BULION DE TETRATHIONATE: RAȚIUNI, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Tetrationatul bulion sau bulion TT este un mediu selectiv de cultură lichid pentru îmbogățirea și recuperarea tulpinilor din genul Salmonella. A fost creat de Müeller și ulterior modificat de Kauffmann, motiv pentru care există cei care îl numesc bulionul Müeller-Kauffmann.

Mediul original conținea peptone proteice, carbonat de calciu și tiosulfat de sodiu. Kauffmann a adăugat săruri biliare la ea și a creat o altă modalitate cu verde strălucitor. Aceste substanțe inhibă creșterea coliformelor, lăsând mediul liber pentru dezvoltarea bacteriilor patogene, în acest caz Salmonella.

Adăugarea soluției de iod iod în bulionul de tetrathionate. Sursa: Manuel Almagro Rivas

Modificarea a fost foarte reușită deoarece a crescut semnificativ sensibilitatea mediului. Din acest motiv, este în prezent util pentru căutarea Salmonellasului în orice tip de probă, dar mai ales pentru scaune și alimente solide sau lichide.

Pregătirea sa constă din două faze; Mediul comercial este o bază pentru prepararea bulionului tetrathionat și, ulterior, astfel încât tetrathionatul să poată fi format, se adaugă o soluție iodată de iod pentru a completa mediul.

Asociația Americană de Sănătate Publică (APHA) recomandă utilizarea Bulionului de Tetrathionat suplimentat cu verde strălucitor pentru îmbogățirea probelor pentru Salmonella, deoarece este mai selectiv decât bulionul Tetrathionate și bulionul de selenit.

În general, bulionul de tetrathionate este ideal atunci când prezența bacteriilor din genul Salmonella este suspectată în cantități mici sau când sunt abuzate de expunerea la substanțe inhibitoare sau de procese industriale care reduc la minimum viabilitatea acestora.

Bază

Peptonele prezente corespund digestiei pancreatice a cazeinei și digestiei peptice a țesutului animal. Acestea furnizează sursa de carbon, azot și nutrienți generali pentru creșterea bacteriilor.

La rândul său, tiosulfatul de sodiu reacționează cu soluția iodată pentru a forma tetrathionat. Aceasta inhibă creșterea coliformelor și favorizează dezvoltarea bacteriilor care conțin enzima tetrathionate reductază, printre ele se numără genul Salmonella, dar și Proteus.

Sărurile biliare acționează, de asemenea, ca o substanță inhibitoare pentru majoritatea bacteriilor Gram pozitive și pentru unele bacterii Gram negative (coliforme).

Carbonatul de calciu absoarbe substanțele toxice generate de descompunerea tetrathionate, care formează acid sulfuric. În acest sens, carbonatul de calciu neutralizează aciditatea, menținând stabil pH-ul mediului.

În cazul modalității de verde strălucitor, această substanță crește puterea selectivă a bulionului de tetrathionate prin inhibarea microorganismelor altele decât genul Salmonella.

preparare

-Botul turtionat

Soluție de iod de iod

A cantari:

• 6 grame de iod.
• 5 g iodură de potasiu.

Iodura de potasiu este dizolvată în aproximativ 5 ml de apă distilată sterilă, apoi iodul se adaugă puțin câte puțin în timp ce amestecul este încălzit. După ce s-a dizolvat complet, completați marcajul cu apă distilată sterilă până la un volum final de 20 ml.

Mediu de bază pentru bulionul tetrathionate

Se cântăresc 46 de grame de mediu deshidratat și se suspendă în 1 litru de apă distilată sterilă. Se amestecă și se încălzește până când s-a dizolvat complet, se poate aduce la fierbere doar câteva minute. Nu vă autoclavează. Baza mediului este lăsată să se răcească la aproximativ 45 ° C și, în acel moment, se adaugă 20 ml de soluție iodată.

După adăugarea soluției iodate la mediu, trebuie utilizată imediat. Dacă nu doriți să folosiți întregul amestec, procedați după cum urmează:

10 ml de mediu de bază sunt distribuiți în tuburi și numai celor care trebuie inoculate cu probe se adaugă 0,2 ml soluție iodată.

