COLORAREA CAPSULELOR: RAȚIUNI ȘI TEHNICI - BIOLOGIE - 2025

Capsula de colorare este o tehnica de colorare diferentiata care are proprietatea structurii stresului polizaharid care înconjoară anumite bacterii și drojdii numite capsule. Este utilizat în laboratoarele clinice pentru a ajuta la diagnosticarea anumitor patologii cauzate de microorganisme capsulate.

De asemenea, este utilizat în laboratoarele didactice pentru demonstrarea acestei structuri morfologice studenților din cariere de științe ale sănătății, precum: medicină, bioanaliză, asistență medicală sau citotehnologie, printre altele.

Frotiu Klebsiella pneumoniae colorat cu pata de capsulă. Metoda indiană de cerneală cu safranină. Sursa: А.А.В

Există mai multe tehnici simple pentru a demonstra prezența capsulei în microorganismele care o posedă, acestea sunt: ​​colorarea negativă, colorarea lui Anthony și o variantă care combină cele două anterioare.

Colorarea negativă este utilizată mai ales la probele de LCR, atunci când este suspectată prezența drojdiei Cryptococcus neoformans. Această drojdie este o cauză comună a meningitei.

Această tehnică folosește cerneală nigrosină sau India și se bazează pe crearea unui contrast între fundalul preparatului și capsula impenetrabilă a microorganismului. Fundalul se întunecă, iar capsula este incoloră. În acest fel, această structură este dezvăluită.

În ceea ce privește tehnica Anthony, se poate spune că este folosită mai ales în laboratoarele de predare pentru a demonstra structura polizaharidelor în bacterii precum Klebsiella pneumoniae, Streptococcus pneumoniae și Neisseria meningitidis.

Utilizarea acestei tehnici în scop diagnostic este foarte rară, deoarece există și alte teste de rutină care permit identificarea acestor microorganisme.

Bază

Capsula este o structură puternică de natură polizaharidică. Aceasta protejează microorganismele de fagocitoză și, prin urmare, este o structură dificil de pătruns.

De aceea, petele de capsule se bazează pe contrast. Coloranții colorează partea inferioară a preparatului, în timp ce capsula rămâne incoloră.

Prin urmare, cu aceste tehnici, capsula este ușor de recunoscut. Dacă microorganismul nu are o capsulă, nu se va distinge cu acest tip de colorare, deoarece totul va fi colorat cu aceeași culoare.

Toate tehnicile utilizate pentru a colora capsula au aceeași rațiune, în ciuda folosirii coloranților și a procedurilor diferite.

Tehnici alin

-Pata antonomică

Pata lui Anthony folosește violetul de cristal ca o pată. Acest lucru va colora corpul bacterian și violetul de fundal.

Pe de altă parte, se folosește sulfat de cupru 20%. Aceasta servește ca soluție de spălare, adică elimină excesul de cristal violet din preparat, făcând capsulele limpezi, dar fără ca organismul bacterian sau fondul să-și piardă culoarea.

materiale

- Lapte iridescent.

- Slide.

- 1% cristal violet.

- 20% sulfat de cupru.

- Microscop optic.

- Ulei de imersie.

Proces

Această tehnică constă în:

1. Cultivați microorganismul în laptele iridescent timp de 36 de ore.
2. Puneți o picătură de cultură la capătul unei diapozitive și lângă ea, așezați o picătură de sticlă violetă, amestecați și răspândiți cu capătul unei alte diapozitive.
3. Se usucă și nu se încălzește.
4. Se spală cu soluție de sulfat de cupru 20%, se lasă să se usuce.
5. Observă la microscop un obiectiv de imersiune. Căutați spre capetele răspândirii.

Este important să nu folosiți căldură nici pentru a repara, nici pentru a se usca, deoarece acest lucru dăunează capsulei. De asemenea, nu vă spălați cu apă.

Interpretare

Laptele iritant este un mediu de cultură excelent, deoarece oferă substanțele nutritive necesare pentru ca microorganismul să dezvolte o capsulă proeminentă.

Pe de altă parte, laptele iridiscent va forma un fund gros și compact, care va fi colorat de violet împreună cu corpul bacterian, dar capsula care înconjoară microorganismul va rămâne incolor. Prin urmare, în jurul corpului bacterian se observă un halou clar.

Reprezentare grafică la observarea microscopică a unui frotiu Klebsiella pneumoniae colorat cu pata lui Anthony. Sursa: realizat de autor MSc. Marielsa Gil.

Avantaj

Este o tehnică simplă de efectuat. Nu necesită fixare.

De asemenea, trebuie menționat că pot fi utilizate și alte medii de cultură, dar mediul de lapte este preferat, deoarece are avantajul de a furniza capsule mai proeminente.

