AGAR VERDE STRĂLUCITOR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Strălucitor agarul verde este un mediu de cultură solid , cu grad ridicat de selectivitate. Este utilizat exclusiv pentru izolarea tulpinilor din genul Salmonella, cu toate acestea există câteva excepții, cum ar fi speciile de typhi și paratyphi care nu cresc pe acest mediu.

Căutarea genului Salmonella este frecventă în probe de scaun, apă sau alimente. În acest sens, acest mediu poate fi foarte util. Acest agar a fost creat în 1925 de Kristensen, Lester și Jurgens, ulterior a fost modificat de Kauffmann.

Agar verde strălucitor. Coloniile de fermentare și respectiv de fermentare. Sursa: expoziție MJ Richardson / Invisible Worlds - 2012geograph.org.uk/photo/2815842 Licență Creative Commons.

Este compus din pluripeptone din digestia peptică a țesutului animal și digestia pancreatică a cazeinei, conține, de asemenea, extract de drojdie, clorură de sodiu, lactoză, zaharoză, roșu de fenol, verde strălucitor și agar-agar.

Se caracterizează prin a fi un mediu destul de inospital pentru majoritatea bacteriilor, favorizând creșterea Salmonellei, cu toate acestea unele coliforme sunt capabile să subziste în el, dezvoltându-se slab.

Este important de menționat că genul Shigella nu crește pe acest mediu și nici Salmonella typhimurium sau Salmonella paratyphi. Prin urmare, dacă doriți să izolați aceste microorganisme, ar trebui utilizate alte medii, cum ar fi XLD agar, printre altele.

Bază

Agar verde strălucitor

Fiecare dintre componentele care alcătuiesc mediul îndeplinește o funcție specifică care determină caracteristicile și proprietățile agarului.

Pluripeptonele și extractul de drojdie sunt sursa de nutrienți din care microorganismele iau azotul și mineralele necesare dezvoltării lor. Lactoza și zaharoza sunt surse de energie pentru microorganisme care sunt capabile să le fermenteze.

Verde strălucitor este substanța inhibitoare care împiedică creșterea bacteriilor Gram pozitive și a unui număr mare de microorganisme Gram negative.

Clorura de sodiu asigură stabilitate osmotică mediului. În timp ce roșu fenol este indicatorul de pH, acesta capătă culoare atunci când detectează producția de acid din fermentația carbohidraților.

Coloniile care nu fermentează lactoza și zaharoza cresc pe acest mediu într-o culoare albă roz sau transparentă, pe fond roșu. De exemplu, bacteriile din genul Salmonella.

În timp ce bacteriile care fermentează lactoză sau zaharoză, capabile să crească pe acest mediu, dezvoltă colonii galben-verzi sau galben-verzi pe un fond galben verzui. De exemplu, Escherichia coli și Klebsiella pneumoniae.

Variante de agar verde strălucitoare (BGA)

Există și alte variante de agar verde strălucitor; Novobiocină Glucoză verde strălucitoare (NBG) Agar și Novobiocină Agar Glicerol Brilliant Verde (NBGL) Agar.

Novobiocin Glar Green Glar Agar

Conține agar de soia Trypticase, citrat de amoniu feric, pentahidrat de tiosulfat de sodiu, roșu de fenol, glucoză, verde strălucitor, novobiocină și apă distilată.

Este utilizat pentru izolarea coloniilor de Salmonella din probe de scaun.

În acest caz, verdele strălucitor și novobiocina sunt substanțele inhibitoare care împiedică creșterea bacteriilor Gram pozitive și a unor microorganisme Gram negative.

Tiosulfatul de sodiu este sursa de sulfură, iar citratul feric este sursa de fier, ambele necesare pentru a dezvălui producerea de sulfură de hidrogen prin formarea unui precipitat de sulfură ferică neagră.

Glucoza este carbohidratul fermentabil, iar roșul fenol este indicatorul de pH.

