AGAR ESCULIN BILIAR: JUSTIFICARE, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Biliar esculina agarul este selectiv și cultură solid mediu diferențial. Este utilizat ca test de diagnostic pentru a determina capacitatea unui anumit microorganism de a crește într-un mediu care conține bilă și, de asemenea, de a descompune glucoza esculină în esculetină și glucoză.

Acest test de diagnostic este utilizat pentru a diferenția speciile din genul Streptococcus aparținând grupului D (esculin biliar pozitiv), de la alte grupuri de Streptococcus care reacționează negativ la acest test.

Placă agar de esculină biliară, însămânțată cu o tulpină de Enterococcus (test pozitiv). Sursa: Nu este furnizat niciun autor care poate fi citit de mașină. Filipinjl și-a asumat (bazat pe revendicări de copyright)

Trebuie remarcat faptul că unii Streptococcus din grupul viridans pot hidroliza esculina, dar nu sunt capabili să crească în prezența bilei la o concentrație de 40%, prin urmare, în acest mediu reacția pentru acest grup este negativă.

Pe de altă parte, mediul esculin biliar este util și pentru diagnosticarea Listeria monocytogenes sau a speciilor Aerococcus sp, deoarece aceste microorganisme sunt pozitive cu esculină biliară.

Agra biliară Esculin este compusă din peptonă, extract de carne, bilă de boi, esculină, citrat de fier, agar și apă distilată. Unele case comerciale includ azida de sodiu în compoziția mediului.

Mediul poate fi preparat în laborator dacă aveți toți compușii separat sau poate fi preparat din mediul deshidratat comercial.

Bază

Mediul esculin biliar conține peptone și extract de carne, ambii compuși furnizează nutrienții necesari pentru creșterea microorganismelor.

De asemenea, conține esculină; Acest compus este o glicozidă formată prin unirea unei monosacharide simple (glucoză) cu un compus numit 6,7-dihidroxicumarină sau esculetină (agluconă), legată de o legătură acetală sau glucozidică.

Testul se bazează pe demonstrarea dacă bacteriile sunt capabile să hidrolizeze esculina. Dacă apare acest lucru, esculina se descompune în esculetină și glucoză. Esculetina reacționează cu fierul prezent în mediu, formând un compus maro închis, aproape negru.

Aceasta înseamnă că citratul feric acționează ca un dezvoltator de reacție. Această caracteristică face din Bile Esculin Agar un mediu diferențial.

La rândul său, bila este un inhibitor care împiedică creșterea unor microorganisme, prin urmare, bacteria, înainte de a despica esculina, trebuie să poată crește în prezența bilei. Prin urmare, acest mediu este considerat selectiv.

Bacteriile care se pot dezvolta în acest mediu sunt în principal cele care trăiesc în mediul intestinal.

În acest sens, unele companii comerciale adaugă azid de sodiu la mediu pentru a inhiba și mai mult creșterea bacililor Gram negatici enterici, crescând selectivitatea mediului pentru creșterea Streptococcus.

În cele din urmă, agarul dă consistență solidă mediului, iar apa este solventul compușilor.

preparare

Pregătirea de casă a agarului esculin biliar

A cantari:

5 g peptone

3 g extract de carne

40 g bilă de vită

1 g de esculină

0,5 g citrat de fier

15 g agar

1000 ml de apă distilată

În cazul în care se adaugă azid de sodiu, se cântărește 0,25 g / litru și se adaugă la amestec.

Se dizolvă componentele în litrul de apă distilată, se încălzește până când compușii sunt dizolvați complet. Distribuie 5 ml în eprubete cu capac cu șurub de 16 x 125 mm. Autoclave la 121 ° C, 15 kilograme de presiune timp de 15 minute.

Scoateți din autoclav și înclinați tuburile pe un suport, astfel încât agarul să se solidifice într-un cioc larg de flaut.

Păstrați la frigider până la utilizare. Aduceți la temperatura camerei înainte de semănat.

De asemenea, pot fi preparate plăci de agar esculin biliar; în acest caz, întregul amestec este autoclavat într-un balon și distribuit ulterior în vase Petri sterile. Lasă-le să se solidifice și păstrează-l în frigider.

PH-ul mediului trebuie să fie 6,6 ± 0,2.

Prepararea agarului esculin biliar dintr-un mediu comercial

Cantareste cantitatea specificata de insert. Aceasta poate varia de la o casă de afaceri la alta. După aceea, procedați la fel ca procedura explicată mai sus.

PH-ul mediului trebuie să fie 6,6 ± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar mediul pregătit este chihlimbar închis.

Mediu comercial esculin biliar. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

Aplicații

Mediul esculin biliar este utilizat în principal pentru diferențierea Streptococului din grupa D (esculină biliară pozitivă) de restul grupurilor Streptococcus (esculină biliară negativă).

Combinând testul de creștere a bulionului hipersaltat cu testul de esculină biliară se poate identifica un grup special de streptococ din grupa D numit Enterococcus.

Acest grup special de Streptococcus aparține grupei D din genul menționat mai sus și sunt capabili să hidrolizeze esculina în prezența bilei la fel ca restul membrilor grupului D, dar sunt, de asemenea, capabili să se dezvolte într-un mediu hipersaltat (BHI cu clorură de 6,5% sodiu), o proprietate care face diferența.

Prin urmare, Streptococii care hidrolizează bilia esculinei, dar care nu cresc în bulion hipersaltat sunt numiți Streptococi non-enterococci.

însămânțat

Inoculați mediul de preferință dintr-un bulion pur Todd-Hewitt 24 ore.

Se adaugă 2 picături pe suprafața mediului cu o pipetă Pasteur și se întinde în mediu cu o buclă de platină.

Se incubează la 35 ° C timp de 48 de ore, în timp ce timpul de incubație este respectat, se poate monitoriza pentru a vedea dacă există o reacție pozitivă. Dacă la sfârșitul timpului reacția rămâne negativă, poate fi incubată până la 72 de ore.

Interpretare

Reacție pozitivă : apariția unei culori brune închise, aproape negre în ciocul flautului (în cazul testului cu tubul) sau înnegrirea agarului în jurul coloniilor (în cazul testului cu plăci).

Reacție negativă : nu are loc înnegrirea mediului sau există un aspect negru în mai puțin de jumătate din tub după 72 de ore de incubare. Pe de altă parte, creșterea bacteriană în mediu fără apariția culorii negre ar trebui considerată un test negativ.

QA

Pentru a evalua calitatea mediului, o tulpină de Enterococcus faecalis ATCC 29212 trebuie să fie disponibilă ca un control pozitiv și o tulpină Streptococcus care nu aparține grupului D ca martor negativ.

limitări

-Media care nu conține azidă de sodiu permite creșterea bacililor Gram negatici enterici. Unele dintre ele pot înnegri mijlocul.

- Unele case comerciale adaugă o concentrație scăzută de bilă (10%) și din acest motiv unele Streptococ care nu aparțin grupului D se pot dezvolta în mediu și hidrolizează esculina, ceea ce poate genera erori de interpretare.

Referințe

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Lab. Britannia. Bilă esculină cu agar azidic. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
5. "Bile Esculin Agar." Wikipedia, enciclopedia gratuită. 22 august 2017, ora 17:30 UTC. 22 Apr 2019, 17:35. es.wikipedia.org.
6. Laboratorii Bd. Bile Esculin Agar Slants. 2015. Disponibil la adresa: bd.com
7. Laboratoare Neogen. Agar esculin biliar. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com