Dezavantaje

Este o tehnică puțin mai intensă a forței de muncă decât colorarea negativă, iar vizualizarea acesteia necesită așteptarea completă a preparatului.

-Colorarea negativă

materiale

- Slide diapozitive.

- mediu de cultură cu microorganism.

- cerneală chinezească sau nigrosină.

- Microscop optic.

- Soluție salină fiziologică.

Proces

Puneți o picătură de soluție salină fiziologică pe copertina și dizolvați o mică porțiune din cultura microbiană. Este important ca preparatul să nu fie prea gros. Apoi puneți o picătură de cerneală chinezească sau nigrosină și amestecați.

Apoi se pune o foaie de copertă peste preparat, fără a revărsa lichidul. Se observă la microscop prin focalizarea mai întâi asupra unui obiectiv 10X și apoi trecerea la 40X.

Această tehnică poate fi utilizată direct pe eșantioane CSF. Adică, în loc să plasezi o picătură de cultură microbiană, se plasează o picătură de LCR.

Avantaj

Este o metodă simplă de efectuat și, în același timp, ieftină. Nu necesită fixarea sau uscarea preparatului.

Dezavantaje

Dezavantajul este că trebuie observat la microscop înainte ca preparatul să se usuce, deoarece, dacă se întâmplă acest lucru, microorganismele se vor contracta, ceea ce va face vizualizarea dificilă.

Pe de altă parte, pot apărea falsuri pozitive dacă analistul nu are experiență, deoarece leucocitele sunt adesea confundate cu drojdiile.

Observarea capsulelor de drojdie cu tehnica de cerneală chineză sau nigrosină trebuie considerată ca un diagnostic prezumtiv al Cryptococcus neoformans până când se demonstrează cu cultura.

Acest lucru se datorează faptului că există alte drojdii care ar putea fi cauza meningitei și nu doar a Cryptococcus neoformans, precum cele din genurile Candida și Rhodotorula, precum și alte specii de Cryptococcus.

Interpretare

Dacă există microorganisme capsulate, se va observa un fundal întunecat, cu corpuri transparente plutind în lichid, evidențiind prezența capsulei.

Capsula Cryptococcus neoformans colorată cu cerneală chinezească. Sursa: Credit foto: Furnizori de conținut: CDC / Dr. Leanor Haley

-Tehnica de cerneală indiană

Această tehnică se poate realiza și cu nigrosină. Este o combinație între tehnicile explicate anterior. Această tehnică folosește cerneală violet de cristal și indiană sau nigrosină.

Corpul bacterian capătă culoarea purpurie a cristalului violet, deoarece este încărcat negativ, în timp ce nigrosina colorează partea inferioară a frotiei. Dacă bacteriile au o capsulă, aceasta va apărea ca un halou transparent în jurul microorganismului.

Violeta de cristal poate fi înlocuită cu oricare dintre aceste culori: safranină, fuchsin de bază sau albastru de metilen.

materiale

- Sticlă violetă.

- Nigrosină sau cerneală indiană.

- Slide diapozitive.

- Microscop.

Proces

- Cultivați microorganismul într-un mediu de cultură.

- Așezați o picătură de cultură la capătul unei diapozitive și lângă ea, așezați o picătură de cerneală de cristal India sau nigrosină, amestecați și răspândiți cu capătul unei alte diapozitive.

- Uscați la aer și nu vă fixați la căldură.

- Se acoperă cu o soluție de cristal violet timp de 1 minut, se spală cu apă distilată, dar foarte delicat (jet moale), se lasă să se usuce la aer liber.

- Respectați la microscop un obiectiv de imersiune. Căutați spre capetele răspândirii.

Interpretare

Se va vedea un corp bacterian violet și un fundal întunecat. Capsula, dacă este prezentă, va apărea incoloră în jurul bacteriilor.

Referințe

1. Covadonga A, Silóniz M, Serrano S. Tehnici de bază ale microbiologiei. Observarea bacteriilor. Reduca (Biologie). Seria de microbiologie. 2010; 3 (5): 15-38. D
2. López-Jácome L, Hernández-Durán M, Colín-Castro C, Ortega-Peña S, Cerón-González G, Franco-Cendejas R. Petele de bază în laboratorul de microbiologie. Mediagraphic.org. 2014; 3 (1): 10-18. Disponibil la: medigraphic.com
3. Gil M. Colorarea negativă: rațiune, tehnică, avantaje și dezavantaje. Lifeder.com.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Tankeshwar A. Stain Capsule: Principiul, procedura și rezultatele. 2019. Ghid de microbiologie medicală. Disponibil pe: microbeonline.com