Braț sau mâner

Brațul unește tubul cu baza. Este locul unde trebuie ținut microscopul când acesta va fi mutat dintr-o parte în alta. Cu o mână brațul este prins și baza este ținută cu cealaltă mână.

Baza sau piciorul

După cum îi spune și numele, este baza sau suportul microscopului. Datorită bazei, microscopul este capabil să rămână fix și stabil pe o suprafață plană.

-Sistemul optic

goluri

Au formă cilindrică. Au un obiectiv în partea de jos care mărește imaginea care provine din eșantion. Obiectivele pot fi diferite măriri. Exemplu: 4.5X (lupa), 10X, 40X și 100X (obiectiv de imersiune).

Obiectivul de imersiune este numit astfel, deoarece necesită plasarea a câteva picături de ulei între obiectiv și eșantion. Celelalte sunt numite ținte uscate.

Obiectivele sunt tipărite cu caracteristicile pe care le au.

Exemplu: marca producătorului, corectarea curburii câmpului, corectarea aberațiilor, mărirea, deschiderea numerică, proprietăți optice speciale, mediu de imersie, lungimea tubului, distanța focală, grosimea capacului de acoperire și inelul de cod culoare.

Lentilele au o lentilă frontală situată în partea inferioară și una din spate situată în partea superioară.

Oculare

Microscoapele vechi sunt monoculare, adică au un singur ocular, iar microscopele moderne sunt binoculare, adică au două oculare.

Ocularele sunt cilindrice și au formă scobită. Acestea au în interior lentile convergente care extind imaginea virtuală creată de obiectiv.

Ocularul se alătură tubului. Acesta din urmă permite ca imaginea transmisă de obiectiv să ajungă la ocular, ceea ce o va mări din nou.

Ocularul din partea superioară conține o lentilă numită ocular și în partea inferioară găzduiește o lentilă numită colector.

De asemenea, are o diafragmă și în funcție de locul în care se află va avea un nume. Cele care sunt situate între ambele lentile se numește ocular Huygens și dacă este situat după cele 2 lentile se numește ocular Ramsden. Deși există multe altele.

Mărirea ocularului variază între 5X, 10X, 15X sau 20X, în funcție de microscop.

Operatorul poate vizualiza eșantionul prin ocular sau oculare. Unele modele sunt prevăzute cu un inel pe ocularul stâng care este mobil și permite ajustarea imaginii. Acest inel reglabil se numește inel diopter.

-Sistem de iluminare

Lampă

Este sursa de iluminare și este amplasată în partea de jos a microscopului. Lumina este halogenă și este emisă de jos în sus. În general, lampa pe care au microscopele este de 12 V.

Diafragmă

Diafragma microscopelor cu câmp întunecat nu are iris; în acest caz, acest lucru împiedică razele care provin de la lampă să ajungă direct la probă, numai grinzile oblice vor atinge specimenul. Aceste grinzi care sunt dispersate de structurile prezente în eșantion sunt cele care vor trece ținta.

Așa se explică de ce structurile arată strălucitoare și luminoase într-un câmp întunecat.

Condensator

Condensatorul unui microscop cu câmp întunecat diferă de cel al unui câmp luminos.

Există două tipuri: condensatoare de refracție și condensatoare de reflexie. Acesta din urmă, la rândul său, este împărțit în două categorii: paraboloizi și cardioizi.

Condensatoare de refracție

Acest tip de condensator are un disc care este interpus pentru a refracta razele de lumină, acesta poate fi situat deasupra lentilei frontale sau pe partea din spate.

Este foarte ușor să improvizați un condensator de acest tip, deoarece este suficient să așezați în fața lentilei frontale a condensatorului un disc format din carton negru mai mic decât obiectivul (diafragma).

Un microscop luminos de câmp luminos poate fi transformat într-un microscop cu câmp întuneric folosind acest vârf.

Condensatoare de reflexie

Sunt cele utilizate de microscopurile stereoscopice. Există două tipuri: paraboloide și cardioide.

• Paraboloizi: au un tip de curbură numit paraboloizi datorită asemănării lor cu o parabolă. Acest tip de condensator este utilizat pe scară largă în studiul sifilisului, deoarece permite observarea Treponemelor.
• Cardioid : curbura condensatorului este similară cu o inimă, de unde și denumirea de „cardioid”, condensatorul purtând același nume. Are o diafragmă reglabilă.

Caracteristici

-Este utilizat pentru a investiga prezența Treponema pallidum la probele clinice.

-Este util și pentru a observa Borrelias și Leptospiras.

-Este ideal pentru observarea comportamentului in vivo al celulelor sau microorganismelor, atât timp cât nu este necesar să detaliați structuri specifice.

-Este ideal pentru a evidenția capsula sau peretele microorganismelor.

Avantaj

-Microscoapele cu câmp negru cu un condensator de refracție sunt mai ieftine.

-Utilizarea este foarte utilă pentru mărirea 40X.

-Sunt ideale pentru observarea probelor care au un indice de refracție similar cu mediul în care se găsesc. De exemplu, celulele din cultură, drojdiile sau bacteriile motile, cum ar fi spirochete (Borrelias, Leptospiras și Treponemas).

-Celula poate fi observată in vivo, ceea ce permite evaluarea comportamentului acesteia. De exemplu, mișcarea browniană, mișcarea flagelelor, mișcarea prin emiterea de pseudopode, procesul de divizare mitotică, eclozarea larvelor, înmugurirea drojdilor, fagocitoza, printre altele.

-Pentru a evidenția marginile structurilor, de exemplu capsula și peretele celular.

-Este posibilă analiza particulelor dezagregate.

-Utilizarea coloranților nu este necesară.

Dezavantaje

-Se va avea grijă specială la montarea preparatelor, deoarece, dacă acestea sunt prea groase, nu se va observa bine.

-Rezoluția imaginilor este scăzută.

-Microscoapele cu câmpuri negre care folosesc condensatoare refractive au un procent foarte redus de luminozitate.

-Pentru a îmbunătăți calitatea imaginii cu un obiectiv de imersiune (100X), este necesară reducerea diafragmei numerice a obiectivelor și astfel creșterea celei a conului de iluminare. Pentru aceasta, încorporarea unei diafragme suplimentare care poate regla diafragma numerică a obiectivului este esențială.

-Nu puteți vizualiza preparate uscate sau preparate colorate, cu excepția cazului în care sunt coloranți vitali.

-Nu permite vizualizarea anumitor structuri, în special a celor interne.

-Microscoapele cu câmpul scund sunt mai scumpe.

Referințe

1. "Microscop de câmp întunecat." Wikipedia, enciclopedia gratuită. 26 august 2018, 00:18 UTC. 30 iunie 2019, 01:06
2. Agudelo P, Restrepo M, Moreno N. Diagnosticul leptospirozei din probe de sânge și cultură prin observație la un microscop de câmp întunecat. Biomedicale. 2008; 28 (1): 7-9. Disponibil de pe: scielo.org
3. Rodríguez F. Tipuri de microscopuri optice. Blog de laborator clinic și biomedical. Disponibil la adresa: franrzmn.com
4. Colaboratorii Wikipedia. Microscopie de câmp întunecat. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 19 octombrie 2018, 00:13 UTC. Disponibil pe: wikipedia.org
5. Bhatia M, Umapatie B, Navaneeth B. O evaluare a microscopiei pe câmp întunecat, a culturii și a truselor serologice comerciale în diagnosticul de leptospiroză. Indian J Med Microbiol. 2015; 33 (3): 416-21. Disponibil în: nlm.nih.gov