BULION ECOLOGIC: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

CE bulion sau bulion de Escherichia coli este un mediu de cultură lichid selectiv. Acest mediu este recomandat de metodele standard pentru numărarea coliformelor totale și fecale, prin cea mai probabilă tehnică de număr (MPN) la probele de apă și alimente, unde principalul agent implicat este Escherichia coli.

Bulionul CE este compus din tripteină, lactoză, săruri biliare, fosfat dipotasiu, fosfat monopotasiu, clorură de sodiu și apă. Formula sa este concepută strategic pentru a favoriza creșterea coliformelor totale și fecale și pentru a preveni dezvoltarea altor microorganisme însoțitoare.

Reprezentarea figurativă a preparatului bulionului CE. Sursa: Pixabay.com

Bacteria Escherichia coli este principala coliformă fecală prezentă ca contaminant în surse de apă și alimente, fiind cauza unor afecțiuni gastro-intestinale importante.

Trebuie remarcat faptul că există multe serotipuri de Escherchia coli; Printre ele putem menționa enterohemoragic (EHEC), enteroinvasiv (EIEC), enteopatogen (EPEC), enterotoxigenic (ETEC) și enteroagregativ (EAEC).

Acest mediu are capacitatea de a permite dezvoltarea tuturor, dar fără a le putea diferenția unul de celălalt. Acest lucru necesită testări suplimentare.

Studiul microbiologic al apei și al alimentelor cu numărul cel mai probabil (MPN) pentru a căuta coliformele totale și fecale este un protocol care constă din mai multe faze; faza prezumtivă, faza de confirmare și faza de finalizare. Bulionul CE este utilizat în faza de confirmare.

Bază

Bulionul CE

Mediul CE se bazează pe furnizarea elementelor nutritive necesare dezvoltării optime a coliformelor totale și fecale, unde sunt incluse bacteriile Escherichia coli.

Aceste elemente nutritive sunt furnizate de tripteină, fiind o sursă excelentă de peptide și aminoacizi. În plus, conține și lactoză, un carbohidrat fermentabil care oferă energie și permite să arate dacă bacteriile produc gaz.

Pe de altă parte, mediul conține săruri biliare care asigură caracterul selectiv, deoarece inhibă creșterea microorganismelor Gram pozitive care pot fi prezente în probă.

De asemenea, fosfatul dipotazic și fosfatul monopotasiu acționează ca un sistem de echilibrare a pH-ului. Acest sistem este necesar, deoarece lactoza conținută în bulion tinde să acidifice mediul atunci când este fermentat de microorganisme, dar acest lucru este compensat de sărurile fosfatului.

Prin urmare, aceste elemente sunt esențiale, deoarece aciditatea necontrolată poate afecta dezvoltarea corespunzătoare a microorganismelor căutate.

La rândul său, clorura de sodiu stabilizează mediul osmotic, în timp ce apa este solventul pentru solutele prezente și oferă consistența lichidului mediului.

Novobiocin Bulion EC modificat

Okrend și Rose au creat o varietate de bulion CE, numită bulion de EC modificat novobiocină. Modificarea a constat în reducerea concentrației sărurilor biliare și adăugarea a 20 mg / dl de novobiocină.

Această modificare favorizează recuperarea tulpinilor enterohemoragice de Escherichia coli (O157: H7).

Acest serotip bacterian determină colită hemoragică severă care poate duce la sindromul uremic hemolitic (HUS); care la rândul său poate genera insuficiență renală acută, cu o rată mare de mortalitate care poate ajunge până la 50% la vârstnici.

Datorită morbidității și mortalității cauzate anual de această bacterie din cauza consumului de alimente contaminate, Departamentul Agriculturii din Statele Unite (USDA) recomandă cu mare încredere utilizarea acestui mediu.

preparare

Bulionul CE

Se cântăresc 37,4 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Amestecul trebuie lăsat să stea timp de 5 minute. Ulterior, într-o sursă de căldură, se termină dizolvându-se agitând frecvent.

