BULION DE SELENIT: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Selenite este un mediu de cultură lichid selectiv. Acesta a fost proiectat de Leifson pentru îmbogățirea probelor în care este suspectată prezența bacteriilor enteropatogene din genul Salmonella.

Acest mediu respectă cerințele Asociației Americane de Sănătate Publică (APHA) și, prin urmare, este acceptat pentru investigarea prezenței Salmonella în probe de fecale, urină, alimente lichide sau solide, apă, printre altele.

Bulion de selenit. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa gil

Compoziția sa chimică favorizează recuperarea acestor microorganisme și, la rândul său, inhibă creșterea altora. Este toxic în primul rând pentru majoritatea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae. Totuși, permite și recuperarea tulpinilor de Shigella și nu inhibă creșterea Pseudomonas și Proteus.

Este compus din selenit de hidrogen de sodiu anhidru, fosfat de sodiu anhidru, peptone și lactoză. Există, de asemenea, o variantă la care se adaugă cistină, de unde și denumirea de bulion de selenit-cistină.

În prezent, este preferată utilizarea bulionului de selenită-cistină, deoarece se obține un procent mai mare de recuperare a Salmonella, echivalent cu cel observat cu alte medii selective în același scop, cum ar fi bulionul de tetrathionat de sodiu.

Bază

Peptonele conținute în bulion servesc ca nutrienți pentru dezvoltarea corespunzătoare a microorganismelor. Tulpinile de Salmonella folosesc peptonele ca sursă de azot, vitamine și aminoacizi.

Lactoza este carbohidratul fermentabil, în timp ce selenitul de sodiu este substanța inhibitoare care oprește creșterea bacteriilor Gram pozitive și a majorității bacteriilor prezente în flora intestinală, în special a familiei Enterobacteriaceae. Fosfat de sodiu este tamponul care stabilizează pH-ul mediului.

În cazul variantei de bulion de selenită care conține L-cistină, acest compus suplimentar este un agent de reducere care minimizează toxicitatea selenitei, crescând recuperarea Salmonella.

preparare

-Butul de selenită

Dacă aveți componentele amestecului, puteți cântări:

4 g de selenit de hidrogen de sodiu anhidru.

10 g fosfat de sodiu anhidru.

5 g de peptone.

4 grame de lactoză.

Se dizolvă compușii într-un litru de apă distilată sterilă. Se poate încălzi ușor pentru a se dizolva complet.

Unele laboratoare expun mediul timp de 10 minute în abur fluent pentru a-l steriliza, deoarece nu trebuie utilizată o autoclavă. Dacă mediul este sterilizat, poate fi păstrat la frigider până la utilizare.

De asemenea, poate fi preparat nesteril și servit direct între 10 și 15 ml în eprubete sterile.

În acest caz, trebuie lăsat să se odihnească și să se utilizeze imediat. Deoarece mediul nu este steril, nu poate fi păstrat la frigider pentru utilizare ulterioară.

- Pregătirea mediului comercial

Dacă este disponibil mediul comercial, cântărește 23 g de mediu deshidratat și dizolvă-l într-un litru de apă distilată sterilă. Încălziți scurt pentru a termina dizolvarea. Nu vă autoclavează. Serviți aseptic 10 sau 15 ml în eprubete sterile.

PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,0 ± 0,2.

Trebuie menționat că culoarea mediului deshidratat este bej și preparatul este chihlimbar ușor și translucid.

Varianta de bulion de selenit-cistină

Conține aceiași compuși ca bulionul de selenit, dar se adaugă 10 mg de cistină. Restul procedurii este exact același ca cel descris mai sus.

Aplicații

Acest mediu este special pentru a fi utilizat în studii epidemiologice, în cazurile în care boala nu se află în stadiul acut, la pacienții asimptomatici sau la purtătorii sănătoși.

Izolarea genului Salmonella este în general dificilă, deoarece acestea sunt de obicei doar probe slab contaminante. Fiind în cantități mici, este ușor suprapus de creșterea altor genuri bacteriene care se găsesc în cantitate mai mare.

Pe de altă parte, materia primă cu care sunt fabricate alimentele procesate sunt deseori expuse la căldură, procesele de deshidratare, utilizarea dezinfectanților, radiațiilor și conservanților, printre altele.

Prin urmare, Salmonellele prezente în materia primă sunt maltratate prin supunerea produsului la procesele industriale menționate anterior. De asemenea, în cazul eșantioanelor clinice, cum ar fi fecalele, tulpinile pot fi slabe dacă provin de la pacienți care au fost tratați cu antibiotice.

Prin urmare, orice probă în care este suspectată prezența Salmonella ar trebui să fie îmbogățită în prealabil în bulion de lactoză și, ulterior, îmbogățită în bulion de selenit pentru a-și optimiza recuperarea în medii selective, cum ar fi SS agar, xiloza agar, lizină dezoxicat (XLD ), agar Hektoen enteric (HE) și agar verde strălucitor, printre altele.

însămânțat

Pentru probele de scaun, luați 1 g de probă și suspendați într-un tub cu 10 până la 15 ml de bulion de selenit. Dacă scaunele sunt lichide, luați 1 ml și suspendați în bulion. Pentru tampoane rectale, descărcați materialul de tampon în bulion.

În probele alimentare solide se ia 1 gr și se suspendă în bulionul de selenit.

În alimentele lichide se amestecă în părți egale cu bulionul de selenit la concentrație dublă.

Pentru probele de urină, centrifugați, aruncați supernatantul, luați tot sedimentul și suspendați-l în bulionul de selenit.

Bulii sunt incubati la 37 ° C pentru 24 ore de incubare. Creșterea bacteriană este evidențiată de turbiditate. Un tub adițional pe eșantion poate fi de asemenea inclus pentru incubare la 42 ° C. Ulterior, însămânțarea mediilor solide selective din bulionul de selenit.

QA

Pentru a controla sterilitatea, un bulion de selenit din fiecare lot neinoculat este incubat la 37 ° C timp de 24 de ore. Este de așteptat să nu existe turbiditate sau schimbare de culoare a mediului.

Tulpinile cunoscute pot fi utilizate pentru a controla buna funcționare a mediului, cum ar fi:

Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella choleraesuis ATCC 12011, Escherichia coli ATCC 25922 și Proteus mirabilis ATCC 43071.

Rezultatele așteptate sunt:

• Pentru primele trei tulpini bacteriene, creșterea trebuie să fie satisfăcătoare.
• Pentru inhibarea parțială a Escherichia coli.
• Pentru Proteus creștere moderată.

limitări

Mediul de selenit din bulion este toxic pentru pielea umană, de aceea trebuie evitat contactul direct.

Referințe

1. Flores-Abuxapqui J, Puc-Franco M, Heredia-Navarrete M, Vivas-Rosel M, Franco-Monsreal J. Comparație între mediile de cultură ale selenitului de sodiu și tetrathionatul de sodiu, ambele incubate la 37 ° C și 42 ° C pentru izolarea Salmonella spp de fecalele transportatorilor. Rev Biomed 2003; 14 (4): 215-220
2. Laboratoarele Britannia. Bulionul Selenito. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Laboratoare Neogen. Bulion de selenit. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
4. González -Pedraza J, Pereira -Sanandres N, Soto -Varela Z, Hernández -Aguirre E, Villarreal- Camacho J. Izolarea microbiologică a Salmonella spp. și instrumente moleculare pentru detectarea sa. Sănătate, Barranquilla 2014; 30 (1): 73-94. Disponibil de pe: http://www.scielo.org.
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.