FROTIU DE SÂNGE: CARACTERISTICI, TIPURI, TEHNICI ȘI HISTOLOGIE - BIOLOGIE - 2024

Frotiu de sânge este un frotiu de sânge periferic , care este folosit pentru a analiza componentele prezente în circulația sângelui. Observarea unei frotii de sânge furnizează date hematologice care sunt foarte utile pentru diagnosticul și urmărirea multor patologii.

Frotiul de sânge face posibilă cuantificarea numărului de diferite tipuri de globule albe din sânge (formula leucocitelor), precum și analizarea morfologiei și a formei eritrocitelor, leucocitelor și trombocitelor.

Prepararea frotiei de sânge. Sursa: Sânge într-un pahar de laborator. Public DomainPictures.net

În ea pot fi detectate anomalii ale numărului de celule, precum: leucocitoză sau leucopenii, limfocitoză sau limfopenie, neutrofilie sau neutropenie, trombocitoză sau trombocitopenii și eozinofilie. De asemenea, pot fi observate anomalii ale dimensiunii și formei celulare.

În plus, este posibil să se detecteze diverse tipuri de anemii, leucemii și infecții bacteriene sau parazite din sânge.

Pentru aceasta, există diferite tipuri de frotiuri care sunt efectuate în funcție de scopul studiului. Există frotiuri subțiri și frunze groase. Aceste froti diferă în ceea ce privește tehnica de execuție și scopul studiului.

Cei cu picături fine sunt folosiți ca o completare a hematologiei complete. Aceasta oferă date despre formula leucocitelor, pe lângă analiza formei și morfologiei celor trei serii de celule care alcătuiesc sângele: seria roșie, seria albă și trombocitele. Deși servesc și ca o completare la studiul filmului de sânge gros.

Filmul gros este utilizat pentru diagnosticarea bolilor cauzate de hemoparaziți, cum ar fi malaria sau malaria, toxoplasmoza, leishmanioza, boala Chagas, babioza și microfilariza.

Caracteristicile unui frotiu de sânge

Un frotiu de sânge bun trebuie să îndeplinească anumite caracteristici. Printre ele putem menționa:

-Eșantionul trebuie să îndeplinească cerințele minime de calitate pentru a fi reprezentativ.

-Santionarea trebuie să fie bine executată.

-Executarea la timp a frotiei.

-Dacă se efectuează cu sânge venos, utilizați un anticoagulant care nu deformează celulele și amestecă tubul înainte de a face frotiu.

-Dacă se face cu sânge capilar, aruncați prima picătură.

-Răspândirea trebuie să fie omogenă. Acest lucru asigură că celulele sunt distribuite uniform și că celulele sanguine pot fi bine analizate pentru formă și număr.

-Lateralele frotiei trebuie să fie netede de la început până la sfârșit.

- Frotiul trebuie să respecte o marjă de 1 până la 2 mm pe părțile laterale ale toboganului.

-Stratul de frotiu ar trebui să scadă treptat în grosime de la început până la sfârșit (frotiu cu o picătură fină prin metoda de glisare).

-Trebuie să fie etichetat corespunzător pentru a evita confuzia probelor.

-Fixați și colorați corect pentru observarea clară a elementelor de sânge.

-Lăsați frotiul să se usuce foarte bine înainte de a monta preparatul la microscop. Plasarea uleiului de imersie pe un frotiu umed va determina formarea micelelor care împiedică apariția celulelor.

Tipuri de frotiu de sânge

Frotiurile de sânge periferice pot fi clasificate în frotiu subțire și frotiu gros. Cei cu un strat subțire sunt folosiți pentru studiul formulei leucocitelor și pentru observarea morfologică a celulelor sanguine. Pot fi, de asemenea, observate bacterii extracelulare, cum ar fi borrelia și hemoparazitele intracelulare, cum ar fi plasmodiul, printre altele.

În bobul fin, speciile parazitului pot fi identificate, prin urmare, este o tehnică mai specifică decât cea groasă, dar blobul gros este mai sensibil, deoarece este o tehnică de concentrare folosită pentru căutarea exhaustivă a hemoparazitelor extracelulare.

Există două tipuri de frotiuri cu picături fine: cele efectuate pe diapozitive și cele efectuate pe copertine. Frotiile groase sunt efectuate pe lamele.

Tehnici de prelevare de probe de sânge

Frotiile de sânge pot fi făcute dintr-o puncție capilară sau o probă venoasă prelevată cu anticoagulant. Dacă se efectuează din sânge cu anticoagulant, frotiul poate fi preparat până la 2 ore după prelevarea probei.

