CAMERA NEUBAUER: ISTORIC, CARACTERISTICI, UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Camera Neubauer , hematometru sau hemocitometru, este un instrument de laborator format dintr-o placă specială din sticlă groasă. Această cameră este folosită pentru a număra unele tipuri de celule, cum ar fi celulele roșii din sânge, globulele albe și trombocitele, deși poate fi folosită pentru numărarea sporilor, spermatozoizilor, paraziților etc.

Prezintă câteva caracteristici foarte particulare, deoarece constă din 3 zone, una centrală pentru numărare și două zone de sprijin. Fiecare cameră are două zone de numărare sau transversale, una în partea de sus și una în partea de jos.

Camera Neubauer. Sursa: SantiBadia. Imagine editată.

Acestea au mai multe diviziuni într-o formă grilă. Zonele de numărare sunt pătratele medii găsite la cele 4 colțuri ale ambelor grătare, plus pătratul central.

Montarea camerei trebuie făcută cu mare atenție, deoarece orice detaliu influențează numărul de celule. Există multe greșeli care pot fi făcute, dar dacă apar oricare dintre ele, camera trebuie dezasamblată, curățată și reasamblată. Principalele erori includ următoarele:

Răsturnarea camerei sau subumplerea, lăsând camera să se usuce, încercând să îndepărteze excesul de lichid cu tifon, înclinând camera când îl transportați, umpleți o cameră murdară sau umedă, fără să amestecați bine diluția sau proba, printre altele. Toate aceste erori vor avea ca rezultat o valoare ireală.

Istorie

Camera Neubauer este un instrument de precizie, iar procesul de fabricație este supus unui control strict al calității. A fost creat pentru numărarea precisă a particulelor sau a elementelor formate pe mm ³ , cum ar fi celulele din diferite lichide. Graficul său delicat este sculptat cu un creion de diamant.

Caracteristicile camerei Neubauer

Întreaga cameră are dimensiunea unui diapozitiv normal, astfel încât să poată fi plasat pe stadiul microscopului.

Camera este formată din trei suprafețe dreptunghiulare centrale (a, b, c). În zona „b” este localizată zona R sau zona de numărare, numită și reticulum. Una pe fiecare parte a camerei, separată de zona "d".

Diagrama grafică a Camerei Neubauer. Sursa: Ghid practic de hematologie. Școala de bioanaliză a Universității Carabobo, Venezuela.

Fiecare grilă este o zonă lustruită care conține zona de numărare gravată. Este format dintr-un pătrat cu o suprafață de 9 mm ² și este împărțit intern în 9 pătrate cu o suprafață de 1 mm ² fiecare. Cele patru pătrate de colț sunt împărțite în 16 pătrate mai mici (0,0625 mm ² în suprafață).

Aceste grile sunt formate dintr-o serie de linii milimetrice care se intersectează între ele, constituind grile perfect grefate delimitate la măsurătorile specificate. Aceste linii au fost gravate cu un vârf de diamant.

Reticulul Neubauer îmbunătățit. Sursa: Ghid practic de Hematologie al Școlii de Bioanaliză a Universității Carabobo, Venezuela.

Cele patru laturi corespund zonei de numărare. Pe aceste laturi sau colțuri se numără cea mai mare parte a celulelor (globulele roșii și leucocitele), în timp ce trombocitele sunt numărate în zona centrală.

Zona centrală are mai multe diviziuni, este formată dintr-un pătrat de 1 mm ² împărțit în 25 pătrate care au o suprafață de 0,04 mm ² fiecare. Acestea la rândul lor sunt împărțite în 16 rețele cu o suprafață de 0,0025 mm ² .

Descrierea reticulului îmbunătățit Neubauer. a) Piața colțurilor, b) pătratul central, c) pătratul median al pătratului central. Sursa: Ghid practic de Hematologie al Școlii de Bioanaliză a Universității Carabobo, Venezuela.

Zona „a” și „c” servesc ca suport pentru a plasa un obiect de acoperire special numit glisă hematometrică sau capac de hematimetru.

Înălțimea dintre folie și suprafața de numărare este de 0,1 mm. Măsurătorile suprafeței cutiilor, precum și înălțimea camerei și diluarea eșantionului sunt date necesare pentru efectuarea calculelor finale.

Aplicații

Este folosit pentru numărarea celulelor. Este deosebit de util în zona hematologiei, deoarece permite numărarea celor 3 serii de celule sanguine; adică globule roșii, globule albe și trombocite.

Cu toate acestea, poate fi utilizat în alte domenii, de exemplu pentru a număra spermatozoizi, spori, bacterii sau alte elemente de importanță în funcție de tipul de probă.