Cele care nu vor fi utilizate pot fi păstrate în frigider, însă, deoarece mediul nu este sterilizat, idealul este să pregătiți cantitatea exactă de care este nevoie.

Culoarea mediului înainte de a adăuga soluția iodată de iod este albă lăptoasă cu un precipitat alb și după adăugare este brună cu un precipitat dens. Precipitatul observat este normal și corespunde carbonatului de calciu care nu se dizolvă. PH-ul final al mediului este de 8,4 ± 0,2.

-Variante de bulion turtionat cu verde strălucitor

Pentru a pregăti bulionul de tetrathionate verde strălucitor, toate etapele descrise mai sus sunt efectuate, dar în plus, la amestec se vor adăuga 10 ml soluție verde strălucitor preparată la 0,1%.

Verde strălucitor

Această soluție este pregătită după cum urmează:

Se cântăresc 0,1 g de verde strălucitor și se suspendă în 100 ml de apă distilată. Căldura la fierbere pentru a obține dizolvarea totală. Depozitați în flacon de chihlimbar.

Utilizare

Pentru probele de scaun (cultura scaunului) protocolul este următorul:

Inoculați 1 g de scaun solid sau 1 ml de scaun lichid într-un tub cu 10 ml de bulion de tetrathionate gata de utilizare. Se agită puternic și se incubează aerob la 43 ° C timp de 6-24 ore.

Ulterior, luați o alicotă de 10 până la 20 ul de bulion și subcultură într-un mediu selectiv pentru Salmonella, precum agar SS, agar XLD, agar verde strălucitor, agar enteric Hektoen, printre altele.

În paralel, mediul selectiv pentru Salmonella trebuie inoculat cu proba directă (fecale), fără îmbogățire. Pentru epruvetele de tampon rectal, descărcați materialul colectat în tub și continuați așa cum este descris mai sus.

Pentru probele alimentare se cântăresc 10 g de alimente solide sau 10 ml de alimente lichide și se inoculează o sticlă cu 100 ml de bulion de tetrathionate gata de utilizare. Procedați în același mod descris mai sus, dar incubați la 37 ° C.

După cum se poate observa, relația dintre eșantion și bulion va fi întotdeauna 1:10.

QA

Tulpinile de control cunoscute pot fi utilizate pentru a testa mediul de cultură. Cele mai utilizate sunt tulpinile certificate ATCC.

Tulpinile care urmează să fie utilizate sunt Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella abony DSM 4224, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Escherichia coli ATCC 25922, Enterococcus faecalis ATCC 19433 și Staphylococcus aureus ATCC 25923.

Este de așteptat o creștere excelentă pentru tulpinile de Salmonella, în timp ce Escherichia coli poate avea o creștere slabă sau regulată, iar tulpinile Gram pozitive (Enterococcus și Staphylococcus) sunt parțial sau total inhibate.

recomandări

-Deoarece acest mediu nu inhibă creșterea Proteus, unele laboratoare folosesc 40 mg / L de novobiocină pentru a preveni dezvoltarea acestei tulpini microbiene. Antibioticul trebuie adăugat înainte de soluția de iod.

-După prepararea mediului, inclusiv soluția de iod iodat, nu trebuie să fie inoculat mai mult de 2 ore.

-Cand se distribuie mediul in tuburi, amestecul trebuie omogenizat continuu pentru a resuspenda precipitatul format.

-În eșantioanele mai puțin contaminate, bulionul de tetrathionate este incubat la 35-37 ° C, iar în probele puternic contaminate, se recomandă incubația la 43 ° C.

Referințe

1. Laboratorul Conda Pronadisa. 2010. Baza de bulion Tetrathionate conform Müeller-Kauffmann. Disponibil in:
2. Laboratoare BD. 2003. Baza de bulion Tetrathionate. Disponibil in:
3. Laboratoarele Britannia. 2015. Bulion de bază cu tetranat. Disponibil in:
4. BBL Media. 2005. Preparat în tuburi pentru cultura speciei Salmonella.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Comparație între mediile de cultură ale selenitului de sodiu și tetrathionatul de sodiu, ambele incubate la 37 ° C și 42 ° C pentru izolarea Salmonella spp de fecalele transportatorilor. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220