Odată dizolvat, acesta este distribuit în eprubetele precondiționate cu un tub Durham în interior. Sterilizați în autoclave la 121 ° C timp de 15 minute.

PH-ul mediului trebuie să fie de 6,9 ​​± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este bej și mediul preparat este chihlimbar deschis.

Bulionii se păstrează la frigider până la utilizare. În momentul utilizării, bulionele trebuie să fie la temperatura camerei.

Pe de altă parte, bulionul CE poate fi preparat și la o concentrație dublă.

Novobiocin Bulion EC modificat

Se cântărește 36,7 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă. Restul preparatului este același ca cel descris mai sus.

Utilizare

Analiza coliformă totală și fecală

Bulionul CE este ideal pentru faza de confirmare a studiului coliformelor prin metoda NMP, atât în ​​probe de apă, cât și în produse farmaceutice și alimentare.

Buldozele lactoase producătoare de gaz obținute în faza prezumtivă trebuie resediate în bulionuri de 2% de culoare verde strălucitoare și bulion CE.

Pentru coliformele totale, bulionele EC sunt incubate aerob timp de 24 până la 48 de ore la 37 ° C, iar pentru coliformele fecale, sunt incubate aerob timp de 24 până la 48 de ore la 44 ° C.

În ambele cazuri, acesta este interpretat după cum urmează: tuburile turbid cu producție de gaz sunt considerate pozitive. Dacă nu există producție de gaz în 24 de ore, incubația continuă până la 48 de ore.

Bulii CE pozitivi trec la faza de confirmare completă, care constă în redobândirea pe medii selective, cum ar fi Mac Conkey agar, EMB agar sau Endo agar.

Dacă bulionul utilizat este modificat prin novobiocină, tuburile pozitive se recomandă să fie resediate pe agar Mac Conkey cu sorbitol.

QA

Fiecare lot de mediu pregătit trebuie să fie controlat de calitate. În primul rând, trebuie evaluată sterilitatea mediului. În acest sens, unul sau două bulionuri sunt incubate fără inoculare în aerobioză timp de 24 de ore la 37 ° C. Rezultatul scontat este un bulion transparent, fără turbiditate sau schimbare de culoare.

În al doilea rând, trebuie evaluată creșterea tulpinilor cunoscute, pentru aceasta pot fi utilizate următoarele bacterii: Escherichia coli, ATCC 8739, Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella typhimurium ATCC 14028.

În toate cazurile, se preconizează o dezvoltare microbiană satisfăcătoare, observând un bulion tulbure, cu producție de gaz pentru E. coli și fără gaz pentru Salmonella.

Alte tulpini care pot fi incluse în control sunt: ​​Staphylococcus aureus ATCC 25923, Enterococcus faecalis ATCC 29212. Aceste tulpini trebuie să fie total inhibate.

recomandări

-Punerea tuburilor Durham este esențială pentru studiul coliformelor.

-Distribuiți mediul în epruvete înainte de sterilizare, niciodată după.

-Nu folosiți dacă mediul are mai mult de 3 luni.

-Nu folosiți dacă se observă modificări ale caracteristicilor obișnuite ale mediului.

Referințe

1. Laboratoarele Britannia. CE mediu. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
2. E. coli entererohemoragice. Centrul pentru securitatea alimentară și sănătatea publică. 2010. Disponibil la adresa: cfsph.iastate.edu
3. Neogen Corporation. Mediu EC. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
4. Neogen. Novobiocin mediu modificat EC. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
5. Jure M, Condorí S, Leotta G, Chinen I, Miliwebsky E, Allori C, Aulet O, de Castillo M. Detectarea, izolarea și caracterizarea Escherichia coli care produce toxina Shiga din carnea proaspătă măcinată de la măcelarii din Concepción, provincie din Tucumán. Microbiol Rev Arg; 2010, 42 (4): 284-287. Disponibil pe: www.scielo.org.