Pe acest mediu, coloniile de Salmonella se dezvoltă mari cu un centru negru înconjurat de un halon roșiatic și urmat de o zonă vizibilă. Unele tulpini de Citrobacter freundii produc colonii identice cu cele ale Salmonella.

Novobiocin Agar Glicerol Verde Lactoză (NBGL)

Acest mediu conține agar de soia tripticază, citrat feric de amoniu, tiosulfat de sodiu, lactoză, glicerol, verde strălucitor, novobiocină și apă distilată.

Diferența dintre acest mediu și precedent este că glucoza este substituită cu lactoză și glicerol și nu se folosește roșu fenol.

Mediul este folosit și pentru izolarea speciilor de Salmonella, coloniile se dezvoltă negru, datorită producției de hidrogen sulfurat.

Doar coloniile care nu produc acid din glicerol sau lactoză obțin o producție suficientă de H ₂ S, deoarece pH-ul scăzut interferează cu formarea de H ₂ S. Aceasta duce la colonii incolore pentru majoritatea speciilor de Proteus și Citrobacter.

preparare

-Păsărește 58 de grame de mediu deshidratat obținut comercial. Adăugați-l la un litru de apă redistilată. Amestecați, lăsați să stea câteva minute și puneți amestecul pe o sursă de căldură până la dizolvarea completă.

-Autoclave la 121 ° C timp de 15 minute, nu depășește timpul de sterilizare.

-Se lasă să se odihnească și se servește cât este fierbinte în vasele sterile Petri. PH-ul final trebuie să fie de 6,9 ​​± 0,2.

-Se solidifică și se păstrează la frigider până la utilizare. Înainte de a semăna plăcile trebuie să ia temperatura camerei.

-Mediul de pulbere are culoare verde și pregătit are o culoare maro-portocaliu sau verde-roșiatic, în funcție de pH și de compania comercială. O culoare foarte maronie indică faptul că agarul a fost supraîncălzit.

-Dupa ce agarul s-a solidificat, nu se recomandă reformarea, deoarece mediul se deteriorează.

Utilizări / aplicații

Acest mediu este utilizat pentru a căuta tulpini din genul Salmonella din probe de scaun și alimente lactate, printre altele.

Deoarece este un mediu destul de inospital, este indicat să semeni un inocul abundent dacă se folosește proba directă. În caz contrar, înainte de semănat în acest mediu, trebuie făcută o îmbogățire prealabilă și îmbogățirea specimenelor.

Deoarece unele tulpini de Salmonella sunt inhibate sau cresc cu dificultate, este recomandabil să se însoțească acest mediu cu un alt agar selectiv pentru Salmonella.

Fiecare colonie cu o caracteristică tipică Salmonella trebuie să fie supusă testelor biochimice pentru identificarea ei definitivă.

QA

Pentru a testa performanțele bune ale mediului agar verde strălucitor, tulpinile ATCC pot fi folosite pentru a observa dezvoltarea lor pe acesta.

Cele mai frecvente tulpini utilizate pentru controlul calității sunt: ​​Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Escherichia coli ATCC 25922, Shigella flexneri ATCC 12022, Staphylococcus aureus ATCC 6538.

Primele 3 ar trebui să dea coloniile roz roz sau transparente pe fond roșu. Salmonella cu dezvoltare bună și Proteus cu creștere mică sau regulată.

Pentru Klebsiella și Escherichia, sunt așteptate colonii de culoare galben-verde cu fond galben, iar în cazul Shigella și Staphylococcus ar trebui inhibate.

Mediul deshidratat trebuie păstrat la temperatura camerei, într-un loc uscat, deoarece mediul este foarte higroscopic.

Referințe

1. Laboratorio Difco Francisco Soria Melguizo SA Agar Verde strălucitor. 2009
2. Laboratorul Britannia. Agar verde strălucitor. 2015.
3. Laborator BD. BD Brilliant Green Agar. 2013.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. 2009. Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA