BULION TIOGLICOLAT: RAȚIUNI, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Bulion tioglicolat este un mediu îmbogățit consistență fluidă. Este cunoscut de acronimul FTM pentru acronimul său în engleză Fluid Thioglycollate Medium. Acesta a fost creat de Brewer și modificat în 1944 de Vera, care a adăugat peptonă cazeinei.

Acest mediu are un potențial redus de oxidare, de aceea nu este recomandat pentru dezvoltarea bacteriilor aerobice stricte, dar este ideal pentru recuperarea bacteriilor aerobice, anaerobe stricte și neemandante.

Bulion de tioglicolat fără indicator. Prezintă secreție vaginală. Sursa: Bobjgalindo

Performanța ridicată observată cu acest mediu în izolarea și recuperarea unei largi varietăți de microorganisme, a făcut-o acceptată de Farmacopeia Statelor Unite (USP), de Asociația Oficială a Chimiștilor Agricoli (AOAC) și de Farmacopeea Europeană ( EP).

Aceste organizații îl recomandă pentru testarea controlului de sterilitate a produselor farmaceutice și pentru îmbogățirea diferitelor tipuri de probe.

Cado tioglicolatul este compus din extract de drojdie, digestie pancreatică de cazeină, dextroză anhidră, L-cistină, clorură de sodiu, tioglicolat de sodiu, resazurin și agar în cantitate mică.

Există mai multe versiuni ale acestui mediu, printre care se numără: bulion de tioglicolat cu indicator, bulion de tioglicolat fără indicator, bulion de tioglicolat cu indicator îmbogățit cu hemin și vitamina K ₁ și bulion de tioglicolat cu carbonat de calciu.

În mod special, varianta de bulion de tioglicolat îmbogățită cu hemin și vitamina K servește la îmbunătățirea creșterii anaerobelor rapide, iar varianta de bulion de tioglicolat care conține carbonat de calciu este utilă pentru a contracara acizii produși în timpul creșterii microbiene.

Bază

Bulionul de tioglicol este considerat un mediu de îmbogățire neselectiv, deoarece permite creșterea majorității bacteriilor care nu sunt fastidioase. Cerințele nutriționale sunt furnizate de extractul de drojdie, digestia pancreatică și glucoză.

Pe de altă parte, acest mediu, deși este un bulion, conține o cantitate mică de agar; Aceasta înseamnă că are un potențial scăzut de oxidare, datorită faptului că încetinește intrarea oxigenului, astfel încât oxigenul scade pe măsură ce intră mai adânc în tub.

Acesta este motivul pentru care acest mediu este ideal pentru dezvoltarea bacteriilor aerobice, microaerofile și anaerobe cu caracter strict, ultimele 2 fără a fi nevoie să se incubeze în aceste condiții. Același mediu reglează cantitatea de oxigen din mediu, fiind absent la partea inferioară a tubului și în cantitate suficientă la suprafață.

De asemenea, tioglicolatul și L-cistina acționează ca agenți reducători, contribuind la prevenirea acumulării de substanțe dăunătoare dezvoltării bacteriene, cum ar fi peroxidul. În plus, acești compuși conțin grupe sulfhidril (-SH-), neutralizând efectele inhibitoare ale derivaților de mercur, arsenicale, printre alte metale grele.

La rândul său, resazurin este un indicator al reducerii oxizilor. Această substanță este incoloră atunci când este redusă și roz atunci când este oxidată. Există variante de bulion tiogliccolat indicator și neindicator. Utilizarea acesteia va depinde de tipul eșantionului și de preferințele laboratorului.

Între timp, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic al bulionului de tioglicolat și utilizarea glucozei sub formă anhidră previne excesul de umiditate în mediul deshidratat.

preparare

Bulion de tioglicolat cu indicator

Se cântărește 29,75 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Amestecul este lăsat să stea aproximativ 5 minute. Aduceți la o sursă de căldură și agitați frecvent până la dizolvarea completă.

Se toarnă mediul în eprubete și se autoclavează la 121 ° C timp de 15 minute. Se lasă să se răcească înainte de utilizare. Verificați insertia casei comerciale pentru conservarea acesteia. Unii recomandă păstrarea la temperatura camerei într-un loc întunecat, iar alții într-un frigider protejat de lumină.

PH-ul mediului preparat este de 7,1 ± 0,2.

Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar mediul preparat este chihlimbar deschis cu oarecare opalescență.

Bulion de tioglicolat cu indicator îmbogățit cu hemin și vitamina K

Există medii comerciale care conțin deja hemin și vitamina K ₁ , în special pentru cultivarea anaerobelor.

Dacă nu aveți mediul îmbogățit pentru anaerobe, puteți pregăti bulionul de tioglicolat de bază. Pentru aceasta, _{se adaugă} 10 mg de clorhidrat de hemin și 1 mg de vitamina K ₁ pentru fiecare litru de mediu. Cu toate acestea, dacă sângele sau serul se adaugă la bulionul de tioglicolat, adăugarea de hemin sau vitamina K nu este necesară.

