TESTUL VOGES-PROSKAUER: FUNDAMENT, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Testul Voges-Proskauer este un test biochimic utilizat pentru a ajuta la identificarea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae. Este util în special pentru diferențierea tulpinilor de Escherichia coli de Klebsiella și Enterobacter, printre altele.

Testul se efectuează într-un mediu de cultură lichidă numit Metyl Red - Voges Proskauer, mai cunoscut prin acronimul RM / VP. Acest mediu este compus din polipeptonă tamponată, glucoză, fosfat dipotassic și apă distilată.

Mediu comercial / VP Methyl Red-Voges Proskauer (RM / VP) testează pozitiv, respectiv negativ. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil / Sudipta.nov15, de la Wikimedia Commons

Mediul actual RM / VP este o modificare a mediului Clark și Lubs, care inițial conținea o concentrație mai mică de peptone și glucoză. Astfel, a fost produs mai puțin din ionul de hidrogen, necesar pentru reacția pozitivă Voges-Proskauer.

Testul se bazează pe capacitatea microorganismului de a utiliza glucoza pe calea butilen-glicol și formează un produs final neutru numit acetoină, în prezența oxigenului și a unui pH alcalin.

În mediul RM / VP, pe lângă faptul că a putut dezvălui testul Voges-Proskauer, testul roșu de metil poate fi dezvăluit.

Bază

Baza testului Voges-Proskauer

Pluripeptonele prezente în mediu furnizează cerințele nutritive esențiale pentru creșterea bacteriilor. La rândul său, glucoza este compusul principal. Multe bacterii au capacitatea de a metaboliza glucoza și de a forma acid piruvic.

Acidul piruvic este un punct de plecare în metabolismul glucozei și de acolo fiecare microorganism poate lua trasee diferite. Unii vor forma acizi mixți, cum ar fi acidul lactic, acidul acetic, acidul formic și acidul succinic, iar alții vor forma produse neutre precum 2,3-butanediolul.

Testul Voges-Proskauer relevă capacitatea microorganismului de a forma acetil-metil carbinol (acetoină), un produs intermediar al 2,3-butandiolului în condiții aerobe.

Acetoina este redusă și formează 2,3-butanediolul, dar această reacție este reversibilă, prin urmare, dacă 2,3-butanediolul este oxidat, se formează acetoină. Prin urmare, oxigenul este esențial.

Fosfatul de diotasiu este tamponul care tamponează amestecul la pH 6,9 ± 0,2.

Dezvăluirea probelor și interpretarea bazei

Pentru a demonstra reacția, o dezvoltare trebuie realizată folosind doi reactivi (reactivi Barrit), cunoscuți sub numele de Voges A și Voges B.

Voges A este o soluție de 5% de α-naftol, iar Voges B este un preparat de hidroxid de potasiu de 40%. Dacă nu este disponibil hidroxid de potasiu, acesta poate fi înlocuit cu 40% hidroxid de sodiu.

Α-Naftol este un catalizator care va crește intensitatea culorii reacției, făcând testul mai sensibil. Mai întâi trebuie adăugat α-naftol, agitând tubul astfel încât mediul să intre în contact cu oxigenul. În acest fel, acetoina prezentă este oxidată la diacetil și 2,3-butandiol este oxidat pentru a forma acetoină, trecând acest lucru la diacetil.

Așa se face că α-naftolul se va lega de diacetil, care la rândul său s-a unit cu nucleul de guanidină prezent în aminoacidul arginină, acesta din urmă provenind de la pluripeptone.

La rândul său, potasiu sau hidroxid de sodiu este responsabil de absorbția CO ₂ și de reacția cu peptone. Această reacție provoacă formarea unei culori roz-somon, vizibil în mod clar după agitarea tubului foarte bine.

