TSI AGAR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Agarul STI sau triplu agar - agar - fier zahăr este un mediu solid care servește ca un test de biochimic pentru a ghida identificarea inițială a negativ bacili Gram. Se bazează pe demonstrarea fermentației zaharurilor prezente și producerea de hidrogen sulfurat și gaz.

Compoziția și baza sa sunt foarte similare cu testul Kligler fier, cu diferența că acesta din urmă conține doar glucoză și lactoză. În schimb, așa cum sugerează și numele său, agarul de fier triplu zahăr conține trei carbohidrați fermentabili: glucoză, lactoză și zaharoză.

Imagini ale testului TSI cu diferite microorganisme A. Escherichia coli, B. Shigella flexneri, C) Salmonella typhimurium, D. Pseudomonas aeruginosa. Sursa: Witmadrid, de la Wikimedia Commons

În plus, mediul STI are patru derivați de proteine ​​care îl fac un agar foarte hrănitor: extract de drojdie, extract de carne, peptonă și peptonă proteică. De asemenea, conține sulfat feros de amoniu, tiosulfat de sodiu, clorură de sodiu, roșu de fenol și agar.

Incapacitatea unui microorganism de a fermenta glucoza prezentă în mediu o exclude imediat de la apartenența familiei Enterobacteriaceae. Prin urmare, acest test este esențial pentru a decide ce cale de identificare să ia pentru a determina genul și specia.

Fiecare laborator decide dacă lucrează cu agar TSI sau cu agar de fier Kligler.

Bază

Fiecare dintre compuși îndeplinește o funcție în mediu.

Clorură de sodiu și agar

Clorura de sodiu este necesară pentru a menține echilibrul osmotic al mediului. În timp ce agarul dă consistență solidă.

Indicator PH (roșu fenol)

PH-ul mediului preparat este echilibrat la 7,3, iar indicatorul de pH (roșu de fenol) devine galben sub 6,8. Aceasta înseamnă că cantități mici de acizi produși prin fermentarea zaharurilor vor transforma mediul de la roșu-portocaliu la galben.

Dacă nu are loc fermentarea, va exista alcalinizarea mediului prin utilizarea peptonelor, de la roșu-portocaliu la roșu puternic.

Derivați proteici (extract de drojdie, extract de carne, peptonă și peptonă proteică)

Atunci când bacteriile metabolizează proteinele prezente în agar TSI, sunt produse amine care alcalinizează mediul (în principal la nivel de teș), deoarece reacția necesită oxigen. Aminele devin roșu aprins.

Dar acest lucru va depinde de capacitatea bacteriilor de a fermenta carbohidrații sau nu.

Fermentarea carbohidraților (glucoză, lactoză și zaharoză)

Studiul fermentației zaharurilor poate da mai multe imagini și fiecare este interpretată diferit. Interpretarea testului împarte microorganismele în 3 categorii: non-fermentații ai glucozei, neferiferelor pentru lactoză și fermentatoare pentru lactoză / zaharoză.

Trebuie menționat că cantitatea de glucoză din mediu este limitată, în timp ce concentrația de lactoză și zaharoză este de 10 ori mai mare.

Bacteriile familiei Enterobacteriaceae și alte microorganisme care fermentează glucoza vor începe să fermenteze acest zahăr, deoarece este cel mai simplu carbohidrat pentru energie.

Pe de altă parte, lactoza și zaharoza sunt carbohidrați complexi care trebuie descompuse și transformate în glucoză pentru a putea intra în ciclul Embden-Meyerhof.

-Microorganisme care nu fermentează glucoza

Atunci când microorganismul inoculat nu este în stare să fermenteze glucoza, cu atât mai puțin va putea fermenta alți carbohidrați. Prin urmare, nu se formează acizi aici, dar se formează amine în teș prin utilizarea peptonelor.

În acest caz, luneta se transformă într-un roșu mai puternic, iar partea inferioară a tubului poate rămâne neschimbată sau poate fi alcalinizată, lăsând întregul tub roșu.

Interpretare: K / K semnifică funda alcalină / fundal alcalin sau neutru

În imaginea de la începutul articolului vezi imaginea tubului D.

Acest rezultat indică faptul că microorganismul nu aparține familiei Enterobacteriaceae.

-Microorganisme care nu fermentează lactoza / zaharoza

Dacă bacteriile sunt capabile să fermenteze glucoza, dar nu lactoză sau zaharoză, se vor întâmpla următoarele:

Bacteriile vor consuma toată glucoza prezentă după aproximativ 6 până la 8 ore, putând acidula atât tecul cât și blocul; adică agarul va fi complet galben. Dar, atunci când glucoza este epuizată și lactoza și zaharoza nu pot fi utilizate, bacteriile vor începe metabolismul proteinelor.