Trebuie să aveți grijă să folosiți anticoagulante care nu deformează celulele sanguine. Cea mai bună opțiune este EDTA. Dimpotrivă, trebuie evitată utilizarea de anticoagulante, cum ar fi citratul de trisodiu.

Dacă proba este prelevată prin puncție capilară, frotiul trebuie extins imediat, înainte de formarea cheagurilor de sânge.

Prima picătură trebuie aruncată, permițând scăderii următoarei picături pentru a evita diluarea eșantionului cu lichid tisular. Este cea mai recomandată tehnică pentru observarea morfologiei celulare, deoarece sângele nu are aditivi.

Pentru observarea hemoparaziților, Solari și colab. Au concluzionat în lucrările lor de cercetare că ambele tehnici (venipunctură și capilară) sunt la fel de eficiente.

Tipuri de prelevare de sânge: A. Puncție capilară. B. Puncția venoasă. Sursa: A. Flickr.com B. Pxhere.com

Tehnici pentru prepararea frotiei de sânge

Frotiul de sânge poate fi efectuat manual pe lamelele microscopului sau pe un capac sau o lamelă. Este posibil și prin echipamente automate.

-Alturat frotiuri

Este tehnica preferată de majoritatea laboratoarelor datorită manipulării sale ușoare.

Folosind o pipetă Pasteur, așezați o picătură de sânge nu foarte groasă sau foarte fină în centrul unui capăt al unei lamele curate.

Frotiul se face cu ajutorul unui alt tobogan cu un capăt la sol. Glisorul de sticlă la sol este plasat perpendicular pe capătul opus în care este localizată picătura.

Se înclină până la un unghi între 30 - 45 ° și alunecă spre picătură; Când este atins, se extinde liniar peste marginea diapozitivului la sol și cu o mișcare constantă și definită, foaia revine; înainte de a ajunge la capăt, diapozitivul este ridicat.

În acest fel, un strat omogen este răspândit pe suprafața diapozitivului receptor.

Frotiul se lasă să se usuce. Este apoi fixat și colorat cu pata preferată. Se lasă să se usuce bine înainte de vizualizare la microscop. O picătură de ulei este plasată pe față care arată frotiul și observată la un microscop ușor.

Frotiu de sânge pe diapozitiv. Imaginea de sus: frotiu nestăvilit. Imagine inferioară: frotiu pătat. Sursa: Coinmac

Piese de frotiu realizate pe lamele

În acest tip de frotiu se pot distinge trei zone definite: capul, corpul și coada. Capul corespunde zonei în care începe frotiul, este zona cea mai groasă și nu este bine de observat.

Corpul este partea centrală sau intermediară a frotiei, este cea mai bună zonă de observat sub microscop, deoarece acolo celulele sunt uniform distribuite și se păstrează morfologia lor.

Coada corespunde părții finale a frotiei; aici distribuția nu mai este uniformă și morfologia eritrocitară tinde să fie pierdută.

Controlul calității în tehnica diapozitivului

În această tehnică joacă un rol fundamental:

-Curățarea și degresarea toboganului: garantează buna alunecare a probei.

-Mărimea picăturii: cu picături foarte mari se va obține un frotiu mai gros și mai lung, cu o picătură foarte mică, răspândirea va fi mai scurtă și extrem de fină.

-Viteza aplicată în extensie: cu cât viteza este mai mică, frotiul va fi mai subțire, cu atât viteza va fi mai mare.

-Unghiul de execuție: cu cât unghiul este mai mic cu atât este mai fin, cu atât unghiul este mai gros.

-Spep pe coverlip

Nu este utilizat pe scară largă, deoarece manipularea copertelor fragile este greoaie, cu toate acestea oferă avantaje mari, deoarece se obține o distribuție mai bună a celulelor pe tot frotiul.

O picătură nu foarte groasă, nu foarte fină este plasată în centrul unei copertine. Imediat, o altă copertă este plasată deasupra acesteia, astfel încât vârfurile ambelor copertine să iasă, formând o stea.

Picatura se va răspândi spontan pe suprafața ambelor copertine. La sfârșitul prelungirii, fiecare diapozitiv este alunecat rapid în partea opusă unul altuia (unul la dreapta și altul la stânga).

Tehnica oferă două frotiuri în loc de una.

Acestea sunt așezate să se usuce cu partea întinsă în sus. Odată uscat, este fixat și colorat cu tehnica aleasă. Lasa sa se usuce. O picătură de ulei de imersiune este plasată pe o lamelă, frotiul este așezat cu partea de frotiu în jos și privită la un microscop.

Controlul calității în tehnica coverlip

Pentru a obține un frotiu bun pentru această tehnică este important să:

-Curățarea copertinelor (ajută proba să alunece fără probleme).

