AGAR CLED: JUSTIFICARE, UTILIZĂRI ȘI PREPARARE - BIOLOGIE - 2025

Agarul CLED (Cistina-Lactoză-Electrolit-Deficient) este un diferențial solid mediu de cultură, utilizat pentru diagnosticarea infecțiilor tractului urinar. Compoziția mediului de cultură este concepută pentru o bună creștere a agenților patogeni urinari și este ideală pentru cuantificarea unităților formatoare de colonii (CFU).

Mediul de cultură CLED nu este selectiv, deoarece microorganismele Gram negative și Gram pozitive pot crește în el. Dar aceasta nu este o problemă, deoarece majoritatea UTI sunt cauzate de un singur tip de microorganism.

Agar CLED

În cazul infecțiilor polimicrobiene, se pot obține 2 sau 3 bacterii diferite, dar este foarte rară și de cele mai multe ori este probă contaminată.

Printre bacteriile Gram negative care pot crește în acest mediu se numără bacilii aparținând familiei Enterobacteriaceae și alți bacili enterici, uropatogenii izolați cel mai frecvent în probele de urină fiind următoarele: Escherichia coli, Klebsiella pneumoniae, Proteus mirabilis, Morganella morganii, Pseudomonas aeruginosa, printre altele.

De asemenea, printre bacteriile Gram pozitive care pot crește în acest mediu se numără Staphylococcus aureus, Staphylococcus saprophyticus, Enterococcus faecalis, Streptococcus agalactiae, Corynebacterium sp, Lactobacillus sp și chiar drojdiile, precum complexul Candida albicans, pot crește.

Cu toate acestea, datorită compoziției chimice a mediului, nu permite creșterea unor agenți patogeni genitourinari solicitați, precum Neisseria gonorrhoeae, Gardnerella vaginalis, printre altele.

Motivul CAR Agar

Mediul de cultură CLED are ca sursă de energie extractul de carne, hidrolizatul pancreatic de cazeină și hidrolizatul de gelatină. Ele furnizează substanțele nutritive pentru dezvoltarea bacteriilor nedemne.

De asemenea, conține cistină, un aminoacid care permite creșterea coliformelor, care se distinge prin mărimea lor mică.

De asemenea, conține lactoză ca carbohidrat fermentabil, din acest motiv acest mediu este diferențial; putând distinge bacteriile care fermentează de cele care nu fermentează lactoză.

Bacteriile de fermentare determină modificarea pH-ului mediului datorită producției de acizi, dezvoltând colonii galbene, în timp ce bacteriile care nu fermentează nu generează modificări ale mediului, prin urmare ele iau culoarea agarului original, verde.

Reacția de fermentație este revelată datorită prezenței indicatorului de pH, care în acest mediu este albastru de bromotimol.

Pe de altă parte, concentrația scăzută de electroliți a mediului inhibă creșterea invazivă tipică a genului Proteus, numit efectul roșu. Acest lucru generează un avantaj față de alte medii, deoarece permite numărarea CFU-urilor, inclusiv dacă este prezent genul Proteus.

Cu toate acestea, concentrația scăzută de electroliți inhibă creșterea unor specii din genul Shigella, acesta fiind un dezavantaj în comparație cu alte medii.

Argumentare pentru agar CLED (Bevis)

Există o variantă sau o modificare a acestui mediu realizată de Bevis, care a încorporat fucsina acidă (indicatorul lui Andrade) în compoziția originală. Acționează în combinație cu bromotimol albastru pentru a diferenția fermentarea de bacteriile care nu fermentează.

Diferența dintre mediu convențional și modificat este culoarea pe care o iau coloniile. În cazul bacteriilor care fermentează lactoza, coloniile capătă o culoare roșiatică-portocalie cu un halou roz sau roșu, în timp ce cele care nu fermentează sunt gri-albăstrui.

Aplicații

Agar CLED este utilizat exclusiv pentru semănarea probelor de urină. Utilizarea acestui mediu este frecventă în special în laboratoarele europene, în timp ce în America este mai puțin utilizată.

