XLD AGAR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Mediul agar XLD sau Xylose Lysine desoxicolat este o cultură solidă selectivă și diferențiată pentru izolarea enteropatogenilor. Taylor a conceput formula de agar XL (Xylose, Lysine) pentru a îmbunătăți izolarea genului Shigella.

El a observat că acest gen a fost inhibat în majoritatea mediilor destinate izolării enteropatogenilor. Ulterior, s-a adăugat deoxiclolat de sodiu, tiosulfat de sodiu și citrat feric de amoniu pentru a-și crește selectivitatea. Această formulă s-a dovedit a fi utilă atât pentru izolarea Shigella cât și a Salmonella.

Diferențele dintre coloniile de Shigella, Salmonella și coliforme pe agar XLD. A. Shigella sp, B. Salmonella sp, C. Coliforms. Surse: A. De: CDC / Amanda Moore, MT; Todd Parker, doctorat; Audra Marsh, Curtoazie: Public Health Image Library B. https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/1/1f/Salmonella_species_growing_on_XLD_agar_-_Showing_H2S_production_-_Detail.jpg C. De: CDC / Dr. JJ fermier, curtoazie: Public Health Image Library

Agar XLD este compus din extract de drojdie, dezoxicolat de sodiu, xiloză, lizină, lactoză, zaharoză, tiosulfat de sodiu, citrat de amoniu feric, clorură de sodiu, roșu de fenol și agar. Agar XLD și SS agar duo sunt utilizate în majoritatea laboratoarelor de bacteriologie pentru a studia probele fecale pentru Shigella și Salmonella.

Alte laboratoare preferă combinația de CHROMagar Salmonella și XLD agar, printre alte opțiuni disponibile. Aceste duo pot fi preparate în preparate duble Petri. Pe o parte așează agar XLD și pe partea opusă celălalt mediu ales.

Bază

-Puterea neutră

Agarul XLD are extract de drojdie, care servește ca sursă de nutrienți pentru microorganismele care cresc pe acest agar. În plus, prezența carbohidraților (xiloză, zaharoză și lactoză) oferă energie bacteriilor care le pot fermenta.

-Selectivitatea mediului

Ca substanță inhibitoare, prezintă deoxiclolat de sodiu; Acest lucru previne creșterea bacteriilor Gram pozitive, conferind mediului un caracter selectiv.

-Potenta diferentiala

Coloniile tipice Shigella

După cum sa menționat deja, agarul XLD conține xiloză; Acest carbohidrat este fermentat de toate bacteriile care cresc în acest mediu, cu excepția genului Shigella.

Aceasta este una dintre caracteristicile care îi conferă caracterul său diferențial, deoarece coloniile Shigella se disting de restul dezvoltând colonii roșii, în timp ce celelalte bacterii produc colonii galbene.

Coloniile tipice de Salmonella

Genul Salmonella fermentează de asemenea xiloza, generând inițial colonii galbene. Cu toate acestea, după epuizarea xilozei de carbohidrați, atacă lizina pentru enzima sa lizină decarboxilază. Decarboxilarea lizinei generează alcalii care transformă culoarea coloniei și a mediului înconjurător spre roșul original.

Acest comportament este realizat doar de Salmonella, deoarece coliformele care decarboxilează lizina nu pot alcaliniza mediul. Acest lucru se datorează faptului că coliformele fermentează, de asemenea, lactoza și zaharoza; prin urmare, producția de acizi este foarte mare, lăsând colonia galbenă în aceste bacterii.

Trebuie menționat că genul Salmonella nu fermentează zaharoză sau lactoză.

Producția de H

XLD permite agar și detectarea H ₂ S- specii producătoare de Salmonella ; Pentru aceasta, se bazează pe sursa de sulf reprezentată de tiosulfatul de sodiu și un dezvoltator de reacție, care este citratul de amoniu feric.

Acestea din urmă reacționează cu H ₂ S (gaz incolor) și formează un precipitat insolubil vizibil negru de sulfat de fier. În acest sens, caracteristicile coloniilor de salmonella vor fi roșii cu un centru negru.

Trebuie remarcat faptul că , pentru H ₂ S Reacția de formare să aibă loc , este necesar un pH alcalin. De aceea, alte Enterobacteriaceae care formează H ₂ S nu o pot face sau o pot face în acest mediu slab, deoarece aciditatea ridicată produsă prin fermentarea carbohidraților prezenți inhibă sau împiedică reacția.

-Clorură de sodiu, agar și fenol roșu

În cele din urmă, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic; agar este agentul de solidificare și fenolul roșu detectează modificările de pH, transformând culoarea coloniilor și a mediului.

preparare

Se cântăresc 55 g de mediu XLD deshidratat și se dizolvă în 1 litru de apă. Se încălzește și se amestecă amestecul până ajunge în punctul de fierbere. Nu supraîncălziți, deoarece căldura dăunează mediului și creează un precipitat care modifică morfologia coloniilor tipice.

