BULION MALONAT: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Bulionul malonat este mediul de cultură lichid utilizat pentru testul de diagnosticare (malonatul), utilizate pentru a diferenția unele genuri din familia Enterobacteriaceae. A fost creat de Leifson în 1933 și ulterior modificat de Ewing, care a adăugat o mică cantitate de dextroză și extract de drojdie la formula inițială.

Mediul este în prezent compus din extract de drojdie, sulfat de amoniu, fosfat dipotazic, fosfat monopotasiu, clorură de sodiu, malonat de sodiu, dextroză și albastru de bromotimol. Acest test este în general inclus în bateria de identificare biochimică pentru Enterobacteriaceae, contribuind la diferențierea anumitor genuri și specii.

Reprezentare grafică a testului de malonat. A. Test negativ, B. (Acidificare) Test negativ, C. (alcalinizare medie) Test pozitiv. Sursa: Tuburi de culoare publicdomainpictures.net

Testul de malonat se bazează în principal pe capacitatea unor microorganisme de a utiliza malonatul de sodiu ca unică sursă de carbon și sulfat de amoniu ca sursă de azot.

Testul malonat este de obicei pozitiv la unele specii din genurile Enterobacter, Klebsiella și Citrobacter. Întrucât, majoritatea speciilor din genurile Escherichia, Salmonella, Shigella, Edwardsiella, Yersinia, Serratia, Morganella, Proteus și Providencia, dau reacție negativă.

Bază

Testul de malonat constă în arata acele bacterii care sunt capabile să utilizeze malonatul de sodiu ca unică sursă de carbon și sulfat de amoniu ca sursă de azot.

Majoritatea Enterobacteriaceae care nu utilizează malonat sunt capabili să crească în acest mediu, luând dextroză și extract de drojdie ca nutrienți.

În acest caz, orice încercare de alcalinizare prin utilizarea peptonelor va fi contracarată prin producerea de acizi generați prin fermentarea dextrozei. De asemenea, fosfatele de dipotassiu și monopotasiu acționează ca un tampon, menținând pH-ul la 6,7.

De aceea, atunci când testul este negativ, bulionul rămâne aceeași culoare originală (verde). În rare ocazii, mediul poate deveni acid din cauza fermentării dextrozei; fără utilizarea peptonelor și a indicatorului de pH ar transforma culoarea mediului spre galben. Pentru ca acest lucru să se întâmple, pH-ul trebuie să scadă la 6.

Cu toate acestea, atunci când acest test este pozitiv, se spune că microorganismul a utilizat sulonatul de malonat și de amoniu ca surse de carbon și de azot, fără a folosi celelalte componente.

În acest caz, mediul devine alcalin datorită eliberării de sodiu și formării în consecință a NaOH. În acest sens, indicatorul de pH (albastru bromotimol) transformă culoarea mediului de la verde la albastru atunci când pH-ul este egal sau mai mare de 7,6. Albastrul poate fi deschis sau intens (albastru prusac).

În cele din urmă, clorura de sodiu menține osmolaritatea mediului, iar apa este diluantul tuturor componentelor.

Interpretare

Bulion de aceeași culoare (verde) - Test negativ

Bulion galben: test negativ

Bulion deschis sau albastru profund: test pozitiv

Există o variantă numită bulion de malonat de fenilalanină, numit și mediu de Shaw și Clarke. În acest caz, pot fi analizate două teste, utilizarea malonatului ca sursă de carbon și producerea acidului piruvic din fenilalanină.

preparare

Bulion malonat

Se cântărește numărul de grame specificat de insertul companiei comerciale alese (poate varia de la unul la altul). Gramele cântărite sunt suspendate într-un litru de apă distilată. Se încălzește ușor până se dizolvă complet. Distribuie 3 ml de mediu în epruvete de 13/100 cu capace de bumbac.

Sterilizați în autoclave la 121 ° C timp de 15 până la 20 de minute.

Se răcește înainte de utilizare. Dacă nu vor fi utilizate imediat, păstrați-l în frigider până la utilizare. Aduceți bulionii la temperatura camerei înainte de a inocula.

PH-ul mediului trebuie să fie de 6,7 ± 0,2. Culoarea mediului preparat este verde sticlă.