Colectarea de eșantioane trebuie să îndeplinească anumiți parametri pentru a obține rezultate fiabile, inclusiv:

• Nu luați antibiotice înainte de prelevare.
• De preferat, luați urina în primul rând dimineața, deoarece este mai concentrat, când nu este posibil să luați proba prin metode invazive.
• Spălați organele genitale bine înainte de a lua proba.
• Aruncați primul flux de urinare și apoi așezați recipientul.
• Colectați 25-30 ml de urină într-un recipient steril bine marcat.
• Du-te imediat la laborator înconjurat de gheață.
• Acesta trebuie prelucrat în 2 ore de la eliberare sau refrigerat la 4 ° C pentru maxim 24 de ore.

Semănarea probelor de urină

Proba de urină trebuie diluată 1:50.

Pentru diluare, puneți 0,5 ml de urină pentru pacient și diluați cu 24,5 ml soluție fiziologică sterilă.

Măsurați 0,1 ml urină diluată și răspândirea suprafeței cu o spatulă drigalski pe mediu CLED. Aceasta este cea mai bună metodă de însămânțare pentru numărarea coloniilor. Din acest motiv este utilizat în probe de urină, deoarece rezultatele trebuie exprimate în CFU / ml.

Pentru a cuantifica coloniile obținute, procedați după cum urmează: numărați coloniile pe farfurie și multiplicați cu 10 și apoi cu 50. Aceasta vă oferă cantitatea de CFU / ml de urină.

Interpretare

Numără peste 100.000 CFU / ml -– Indică infecția urinară

Numără sub 1000 CFU / ml-– Fără infecție

Numără între 1000-10.000 CFU / ml -– Contaminare îndoielnică, posibilă, repetarea eșantionării.

ID-ul

Coloniile cultivate pe agar CLED ar trebui să aibă un Gram și în funcție de caracteristicile morfotintoriale ale microorganismului se realizează o anumită subcultură.

De exemplu, dacă este un bacil Gram negativ, acesta va fi semănat pe un agar MacConkey, unde este coroborată sau nu fermentația lactozei. În plus, un agar nutritiv este atașat pentru a efectua testul oxidazei.

În cazul în care Gram dezvăluie cocci Gram pozitivi, acesta poate fi subcultivat pe agar de manitol sărat și pe agar nutritiv. În acesta din urmă, testul de catalază este efectuat. În cele din urmă, dacă se observă drojdii, se va semăna cu agoura Sabouraud.

Multe laboratoare evită utilizarea mediului CLED și preferă să folosească doar agar de sânge, MacConkey și agar de nutrienți pentru semințele de urină.

preparare

Într-un balon cu un litru de apă distilată se dizolvă 36,2 g de pulbere de agar CLED. După 5 minute în picioare, încălziți agarul resuspendat, amestecând constant la fierbere timp de 1 minut.

Apoi sterilizați la 121 ° C timp de 15 minute în autoclav. La sfârșitul timpului, este îndepărtat din autoclav și lăsat să se răcească la o temperatură de 45 ° C. Ulterior, se servesc 15-20 ml în fiecare farfurie Petri sterilă.

Procedura de servire a plăcii trebuie să fie efectuată în interiorul unei hote cu flux laminar sau în fața arzătorului Bunsen pentru a evita contaminarea.

Plăcile servite sunt lăsate să se solidifice, aranjate într-un suport inversat și păstrate la frigider (2-8 ° C) până la utilizare.

PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 7,3 ± 0,2.

Referințe

1. Recomandări pentru diagnosticul microbiologic al infecției urinare. chil. infectol. 2001; 18 (1): 57-63. Disponibil pe: scielo.org.
2. Panchi J. Identificarea agentului microbian care cauzează infecții ale tractului urinar la pacienții internați supuși cateterismului vezicii urinare. 2016. Muncă licențiată pentru a se califica pentru gradul de licență clinică. Universitatea Tehnică din Ambato. Ecuador.
3. Laboratoarele Britannia. Mediu CLED. Disponibil la: britanialab.com.
4. Laboratoarele Renylab Instrucțiuni de utilizare, CLED Agar. 2013 Disponibil la adresa: es.renylab.ind.br.
5. Laboratoare cultivate. Manual de bază de microbiologie. Disponibil la adresa: ictsl.net.
6. Muñoz P, Cercenado E, Rodríguez-Créixems M, Díaz MD, Vicente T, Bouza E. Opțiunea de agar CLED în rutina de cultură a urinei. O evaluare prospectivă și comparativă. Diagnosticul Microbiol Infect Dis. 1992; 15 (4): 287-90.
7. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinică practică. Universitatea din Cadiz, ediția a II-a. Serviciul de publicații UCA