VOGEL-JOHNSON AGAR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Agar Vogel-Johnson este un solid mediu selectiv și diferențial cultură, conceput special pentru izolarea Staphylococcus aureus. Acest mediu a fost creat de Vogel și Johnson în 1960, din modificarea agarului de glicină din telurită, formulat în 1955 de Zebovitz, Evans și Niven.

Modificarea a constat în creșterea concentrației de manitol prezent în mediu și în încorporarea unui indicator de pH. Formula actuală este compusă din tripteină, extract de drojdie, manitol, fosfat dipotazic, clorură de litiu, glicină, roșu de fenol, agar, soluție de telurit de potasiu 1% și apă.

Sursa: Pixinio.com/Laboratorio de la Clínica ProcreaTec. Flickr.

Trebuie menționat că există și alte medii care, cum ar fi Vogel-Johnson agar, sunt selective pentru izolarea S. aureus, cum ar fi manitolul sărat agar și Baird Parker agar. În acest sens, s-ar putea spune că fundamentul agarului Vogel-Johnson este un amestec între agar de manitol sărat și agar Baird Parker.

În primul, coloniile S. aureus se disting prin fermentarea manitolului și transformarea indicatorului de pH în galben. Pe de altă parte, în a doua, S. aureus se caracterizează prin reducerea teluritului la telur și formarea cenușiei la coloniile negre. Ambele proprietăți sunt observate în Vogel-Johnson agar.

Acest mediu, ca și omologii săi, este util pentru detectarea Staphylococcus aureus în probele alimentare, controalele sanitare ale produselor industriale și în probele clinice.

Bază

Alimentarea cu nutrienți

Mediul Vogel-Johnson conține extract de tripteină și drojdie; Ambele substanțe furnizează aminoacizi cu lanț lung care servesc ca surse de carbon și azot necesare pentru creșterea bacteriană. Bacteriile capabile să crească în acest mediu vor lua substanțele nutritive din aceste substanțe.

Putere selectivă

Agar Vogel-Johnson este capabil să inhibe creșterea bacteriilor Gram negative și chiar a unor bacterii Gram pozitive, favorizând dezvoltarea stafilococii coagulazei pozitivi. Substanțele inhibante sunt telurita de potasiu, clorura de litiu și glicina.

Putere diferențiată

Substanțele care formează acest mediu diferențiat sunt manitolul și teluritul de potasiu. Manitolul este un carbohidrat, iar atunci când este fermentat se produc acizi care fac ca mediul să se transforme de la roșu la galben, ceea ce se întâmplă datorită prezenței indicatorului de pH al fenolului roșu.

Întrucât, telurul incolor atunci când este redus la teluriu metalic liber, are o culoare gri închis până la negru.

Staphylococcus aureus fermentează manitolul și reduce telurita la telur. Din acest motiv, coloniile tipice de S. aureus din acest mediu sunt cenușii sau negre înconjurate de un mediu galben.

Bacteriile care cresc în acest mediu și nu reduc telurita sau fermenta manitolul vor forma colonii transparente înconjurate de un mediu colorat în roșu, chiar mai intens decât culoarea inițială, datorită alcalinizării mediului prin utilizarea peptonelor.

Pe de altă parte, bacteriile care reduc teluritul, dar nu fermentează manitolul, vor crește ca colonii gri sau negre, înconjurate de un mediu roșu profund.

Dacă mediul ar fi preparat fără adăugarea de telurit de potasiu, coloniile de S. aureus s-ar dezvolta sub formă de colonii galbene, înconjurate de mediu galben, ca în agarul de manitol sărat.

Echilibrul osmotic și agent de solidificare

Fosfatul de diotasiu menține echilibrul osmotic al mediului și ajustează pH-ul la neutralitate 7.2. În timp ce agarul dă consistență solidă mediului de cultură.

preparare

Soluție de telurit de potasiu 1% în greutate

Această soluție nu este inclusă în mediul deshidratat, deoarece nu poate fi sterilizată într-o autoclavă. Din acest motiv, este preparat separat și adăugat la mediu deja sterilizat.

Unele case comerciale vând soluția gata de utilizare de soluție de telurit de potasiu de 1%. Dacă doriți să vă pregătiți în laborator, procedați după cum urmează:

Se cântăresc 1,0 g de telurit de potasiu și se măsoară 100 ml de apă distilată. Se dizolvă telurita de potasiu într-o parte de apă și apoi se completează cantitatea de apă până la 100 ml. Sterilizați soluția prin metoda de filtrare.

Vogel-Johnson Agar Base Medium

Se cântărește 60 gr de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Amestecul este încălzit la fierbere pentru a ajuta la dizolvarea completă. În timpul procesului de dizolvare, mediul este agitat frecvent.

Sterilizați în autoclav la presiune de 15 kilograme și 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți din autoclav și lăsați-l să se odihnească până când mediul atinge o temperatură de aproximativ 45 până la 50 ° C. Se adaugă 20 ml soluție de telurit de potasiu 1% preparată anterior.

Se amestecă și se toarnă în vasele sterile Petri. Se lasă să se solidifice și să se ordone inversat pe suporturile pentru plăci pentru a le păstra ulterior în frigider până la utilizare.

PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 7,2 ± 0,2.

Înainte de a semăna o probă, așteptați ca placa să atingă temperatura camerei.

Culoarea mediului preparat este roșu.

Utilizare

Deși poate fi utilizat pentru izolarea S. aureus în orice tip de probe, este utilizat în cea mai mare parte pentru analiza microbiologică a produselor farmaceutice, cosmetice și alimentare.

Se recomandă ca inoculul să fie dens. Semănatul se poate face prin notare cu un mâner de platină sau pe suprafață cu o spatulă Drigalski.

Plăcile sunt incubate la 35-37 ° C pentru 24 - 48 ore de aerobioză.

QA

Următoarele tulpini de control pot fi utilizate pentru a efectua controlul calității pe mediu Vogel-Johnson:

Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 sau Proteus mirabilis ATCC 43071.

Rezultatul scontat este următorul: pentru S. aureus creșterea satisfăcătoare a coloniilor negre înconjurate de mediu galben. Pentru S. epidermidis creștere regulată cu colonii translucide sau negre înconjurate de mediu roșu.

De asemenea, este de așteptat inhibarea totală pentru E. coli și inhibarea parțială sau totală pentru Proteus mirabilis; dacă crește, va face acest lucru cu cruzime, iar coloniile vor fi negre înconjurate de o culoare roșie.

Referințe

1. Laboratoare BD. VJ (Vogel și Johnson Agar). 2006. Disponibil la adresa: bd.com
2. Laboratoarele Britannia. Vogel- Johnson Agar. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Laboratoarele Britannia. Tellurit de potasiu. 2015. Disponibil la adresa: britania.com
4. Laboratorul Himedia Vogel- Johnson Agar Mediu. 2018. Disponibil la adresa: himedialabs.com/TD/MU023.pdf
5. Vogel- Johnson Agar Base. Manual de microbiologie Merck. Ediția a XII-a, pp. 502-503. Disponibil la: Utilizatori / Echipa / Descărcări
6. Colaboratorii Wikipédia, "Ágar Vogel Jonhson", Wikipédia a o enciclopedie gratuită, disponibilă la: wikipedia.org.
7. Convenția standardului venezuelean 1292-89. (1989). Foods. Izolarea și enumerarea Staphylococcus aureus. Disponibil la: sencamer.gob.ve