Acest mediu nu trebuie autorizat. La dizolvare, trebuie trecut la o baie de apă la 50 ° C. La răcire, trebuie servit direct pe vasele sterile Petri. Ele pot fi turnate în farfurii simple sau plăci duble. Se lasă să se solidifice și se păstrează la frigider până la utilizare.

Temperați înainte de utilizare. Deoarece este un mediu care nu este steril, se recomandă să-l pregătească aproape de data de utilizare.

PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,4 ± 0,2. Culoarea mediului preparat este portocaliu-roșu, translucid, fără precipitate.

Dacă aveți agar de bază Xylose Lysine (XL), puteți adăuga deoxiclolat de sodiu, tiosulfat de sodiu și citrat de amoniu de fier. În acest fel, se obține formula de agar XLD.

Aplicații

Agar XLD este utilizat pentru recuperarea enteropatogenilor, în special din genul Shigella și secundar din genul Salmonella. Este util pentru evaluarea probelor de scaun, apă și alimente.

Tipuri de probe

fecale

Probele de taburete pot fi semănate direct pe agar XLD, făcând o distribuție bună a materialului pentru a obține colonii izolate.

Pentru a îmbunătăți recuperarea Salmonella, agarul XLD poate fi eliminat din mediile de îmbogățire a Salmonella

Alimente

În cazul alimentelor, se pot folosi bulionuri de îmbogățire pentru Salmonella și Shigella. Pentru Salmonella puteți folosi bulion de cistină selenită, bulion de tetrathionate verde strălucitor, printre altele.

În cazul Shigella, acesta poate fi îmbogățit cu bulion de Shigella cu 0,5 µ / ml de novobiocină, incubat la 42 ° ± 1 ° C timp de 16-20 de ore.

Apă

În analiza apei, tehnica de filtrare a membranei și utilizarea agarului XLD sunt recomandate, printre altele.

Condiții de plantare și identificare

Mediul însămânțat este incubat aerob la 35 ° C timp de 24 până la 48 de ore.

Se observă coloniile tipice ale fiecărui gen, coloniile suspecte ar trebui să fie supuse testelor biochimice pentru identificarea lor.

QA

Pentru a evalua controlul calității mediului, se pot utiliza următoarele tulpini bacteriene: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella abony DSM 4224, Shigella flexneri ATCC 12022, Shigella sonne ATCC 25931, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 430 , Klebsiella pneumoniae ATCC 33495.

Genul Salmonella se caracterizează prin prezentarea de colonii roșii cu un centru negru sau colonii complet negre pe acest mediu. Întrucât, în genul Shigella, coloniile trebuie să fie roșii, adică culoarea mediului.

În cazul Escherichia coli, este de așteptat să fie total sau parțial inhibat; dacă crește, coloniile sunt galbene. Pentru Proteus mirabilis, este de așteptat o creștere slabă cu coloniile roz cu sau fără un centru negru. În cele din urmă, genul Klebsiella va crește ca colonii galbene.

Gânduri finale

Agar XLD este utilizat pe scară largă în laboratoarele de bacteriologie pentru eficiența ridicată pentru recuperarea Shigella și are, de asemenea, o recuperare bună a genului Salmonella.

Rall și colab. (2005) în lucrarea lor intitulată „Evaluarea a trei bulionuri de îmbogățire și a cinci medii solide pentru detectarea Salmonellei în păsări de curte” au demonstrat că din cele 3 medii clasice testate (agar verde strălucitor, agar SS și agar XLD) , XLD agar a avut cea mai bună rată de recuperare.

Procentajele de recuperare au fost următoarele: 13,8% pentru agar verde strălucitor, 27,6% pentru SS și 34,5% pentru XLD. Agar Rambach cu recuperare de 48% și CHROMagar cu 79,3% au fost depășite doar de mediile cromogene.

Referințe

1. Boli transmise alimentar. Shigelloza. Disponibil la adresa: anmat.gov.ar
2. „XLD agar”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 9 Feb 2019, 11:46 UTC. 10 Apr 2019, ora 19:25 wikipedia.org
3. Laboratoare BBL CHROMagar Salmonella / BD XLD Agar (biplate). 2013 Disponibil la: bd.com
4. Lab. Neogen. XLD agar. Disponibil la adresa: foodafety.neogen
5. Laboratorul Francisco Soria Melguizo. XLD Agar. Disponibil la: http://f-soria.es/Inform
6. Rall L, Rall R, Aragon C, Silva M. Evaluarea a trei bulionuri de îmbogățire și a cinci medii de placare pentru detectarea Salmonella la păsări de curte. Braz. J. Microbiol. 2005; 36 (2): 147-150. Disponibil de la: scielo.br
7. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.