Bulion de tioglicolat cu carbonat de calciu

Vine comercial și este pregătit urmând instrucțiunile de pe insert.

Bulion de tioglicolat fără indicator

Aceasta are aceeași compoziție a tiogliccolatului de bază, dar nu conține rezazurin.

Se cântărește 30 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Restul preparatului este același cu cel descris în bulionul de tioglicolat cu indicator.

Utilizare

Bulionul de tioglicolat este util pentru îmbogățirea probelor clinice, în special a celor din siturile sterile. De asemenea, este util pentru probe non-clinice, precum produse cosmetice, medicamente etc.

Pentru inocularea eșantioanelor lichide (cum ar fi CSF, lichid sinovial, printre altele), probele sunt mai întâi centrifugate și apoi se iau 2 picături de sediment și se introduc în bulionul de tioglicolat. Se incubează la 35 ° C timp de 24 de ore. Dacă în acest timp nu există creștere (turbiditate), aceasta este incubată până la maximum 7 zile.

Dacă proba este prelevată cu un tampon, mediul de cultură este inoculat mai întâi în plăci și în final tamponul este introdus în bulion, porțiunea proeminentă este divizată și tubul este acoperit, lăsând tamponul în interior. Se incubează la 35 ° C timp de 24 de ore, maxim 7 zile.

Pentru probe solide, omogenizați în soluție salină fiziologică (SSF) și apoi inocați bulionul de tioglicolat cu 2 picături de suspensie.

Poate fi folosit uneori ca mediu de transport pentru probe în care se suspectează anaerobe stricte sau ca bulion de îmbogățire a copiilor de rezervă.

Varianta de bulion de tioglicolat cu carbonat de calciu este utilizată pentru menținerea tulpinilor de control mai mult timp, deoarece are capacitatea de a neutraliza acizii produși prin utilizarea glucozei; Acești acizi sunt toxici pentru anumite bacterii.

Creșterea bulionului de tioglicolat va fi observată de turbiditatea mediului. Se recomandă efectuarea unei colorații Gram și, ulterior, subcultură în medii neselective și selective, în funcție de tipul de probă și de microorganismele suspectate.

QA

Pentru controlul sterilității, se recomandă incubarea unuia sau a două bulionuri fără inoculare. Rezultatul scontat este un bulion clar, fără nicio schimbare de culoare, deși este normal să se vadă o ușoară culoare roz pe suprafața tubului.

Pentru controlul calității, trebuie inoculate între 10 - 100 CFU de tulpini de control certificate, cum ar fi Staphylococcus aureus ATCC 6538, Micrococcus luteus ATCC 9341, Bacillus subtilis ATCC 6633, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Clostridium sporogenes ATCC 19404, Clostrides 11437 spogen Bacteroides vulgatus ATCC 8482.

Se incubează la 30-35 ° C în aerobioză timp de 24 de ore până la maximum 3 zile, deoarece aceste microorganisme sunt în creștere rapidă.

O dezvoltare bună este așteptată în toate cazurile, cu excepția Micrococcus luteus și Bacillus subtilis, unde poate exista o dezvoltare moderată.

Pentru controlul calității bulionului de tioglicolat îmbogățit cu hemin și vitamina K ₁ , se pot folosi tulpinile de control Bacteroides vulgatus ATCC 8482, Clostridium perfringens ATCC 13124 și Bacteroides fragilis ATCC 25285. Rezultatul scontat este o creștere satisfăcătoare.

recomandări

-Ocazional se poate observa că suprafața bulionului de tioglicolat cu indicator devine roz; Acest lucru se datorează oxidării mediului. Dacă culoarea roz acoperă 30% sau mai mult din bulionul total, poate fi încălzită într-o baie de apă timp de 5 minute, răcită din nou și folosită.

Acest lucru va îndepărta oxigenul absorbit, readucând mediul la culoarea inițială. Această procedură poate fi făcută o singură dată.

-Pentru a îmbunătăți creșterea bacteriilor aerobe, incubați cu capacul ușor desfăcut. Cu toate acestea, este de preferat să folosiți în acest scop un bulion de infuzie de inimă cerebrală sau un bulion de soia tripticase pentru dezvoltarea corectă a aerobilor stricți.

-Gelarea mediului sau supraîncălzirea trebuie evitată, deoarece ambele condiții afectează mediul.

-Lumină directă dăunează mediului de cultură, trebuie păstrată protejată de lumină

Referințe

1. Laboratoarele Britannia. Tizioglicolat USP cu indicator. 2015. Disponibil la adresa: labBritania.com.
2. Laboratoarele Chios Sas. 2019. Bulion de tioglicolat. Disponibil la adresa: quios.com.co
3. Laborator mediu de tioglicolat cu fluide BD (FTM). 2003. Disponibil la adresa: bd.com/Europe
4. Medii BBL preparate în tuburi pentru cultivarea microorganismelor anaerobe. Medii tioglicolate. 2013. Disponibil la adresa: bd.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.