TESTUL COAGULAZEI: JUSTIFICARE, PROCEDURĂ ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Testul de coagulază este o tehnică de laborator folosită pentru a dezvălui prezența enzimei coagulază. Această enzimă are proprietatea de a coagula plasma. Loeb în 1903 a fost primul care a descris această enzimă.

Acest test este efectuat pe cocci Gram-pozitivi, catalaz-pozitivi, permițând să distingă tulpinile de Staphylococcus aureus de restul stafilococii, deoarece este singurul microorganism de importanță clinică care îl produce.

Ambele imagini dezvăluie un test pozitiv de coagulază. Sursa: Imaginea din stânga: Philippinjl. Imagine dreapta: fotografie făcută de autor MSc. Marielsa Gil.

În acest sens, membrii familiei Staphylococaceae care testează negativ sunt adesea denumiți Staphylococcus negativ coagulază.

Există alte tulpini decât S. aureus care pot produce coagulază, cum ar fi Staphylococcus schleiferi spp coagulans, S. hyicus, S. intermedius și S. delphini.

Cu toate acestea, primele trei au o importanță clinică la nivel veterinar și foarte rar pot fi găsite ca agent cauzativ al infecțiilor la om, în timp ce S. delphini se găsește doar în mediile marine.

Mai mult, ele sunt ușor diferențiate, deoarece S. hyicus și S. intermedius nu fermentează manitolul și S. schleiferi spp coagulans nu fermentează maltoză sau trehaloză, în timp ce S. aureus fermentează aceste carbohidrați.

Prezența enzimei coagulază a fost legată de virulența tulpinilor. Cu toate acestea, această teorie s-a destrămat, deoarece se observă alte specii virulente negative cu coagulază, capabile să producă infecții semnificative.

Bază

Interpretare

Aglutinarea în 5-20 sec (test pozitiv puternic).

Aglutinarea variabilă care are loc între 20 de secunde și un minut (test pozitiv întârziat).

Un anumit grad de aglutinare după un minut (dovezi îndoielnice). Se recomandă repetarea testului sau confirmarea prin metoda tubului.

Nu există aglutinare (test negativ).

Rezultat cu SSF. Trebuie să dea întotdeauna negativ, dacă dă pozitiv automat rezultatul testului este invalidat.

-Testul coagulazei YouTube

materiale

-Testament steril

-Plasma

-Bath of Mary la 37 ° C.

Tehnică

Pipetați 0,5 ml de plasmă într-o eprubetă de 12 x 75 cu o pipetă sterilă. Încărcați bucla de platină cu 2 până la 4 colonii pure pentru a studia dintr-o cultură solidă timp de 18 până la 24 de ore și dizolvați în plasmă amestecați cu atenție și incubați la 37 ° C timp de 4 ore.

Examinați tubul în prima oră fără a-l agita, doar înclinați-l ușor. Dacă un cheag nu este încă văzut, acesta poate continua să fie observat la fiecare 30 de minute până la finalizarea celor 4 ore. Dacă după 4 ore este încă negativ, poate fi lăsat până la 24 de ore, dar la temperatura camerei. Observă și raportează rezultatul.

Pe baza experienței, unii microbiologi recomandă utilizarea 500 ul de suspensie bacteriană dintr-o cultură de 18 ore în mediu lichid pentru a efectua testul.

Pare să ofere rezultate mai rapide și mai fiabile decât atunci când emulsionează colonii din medii solide, mai ales dacă a fost utilizată plasma umană obținută de la banca de sânge.

Utilizarea tulpinilor dintr-un bulion ajută la diluarea prezenței posibile a anticorpilor anti-stafilococici umani în plasmă care pot inhiba acțiunea coagulazei.

Interpretare

Dacă se vede un cheag care cuprinde întregul fluid (coagulare completă) sau cheag cu nimic în fluidul rămas (coagulare parțială), acesta trebuie considerat un test pozitiv.

Dacă nu se formează cheag, adică suspensia rămâne omogenă, testul este negativ.

-Test de coagulaza folosind fibrinogen

Fibrinogenul se folosește la fel ca plasma și se folosește atât pentru testele cu diapozitive cât și pentru tub. Procedați conform descrierii pentru plasmă și interpretați în același mod.

Utilizare

Este utilizat pentru a diferenția Staphylococcus aureus de stafilococii negativi ai coagulazei.

QA

Să fie disponibile culturi proaspete de tulpină de S. aureus pentru a fi utilizate ca un control pozitiv. O tulpină de S. epidermidis este de asemenea disponibilă ca un control negativ.

limitări

-Un test pozitiv nu trebuie lăsat la incubare timp de 24 de ore, deoarece S. aureus produce o fibrinolizină care dizolvă cheagul.

-Pentru un test de încredere, trebuie folosită plasmă proaspătă sau recent reconstituită, precum și este important să se utilizeze culturi bacteriene proaspete (18 până la 24 ore). Acest lucru evită falsele negative.

-Testul trebuie efectuat împreună cu un control negativ și unul pozitiv.

-Unele medii solide pot interfera cu testul coagulazei. Nu este recomandat să folosiți colonii din agar de manitol sărat.

-Dacă se folosește plasma citrată, se recomandă plasarea a 5 unități de heparină pe ml de plasmă pentru a evita falsele pozitive. Acest lucru se datorează faptului că unele microorganisme, altele decât S. aureus, pot descompune citratul și pot provoca coagularea plasmei. În acest caz, este recomandabil să se facă un test Gram și o catalază.

-Este important, în testul cu tub, să monitorizați reacția la fiecare 30 de minute, deoarece există tulpini de S. aureus care produc concentrații mari de fibrinolizină și vor dilua rapid cheagul nou format. Evitați falsele negative.

-Când monitorizați testul, evitați agitarea bruscă a tubului, acest lucru poate distruge inițierea formării cheagului care nu va fi restabilită ulterior, provocând falsuri negative.

Referințe

1. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
4. Laboratoare Pro-Lab. Iepurele coagulează plasma. Disponibil la: pro-lab.com
5. „Coagulazo.“ Wikipedia, enciclopedia gratuită. 12 Feb 2019, 04:23 UTC. 22 Apr 2019, 15:50 wikipedia.org.