-Mărimea picăturii (influențează grosimea frotiei).

-Viteza cu care se separă capacele (influențează omogenitatea răspândirii).

-Cu echipamente automate

Pot fi realizate prin oricare dintre aceste echipe: Spinner și Autoslide.

Spinner-ul constă în așezarea unei diapozitive cu o picătură de sânge pe o placă de centrifugă specială. Proba este centrifugată la viteze mari; în acest fel se formează un frotiu omogen și fin al eșantionului. Are dezavantajul posibilității hemolizei probei.

Autoslide este un instrument care efectuează mecanic mișcările pentru execuția frotiei pe lamele. De asemenea, puteți repara și colora frotiul. Poate fi chiar adaptat la unele contoare automate de hematologie.

Tehnica de frotiu gros

Pentru a căuta hemoparaziți, se recomandă două frotiuri: una cu picătură fină și alta cu picătură groasă.

Efectuați o puncție capilară, curățați prima picătură. Așezați o picătură fină pe o lamă și frotiu, așa cum a fost explicat anterior. Pentru margele groasă, așezați o mărgea mare pe un alt tobogan și răspândiți-o într-un pătrat de 1,55 mm. Lasă cele două frotiuri să se usuce.

Colorarea frotiei

Petele Giemsa sau Wright, printre altele, pot fi utilizate pentru picături fine. Giemsa sau May-Grunwald Giemsa este recomandată pentru frotiuri groase.

Pata de Giemsa

Frotiul se fixează timp de 3 minute cu metanol, se scurge și se lasă să se usuce din nou. Frotiul este apoi acoperit cu pata de Giemsa timp de 10-15 minute. Se spală cu apă distilată și se lasă să se usuce. Pentru observarea la microscop se pune o picătură de ulei de imersiune.

Pata lui Wright

Frotiul este acoperit cu pata lui Wright timp de 5 minute. Aruncați și așezați soluția tampon la pH 6,8 timp de 6 minute. Suflați preparatul pentru a omogeniza. Se spală cu apă distilată și se lasă să se usuce. Observați la microscop.

Tipuri de frotiuri defecte

Apare la cursanți în tehnica de picătură fină cu diapozitive.

Frotiuri cu zone de grosimi diferite (subțire și groase intercalate)

Se datorează faptului că mișcarea executată nu a fost constantă în timpul răspândirii, făcând opriri și reporniri.

Frotiu de frotiu foarte scurt

Au 2 cauze: una se datorează faptului că diapozitivul la sol a fost ridicat înainte de a ajunge la celălalt capăt al toboganului. În acest caz este extrem de gros și scurt.

Pe de altă parte, dacă frotiul este scurt, dar subțire, se datorează faptului că dimensiunea picăturii era foarte mică.

Frotiu cu o zonă greblată spre sfârșitul frotiei

Are mai multe cauze: una este ca marginea solului să fie defectă, ca presiunea exercitată pe lamela de primire să fie crescută la momentul răspândirii sau ca marginea solului să fie purtată.

Frotiu cu formare de vacuole sau zone clare rotunjite sau eliptice

Acestea se datorează folosirii frotiurilor grase (slab spălate și degresate).

Frotiuri foarte groase sau foarte subțiri

Picăturile prea mari vor produce frotiuri foarte groase de la început până la sfârșit, iar picăturile foarte mici vor produce frotiuri foarte fine.

Histologie

Celulele sanguine pot fi văzute într-un frotiu de sânge. Printre ele se numără:

-Eritrocite sau globule roșii

Sânge uman, eritrocite sau globule roșii și două globule albe. Luate și editate din: Viascos. Observația dvs. este de maximă importanță. La acest nivel pot fi detectate anemii, talasemie, boală a măduvei osoase etc.

Numărul de eritrocite sau celule roșii din sânge este de aproximativ 5 x 10 ⁶ mm3 la bărbați și 4,5 x 10 ⁶ la femei. Globulele roșii au forma unor discuri biconcave, cu o paloare fiziologică centrală. Pot fi văzute separat (normal) sau formând stive rouleaux (anormale).

Frotii prezintă, de asemenea, poikilocitoză (globule roșii de diferite forme), anisocitoză (globule roșii de diferite dimensiuni), anisopoikilocitoză (diverse forme și dimensiuni), anisochromie (culori diferite), eritroblaste (globule roșii imature), microcitoză (globule roșii mai mici) ) și macrocite (eritrocite mai mari).

Când prezintă deficiență de cantitate de hemoglobină și crește paloarea centrală, se spune că există hipocromie. Când se observă o serie roșie normală, aceasta va fi raportată ca normocitică și normocromică.

