APA PEPTONICĂ: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Apa peptonică este un mediu de îmbogățire a lichidului, neselectiv, utilizat în principal ca probe alimentare diluante sau alte materiale. Acest mediu din punct de vedere chimic este foarte simplu, conține peptone din carne, clorură de sodiu și apă.

Are o anumită valoare nutritivă, permițând îmbogățirea probei. Dacă există bacterii abuzate, acest mediu are puterea de a repara viabilitatea. Este util mai ales în recuperarea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae.

Apa de peptonă în sticle. Sursa: MSc. Marielsa gil

În cazul recuperării Salmonellasului, se recomandă utilizarea variantei de apă peptonă sub formă de tampon; Acesta servește ca mediu de pre-îmbogățire a probei, în acest caz conține alte elemente, cum ar fi fosfat disodic și fosfat dipotazic.

În mod normal, apa peptonică este preparată la pH neutru, însă există alte variante în care este necesar ca pH-ul să fie de 8,5 ± 0,2 (alcalin), deoarece bacteria care trebuie izolată este alcalifilă, cum ar fi Vibrio cholerae.

Mai mult, acest mediu poate fi utilizat ca mediu de bază pentru testele de fermentare a carbohidraților.

Bază

Peptonele furnizează substanțele nutritive necesare creșterii bacteriene, în special azotul și aminoacizii cu catenă scurtă, în timp ce clorura de sodiu menține echilibrul osmotic.

Mai mult, mediul face posibilă dispersarea, omogenizarea și repararea celulelor bacteriene care au fost deteriorate de procesele industriale.

Ca diluant este ideal, înlocuind eficient soluția fiziologică (SSF) sau soluția tampon fosfat (PBS).

Creșterea bacteriană este evidentă prin observarea turbidității sale.

preparare

Preparat de casă (nu comercial)

Se cântăresc 1 g de peptonă și 8,5 g de clorură de sodiu, se dizolvă în 1 litru de apă distilată. PH-ul trebuie ajustat la 7,0. Pentru aceasta se poate folosi clorura de sodiu 1 N.

Prepararea folosind mediu comercial

Se cântăresc 15 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Omogenizați amestecul. Dacă este necesar, amestecul este fiert timp de 1 minut pentru a ajuta la dizolvarea totală. Serviți în sticle de 100 ml sau tuburi de 10 ml, după cum este necesar. Autoclave la 121 ° C timp de 15 minute.

Se răcește și se folosește sau se păstrează la frigider. PH-ul final al mediului este de 7,2 ± 0,2.

Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar mediul preparat este chihlimbar deschis.

Pregătirea testelor de fermentare

La preparatul anterior, înainte de sterilizare, carbohidratul trebuie adăugat la o concentrație finală de 1%, plus indicatorul Andrade (acid fuchsin) sau fenol roșu (0,018 g / L). Tuburile trebuie să fie echipate cu un clopot Durham pentru a observa formarea gazelor.

Alte variante de apă peptonică

Apa peptonică tamponată sau tamponată

Conține hidrolizat enzimatic de cazeină, clorură de sodiu, fosfat de potasiu dihidrogen și dodecahidrat de hidrogen fosfat de sodiu. PH-ul final este de 7,0 ± 0,2.

Pentru prepararea sa, cântăriți 20 g de mediu deshidratat și dizolvați în 1 litru de apă distilată. Lăsați-l să se odihnească aproximativ 5 minute. Se încălzește 1 minut până la dizolvarea completă.

Se toarnă în borcane potrivite, după cum este necesar. Sterilizați folosind autoclavul la 121 ° C timp de 15 minute.

-Apa peptonică alcalină

Se cântăresc 25 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă. Procedați așa cum este descris mai sus. PH-ul este cuprins între 8,3 și 8,7.

Utilizare

Inoculul se face prin plasarea directă a probei.

Se folosește pentru diluarea eșantioanelor, în special atunci când se suspectează că pot exista bacterii deteriorate. De obicei diluțiile sunt de 1:10 și 1: 100.