Cum se folosește?

pregătirea unei mostre

Pentru a efectua numărul de celule, se începe în general de la o diluare anterioară. Exemplu: pentru a număra globulele albe, pregătiți o diluție 1:20 cu lichidul lui Turk. Diluția este amestecată bine înainte de a încărca pipeta și de a monta camera Neubauer.

Există momente în care o diluție de 1:20 nu este suficientă pentru a conta. De exemplu, la pacienții care suferă de anumite tipuri de leucemii cronice. În aceste cazuri, trebuie făcute diluții mai mari, cum ar fi 1: 100.

Dacă, pe de altă parte, numărul este foarte scăzut, ca și în leucopeniile severe, se pot face diluții mai mici pentru concentrarea probei. Exemplu: puteți face o diluare de 1:10.

Modificările care se fac influențează calculele.

Montare camera Neubauer

Camera Neubauer este asamblată prin plasarea toboganului hematometric în zona centrală. Ambele trebuie să fie foarte curate și uscate. Pentru a așeza lamela, aceasta este luată de margini și aruncată ușor pe cameră.

Aceasta se completează prin plasarea vârfului unei pipete sau a unei pipete automate Thoma la un unghi de 35 ° la marginea zonei de încărcare. Lichidul este evacuat fără probleme, iar zona de încărcare este umplută de capilaritate. Acest lucru se face din ambele părți pentru a încărca cele două fire transversale.

Reticulele nu trebuie supraîncărcate și nici nu trebuie refuzate lichid. Sarcina trebuie să fie exactă. Este important ca umplutura să se facă omogen, adică să nu existe bule.

După ce camera este montată, se lasă să se odihnească timp de 2 minute, astfel încât celulele să precipite până la fund și vizualizarea și numărarea lor să fie mai ușoară.

După timpul de odihnă, acesta este montat pe scena microscopului ușor pentru observație. Mai întâi este concentrat cu un obiectiv 10X și, dacă este necesar, apoi trece la 40X.

Pentru a îmbunătăți vizualizarea, trecerea luminii de la microscop este redusă. Pentru a face acest lucru, condensatorul este coborât și diafragma este ușor închisă.

Socoteală

Pentru numărarea globulelor albe sau a leucocitelor, trebuie luată în considerare întreaga suprafață a celor patru pătrate de colț median și pătratul central al fiecărui reticul.

Numărarea începe în pătratul din colțul din stânga sus. Începi de la primul pătrat al primului rând, adică de la stânga la dreapta până ajungi la capătul opus.

Acolo coborâți și priviți înapoi de la dreapta la stânga până ajungeți la celălalt capăt și așa mai departe, celulele din fiecare grilă sunt numărate în zig-zag. Cele 16 grile ale fiecărui pătrat median sunt numărate.

Pentru a evita numărarea unei celule de două ori, există reguli despre celulele care sunt situate pe liniile de delimitare ale fiecărei grile. Celulele din liniile din stânga și cele superioare sunt contorizate și celulele din liniile din dreapta și de jos sunt ignorate.

Un contor de celule manual trebuie să fie disponibil pentru ca operatorul să apese tasta dispozitivului de câte ori sunt observate celule. Cu ajutorul contorului, operatorul poate conta fără să fie nevoit să privească din câmpul microscopic. La sfârșitul numărului veți vedea numărul total de celule numărate.

calculele

Pentru calcule puteți proceda în mai multe moduri. O singură grafică poate fi numărată sau ambele pot fi numărate și ambele sunt mediate. În aceste două situații, celulele numărate trebuie să fie înmulțite cu un factor, care în acest caz ar fi 40. Și astfel ^{se obține} numărul total pe mm ³ .

Dar dacă cele două grile sunt numărate și nu este luată media, ea trebuie înmulțită cu un factor diferit, în acest caz cu 20.

-Factorul de multiplicare

Iată cum este calculat factorul de înmulțire.

Pentru calcule sunt luate în considerare diverse date, inclusiv titlul de diluare, înălțimea camerei și zona luată în considerare.

Diluare

Diluția standard utilizată este de 1:20 pentru numărul de leucocite.

Înălțimea camerei

Înălțimea dintre cameră și foaia celulelor sanguine este de 0,1 mm.

Zona numărată

Dacă sunt numărate 5 pătrate de 1 mm ² , înseamnă că suprafața totală de numărare este 5 mm ² . Aceste date trebuie înmulțite cu înălțimea camerei pentru a obține volumul total numărat. Adică 5mm ² x 0.1mm = 0,5mm ³ .