Cantitățile corecte de diacetil, peptonă și α-naftol trebuie amestecate pentru ca culoarea să apară instantaneu. Dacă acest lucru nu se întâmplă, tubul este lăsat să se odihnească timp de 15 minute înainte de interpretare.

Testul este de obicei pozitiv după 2 până la 5 minute, când se poate observa o culoare roz slab. Dacă este lăsat să stea 30 min până la 1 oră, intensitatea culorii va fi maximă (roșu intens).

Un test negativ va apărea atunci când bulionul devine galben. După 1 oră, dacă testul este negativ, se poate forma o culoare de cupru ca urmare a reacției hidroxidului de potasiu la α-naftol.

preparare

MR / VP mediu

Se cântăresc 17 g de mediu de cultură deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Se lasă să stea 5 minute. Se încălzește la fierbere pentru a se dizolva complet. Se servesc 3 - 4 ml în tuburi și se sterilizează în autoclav la 121 ° C timp de 15 minute.

Mediul de cultură deshidratat este de culoare bej, iar mediu preparat este de culoare chihlimbar deschis.

PH-ul final al mediului este de 6,9 ​​± 0,2.

Voges Un reactiv

Se cântăresc 5 g de α-naftol și se dizolvă în 50 ml alcool etilic (absolut). Apoi continuați să adăugați alcool etilic până când ajunge la 100 ml.

Reactiv Voges B

Se cântăresc 40 g de hidroxid de potasiu și se dizolvă în 50 ml de apă distilată într-un pahar. Paharul trebuie așezat într-o baie cu apă rece pentru a controla temperatura, deoarece atunci când preparatul este dizolvat, temperatura crește brusc.

După ce soluția este rece, este transferată într-un balon volumetric și obținută până la 100 ml cu apă distilată.

Procedura de testare Voges-Proskauer

Pentru a efectua testul Voges-Proskauer, un bulion RM / VP este inoculat cu microorganismul studiat, dintr-o cultură pură timp de 18 până la 24 de ore.

Inoculul nu trebuie să fie foarte dens. Este incubat la 35-37 ° C timp de 24 până la 48 de ore, deși uneori este necesară incubația. Cowan și Oțel sunt de părere că 5 zile este timpul minim de incubație necesar pentru a detecta toate speciile pozitive Voges-Proskauer (VP) din familia Enterobacteriaceae.

Dezvoltarea testelor

Separați o alicotă de 1 ml într-un tub și dezvoltați după cum urmează: Se pun 12 picături (0,6 ml) de Voges Un reactiv și 4 picături (0,2 ml) de Voges B. Se amestecă pentru aera și se lasă să se așeze. timp de 5 - 10 minute înainte de interpretare. Cu toate acestea, dacă testul este încă negativ, lăsați-l să se așeze și observați tubul după 30 de minute la 1 oră.

Aspectul unei culori roșu-roșiatic indică faptul că reacția Voges-Proskauer este pozitivă. Dacă mediul rămâne galben, reacția este negativă.

Adăugarea dezvoltatorilor în ordinea și cantitatea indicată este esențială pentru a evita falsele negative.

Utilizare

Testul Voges-Proskauer este util pentru a diferenția între tulpinile de E. coli care sunt VP negative, din genurile Klebsiella, Enterobacter, Serratia, printre altele, care sunt VP pozitive.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Tulpinile de control pot fi utilizate pentru a testa calitatea mediului preparat, incluzând Escherichia coli ATCC 25922, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Proteus mirabilis ATCC 43071, Salmonella typhimurium și Enterobacter cloacae ATCC 13047.

Rezultatele așteptate sunt reacții pozitive Voges-Proskauer doar pentru K. pneumoniae și E. cloacae. Restul dau reacții negative.

Referințe

1. Laboratoarele Britannia. MR-VP mediu. 2015. Disponibil pe: www.britanialab.com
2. Laboratoare Microkit. M-Ident Voges Proskauer. 2014. Disponibil: http://www.medioscultivo.com
3. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.