-Celule albe din sânge sau leucocite

celule albe

Cantitatea normală variază de la 5.000 la 10.000 mm ³ . Sunt modificate în procesele infecțioase, în alergii și în leucemie. În frotiul de sânge se pot distinge mai multe tipuri, care sunt explicate mai jos.

Neutrofile segmentate

Ele reprezintă 55-65% din totalul leucocitelor. Măsoară între 10-15 μm. Au un nucleu segmentat sau lobat care adoptă morfologii diferite, de aceea se numește polimorfonucleare.

Au granule neutrofile abundente în citoplasma lor și unele azrofile. Ele cresc în infecțiile bacteriene (neutrofilia), scăderea infecțiilor virale (neutropenie).

Pot fi observate anomalii morfologice, cum ar fi pleokariocitoza (nuclee hiper-segmentate), arcuite (celule imature) sau macro-politici (în formă ovală și mare).

Alte modificări:

-Granulații toxice

-Netrofile Pseudo Pelger (nucleul nu este lobat sau bilobat).

-Corpii Döhle: incluziuni citoplasmatice cu albastru închis.

-Basofilie citoplasmică crescută

-Vacuole interacitoplasmatice.

-Picnoza celulară (pierderea punților internucleare).

Eozinofile segmentate

Ele reprezintă 1-3% din totalul globulelor albe din sânge. Măsoară 9-10 μm. Se caracterizează prin prezența unor granule citoplasmatice acidofile abundente și a puțini azrofili. Nucleul său are două lobulări. Numărul acestora crește în alergii și boli de origine parazitară.

Bazofile segmentate

Sunt extrem de rare, reprezentând 0-1% din leucocite. Măsoară 10-12μm. Nucleul este de obicei neregulat la granițe și poate fi bilobat, dar nu se vede din cauza numărului mare de granulații bazofile grosiere din citoplasmă. Foarte rar, se poate observa basofilie.

limfocitele

Sunt celule mici cu citoplasmă bazofilă, cu un nucleu, bine definit, rotund, cu cromatină condensată. Nucleul cuprinde aproape întreaga celulă. Ele reprezintă 26-40% din leucocitele din sânge. Ele cresc în infecțiile virale (limfocitoză). Se pot observa limfocite reactive.

Monocitele

Celule mai mari decât limfocitele, cu citoplasmă mai mare și mai slab, nuclee ovalate de cromatină. Măsoară 9-12μm. Citoplasma este abundentă și apare de obicei albastru cenușiu pal, cu tehnici standard de colorare. Între alterări pot fi observate monocite vacuolate și monocitoză.

-Platelets

Măsoară între 1,5-3 μm. Forma sa este rotundă sau ovală. Valoarea normală variază între 150.000 și 350.000 trombocite / mm3. Ele pot scădea în unele infecții virale. Nu au nucleu și sunt colorate purpuriu. În această serie pot fi observate anomalii, cum ar fi macro sau micro-trombocite, trombocitoză sau trombocitopenie și fragmente de trombocite.

Elemente patologice

Paraziți de sânge

Hemoparaziții, cum ar fi agentul cauzal al malariei sau malariei (paraziți ai genului Plasmodium), pot fi observați în frotiile de sânge. Din acest motiv, este important ca frotiul să fie analizat manual, deoarece echipamentul automat ratează această constatare.

Bacterii

În patologii precum febra recidivă sau boala Lyme, agentul său cauzal poate fi observat. În acest caz, corespunde spirochetei Borrelia recurrenti și Borrelia burgdorferi în frotiul de sânge.

Celule imature

Se observă cazuri severe în leucemii, reacții leucemoide și reacție leucoerythroblastică, printre altele. În infecțiile bacteriene pot exista ușoare abateri spre stânga (prezența escrocii). Eritroblastele pot fi, de asemenea, observate în unele anemii.

Referințe

1. Sânge și țesut hematopoietic. Disponibil la adresa: sld.cu
2. Gomez A, Casas M. 2014. Angel. Interpretare clinică de laborator. Ediția a VIII-a. Editorial Médica Panamericana.
3. Solari Soto L, Soto Tarazona A, Mendoza Requena D, Llanos Conturi A. Comparația densităților parazite în picătură de sânge venos gros versus acupresură în diagnosticul Malaria vivax. Rev Med Hered 2002; 13 (4): 140-143. Disponibil pe: scielo.org.
4. Terry Leonard Nelson, Mendoza Hernández Carlos. Importanța studiului frotiei de sânge periferic la vârstnici. Medisur 2017; 15 (3): 362-382. Disponibil la adresa: scielo.sld
5. Grinspan S. Studiul frotiei de sânge periferic. Educație medicală continuă. Disponibil la: bvs.hn/RMH