Formule și calcule

Cu datele pe care le avem, se spune:

Dacă în 0,5 mm ³ - există --- număr de celule numărate

În 1 mm ³ --- vor fi - X nr de celule

X nr. De celule = (nr. De celule numărate x 1) / 0,5 mm ³

Dar, de asemenea, trebuie luată în considerare diluția. Prin urmare, formula este următoarea:

(număr de celule numărate x 1) x 20 / 0,5 mm ³

În cele din urmă, pentru a rezuma, numărul de celule numărate poate fi înmulțit cu 40. Astfel, ^{se obține} valoarea leucocitelor pe mm ³ .

Dacă se numără cele două reticule, se schimbă datele pentru zona numărată, care în acest caz ar fi de 10 pătrate, adică de 10 mm ² . Și un volum total numărat de 1 mm3. Formula ar fi:

(număr de celule numărate x 1) x 20/1 mm ³

Prin urmare, în acest caz, factorul de multiplicare ar fi 20.

Greșeli

-Dacă la încărcarea camerei este depășită sau depășită cu lichid, înălțimea camerei va varia. Aceasta rezultă ca numărul să fie mai mare decât cel real. Dacă încercați să eliminați excesul cu tifon sau bumbac, aceasta este o greșeală uriașă. Această acțiune va determina concentrarea celulelor, crescând numărul.

-Dacă este încărcat slab, numărul va fi mai mic decât cel real.

-Dacă aparatul foto este montat și se lasă să se usuce, nu mai este posibil să contați, deoarece va da rezultate greșite.

-Dacă diluarea eșantionului nu se amestecă bine înainte de încărcarea camerei, există riscul unei erori la citire, deoarece celulele nu vor fi distribuite omogen. Prin urmare, va exista o concentrație mai mică sau mai mare de celule, în funcție de dacă eșantionul este preluat de la suprafața lichidului sau, respectiv, de pe fundul tubului.

-Prezența de bule reduce cantitatea de lichid care trebuie să intre în reticul, interferând cu vizualizarea și distribuția corectă a celulelor. Toate acestea afectează semnificativ rezultatele.

-În timpul numărării, nu priviți de la microscop până când nu se finalizează fiecare pătrat mare pentru a nu se pierde.

-Un motiv de eroare este înclinarea camerei după montare. Din acest motiv, stadiul microscopului trebuie ridicat cu atenție.

Recomandare

Dacă din orice motiv detectați o anomalie în umplerea camerei, se recomandă să dezasamblați preparatul, să curățați camera și să o reasamblați de la zero.

Aveți mare grijă când curățați camera pentru a evita zgârieturile părului încrucișat. Pe de altă parte, fiți conștienți că diapozitivul hematometric este delicat și fragil. Manevrarea necorespunzătoare o poate rupe.

Înainte de a începe numărarea, asigurați-vă că celulele sunt bine distribuite. O distribuție neuniformă a celulelor are loc din amestecul slab sau din diluarea eșantionului. Dacă se întâmplă acest lucru, asamblarea trebuie repetată.

O modalitate de a ști dacă celulele sunt bine distribuite este compararea numărului fiecărui pătrat mare, numărul de celule numărate pentru fiecare pătrat nu trebuie să fie exagerat de diferit de la una la alta.

-Dacă numărul de celule albe din sânge este peste 50.000 mm ^3, se recomandă repetarea numărului, făcând o diluare mai mare.

-Dacă schimbați diluția, trebuie să recalculați factorul de multiplicare, deoarece acest lucru influențează formula.

Referințe

1. Cardona-Maya W, Berdugo J, Cadavid A. Comparația concentrației de spermă folosind camera lui Makler și camera lui Neubauer. Actas Urol Esp 2008; 32 (4): 443-445. Disponibil în: scielo.
2. Camera Neubauer. (2018, 27 martie). Wikipedia, enciclopedia gratuită. Data consultării: 04:10, 23 iunie 2019 de la es.wikipedia.org
3. Meneses A, Rojas L, Sifontes S. Aplicarea unei metode alternative de numărare în camera Neubauer pentru a determina concentrația de Trichomonas vaginalis. Rev. Cub Med Trop 2001; 53 (3): 180-8. Disponibil pe: researchgate.net
4. Gómez-Pérez Roald E. Analiza spermogramei. Rev. Venez. Endocrinol. Metab. 2007; 5 (2): 19-20. Disponibil în: ve.scielo
5. Ghid practic de hematologie al Școlii de Bioanaliză a Universității Carabobo. Venezuela.1998