Bulon de malonat de fenilalanină

Se cântăresc 11 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă distilată. Restul preparatului este identic cu cel descris anterior.

De asemenea, poate fi preparat prin adăugarea a 2 g / L de fenilalanină la mediul de bulion malonat înainte de a fi sterilizat.

Utilizare

Este utilizat ca parte a bateriei de teste biochimice care sunt asamblate pentru identificarea bacteriilor din familia Enterobacteriaceae.

Ajută să distingă între:

-Genurile Klebsiella și Enterobacter (+) din genurile Escherichia și Serratia (-).

-Species de Salmonella enterica ssp arizonae, Salmonella enterica ssp salame și Salmonella enterica ssp diarizonae (+), din specia Salmonella enterica ssp enterica (-).

-De genul Klebsiella în general (+) din genul Actinobacillus (-).

-În mod ocazional, poate ajuta la diferențierea genurilor și speciilor de bacterii care nu aparțin familiei Enterobacteriaceae, cum ar fi bacilii Gram negativi care nu fermentează Alcaligenes faecalis (+) și Acinetobacter sp (-).

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Proces

Sub o brichetă, se ia o porție dintr-o coloană pură, folosind un mâner de platină sterilizat și răcit corespunzător. Proba prelevată (inocul ușor) se dizolvă în bulionul de malonat. Se incubează cu capacul desfăcut în aerobioză la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore.

Bulionul de malonat poate fi, de asemenea, inoculat dintr-o cultură de 18-24 ore în bulionul de soia tripticază. În acest caz, se iau 0,01 ml cu o pipetă sterilă și se inoculează bulionul de malonat. Se incubează cu capacul desfăcut în aerobioză la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore.

La sfârșitul timpului, rezultatele sunt interpretate. Orice urmă de culoare albastră după 48 de ore de incubare trebuie considerată pozitivă. Testul nu trebuie interpretat ca negativ decât după trecerea timpului de incubare de 48 de ore.

În cazul utilizării variantei de bulion de malonat de fenilalanină, mai întâi este interpretat malonatul și apoi se adaugă 5 picături de HCl 1N și 3-5 picături de clorură ferică de 8%. O culoare verde închis este interpretată ca un test pozitiv pentru fenilalanină. Dacă, pe de altă parte, mediul devine albastru pal, testul este negativ pentru fenilalanină.

QA

Pentru a efectua controlul de sterilitate a mediului, unul sau două bulionuri trebuie incubate la 35 ° C ± 0,2 pentru 24 ore de incubare. După acest timp, nu trebuie să existe nerușinări sau schimbări de culoare.

Pentru controlul calității pot fi utilizate tulpini cunoscute sau certificate, cum ar fi: Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 33945, Salmonella enterica ssp arizonae ATCC 13314 și Escherichia coli ATCC 25922.

Rezultatele așteptate sunt:

• Enterobacter aerogenes, Klebsiella pneumoniae și Salmonella enterica ssp arizonae dau o reacție pozitivă (culoare albastră medie).
• Pentru Escherichia coli, rezultatul ar trebui să fie negativ, adică este de așteptat să nu existe schimbări de culoare (verde) sau să se îngălbenesc din cauza fermentației glucozei.

limitări

Nu folosiți bulion care prezintă turbiditate, precipitați, schimbări de culoare sau semne de deteriorare.

Referințe

1. Pedraza J, Sanandres N, Varela Z, Aguirre E, Camacho J. Izolarea microbiologică a Salmonella spp. și instrumente moleculare pentru detectarea sa. Sănătate Uninorte. Barranquilla (Col.) 2014; 30 (1): 73-94. Disponibil pe: scielo.org.co
2. BBL. Bulon Malonat, Ewing modificat. 2007. Disponibil la adresa: bd.com
3. Laboratoarele Senna. Bulion de malonato. Disponibil la adresa: cientificasenna.com
4. RenyLab. Bulion de malonato. 2013. Disponibil la adresa: es.renylab.ind.br
5. Diagnostic Mbiolog. Bulion de malonato. Disponibil la: mbiolog.com
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
7. Laboratoarele Conda Pronadisa. Bulon de malonat de fenilalanină. Disponibil la adresa: condalab.com