Se incubează timp de 24 de ore în aerobioză la 35-37 ° C.

Probele de taburete

Pentru probele de scaun pentru Salmonella, se recomandă utilizarea apei tamponate sau tamponate ca mediu de pre-îmbogățire.

Pentru aceasta, procedați după cum urmează:

Dacă este format scaunul, luați 1 g de probă. Dacă sunt lichide, luați 1 ml de fecale și suspendați într-un tub cu 10 ml de apă peptonă tamponată. În cazul tampoanelor rectale, descărcați materialul conținut în tampon în tub cu apă peptonică tamponată.

În toate cazurile, amestecați și omogenizați eșantionul foarte bine.

Se incubează la 37 ° C timp de 18 până la 24 de ore. Ulterior subcultură într-un bulion de îmbogățire, cum ar fi bulionul de cistină selenită sau bulionul tetrathionat la 37 ° C timp de 18-24 ore mai mult. În cele din urmă, cultivați în medii selective pentru Salmonella, cum ar fi SS agar, XLD agar, Hektoen agar, printre altele.

Probele alimentare

Apa de peptonă este utilizată ca mediu de îmbogățire sau ca simplu diluant, dar dacă se caută specii de Salmonella, este folosită ca mediu de pre-îmbogățire, așa cum s-a descris deja.

În alimente se procedează astfel:

Pentru alimentele solide cântăriți 25 g din probă și pentru alimentele lichide măsurați 25 ml. Așezați porțiunea menționată în baloane care conțin 225 ml de apă peptonă. Amestecă și omogenizează proba.

Dacă se suspectează că sarcina microbiană este mare, se pot face diluții seriale sau zecimale pentru a facilita numărarea unităților de formare a coloniei (CFU).

Numărul diluțiilor va depinde de tipul eșantionului și de experiența analistului.

Dacă, dimpotrivă, se suspectează că sarcina microbiană este foarte mică, nu este necesar să se efectueze diluții. Ulterior, subcultura pe medii selective.

În cazul alimentelor din mare, cum ar fi crustacee, pește, printre altele, în căutarea Vibrio cholerae sau alte specii de Vibrio, apa peptonică ajustată la pH 8,5 (apă peptonică alcalină) ar trebui să fie utilizată.

QA

De la fiecare lot pregătit, trebuie să fie incubate unul sau două tuburi fără inoculare timp de 24 de ore în aerobioză la 37 ° C. La sfârșitul timpului, nu trebuie observată nicio turbiditate sau schimbare de culoare.

Tulpini de control cunoscute pot fi, de asemenea, utilizate pentru a evalua eficacitatea lor:

Pentru aceasta se pot folosi următoarele tulpini bacteriene: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 8927, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Salmonella typhimurium ATCC 1428, Salmonella enteritidis ATCC 13076.

În toate cazurile, este de așteptat o dezvoltare microbiană satisfăcătoare, care este observată de turbiditatea mediului.

limitări

-Mediul deshidratat este foarte higroscopic, deci trebuie ferit de umiditate.

-Mediul nu trebuie utilizat dacă se observă vreun tip de deteriorare.

-Mediul de cultură deshidratat trebuie păstrat între 10 - 35 ° C

-Mediul pregătit trebuie păstrat la frigider (2-8 ° C).

Referințe

1. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B și Velázquez O. Tehnici pentru analiza microbiologică a alimentelor. 2009, ediția a II-a. Facultatea de Chimie, UNAM. Mexic. Versiunea pentru Administratorul Manuale și Documente (AMyD) al Facultății de Chimie, UNAM 1. Disponibil la: http://depa.fquim.unam.mx
2. Laboratoarele Britannia. Apa peptonică bufetată. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Laboratoare Neogen. Apa peptonică. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
4. Laboratoarele Britannia. Apa peptonică. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
5. Laboratoare Merck. Apa peptonică tamponată. Disponibil la: merckmillipore.com
6. Laboratoarele Conda Pronadisa. Apa peptonică alcalină. Disponibil la adresa: condalab.com
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.