Această reacție are nevoie de oxigen, de aceea degradarea peptonelor are loc la suprafață (teș). Aminele produse alcalinizează luneta transformând de la galben la roșu. Această reacție este evidențiată după 18 până la 24 de ore de incubare.

Interpretare: K / A înseamnă ciot alcalin și paie acid.

În imaginea de la începutul articolului vezi imaginea tubului B.

-Microorganisme care fermentează lactoza / zaharoza

Microorganismele capabile să fermenteze lactoza și zaharoza pot fermenta, evident, glucoza. După consumarea cantității minime de glucoză prezentă în mediu, piruvatul format începe să se metabolizeze pentru a forma acizi prin ciclul aerobic Krebs, iar în intervalul de 8 până la 12 ore, tot mediul va fi galben.

Dacă bacteriile sunt capabile să descompună lactoza sau zaharoza, acizii vor continua să fie produși, iar după 18 până la 24 de ore, întregul tub - teș și dop - va continua să se îngălbenesc.

Trebuie remarcat faptul că utilizarea glucozei se realizează în două moduri: unul aerobic la tevul tubului, iar celălalt în mod anaerob în partea inferioară a tubului.

Interpretare: A / A inseamna funda acida / fund. Poate sau nu să aibă gaz.

În imaginea de la începutul articolului vezi imaginea tubului A.

Producția de gaz

Unele microorganisme sunt capabile să producă gaz în timpul fermentației zaharurilor. Gazul este evidențiat în tub prin presiunea pe care o exercită în interiorul agarului. Presiunea provoacă formarea de bule sau deplasarea agarului. Uneori, formarea gazului poate fractura mediul.

Este important ca la semănarea mediului TSI, puncția să fie făcută curat prin centrul agarului până când ajunge la fund. Dacă puncția este deviată către pereții tubului, poate provoca false pozitive în producerea gazului, deoarece acesta va scăpa prin canalul format greșit.

Producția de gaz, precum și reacțiile care apar în teama de agar au nevoie de oxigen, de aceea se recomandă ca tubul să fie acoperit cu un dop de bumbac, iar dacă se folosește un capac Bakelite, acesta nu trebuie să fie complet strâns.

Producția de gaz este raportată ca pozitivă (+) sau negativă (-).

Modele de formare a gazelor. Sursa: Schema realizată de MSc. Marielsa Gil. Sursa imaginii: VeeDunnFlickr.com/Y_tambe, prin Wikimedia Commons

Tiosulfat de sodiu și sulfat de amoniu feros

Bacteriile capabile să producă hidrogen sulfurat (gaz incolor) preiau sulful din tiosulfatul de sodiu prezent în mediu. Odată format H ₂ S, reacționează cu sulfat de amoniu feroasă, producând sulfură de fier (precipitat negru clar vizibil).

H ₂ producția S este raportată ca fiind pozitiv (+) sau negativ (-).

În imaginea de la începutul articolului vezi imaginea tubului C.

preparare

Se cântăresc 62,5 g de mediu triplu deshidratat cu agar de fier (TSI) și se dizolvă într-un litru de apă distilată.

Se încălzește până la dizolvarea completă a agarului. Se fierbe un minut, amestecând frecvent. Distribuie 4 ml de mediu în epruvete de 13/100 cu capace de bumbac.

Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți din autoclav și lăsați-l să se odihnească în unghi. Trebuie avut grijă ca atât baza cât și luneta să aibă aceeași distanță.

Păstrați la frigider 2-8 ° C. Lăsați-l să se încălzească înainte de a semăna tulpina bacteriană.

Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar mediul pregătit este roșu-portocaliu.

PH-ul final al mediului preparat este de 7,3 ± 0,2.

Aplicații

Testul TSI este utilizat pe scară largă la nivelul laboratorului de microbiologie. Acest test este esențial pentru a ghida tipul de test care trebuie aplicat pentru a identifica genul și specia. Buna ei execuție și interpretare poate economisi materiale și forță de muncă.

Dacă rezultatul este un TSI K / K și testul citocrom oxidazei este pozitiv, se știe că testele trebuie utilizate pentru identificarea tijelor Gram negative care nu fermentează, precum Pseudomonas, Alcaligenes, Achromobacter, Burkholderia, printre alte genuri. Dacă este oxidază negativă, este orientată spre genurile Acinetobacter, Stenotrophomonas etc.

Pe de altă parte, dacă se obține o TSI A / A sau K / A și testul citocrom oxidazei este negativ, cu cât mai mulți nitrați se reduc la nitriți, vom fi siguri că este un microorganism aparținând familiei Enterobacteriaceae. În acest caz, calea de identificare se va concentra pe teste specifice pentru acest grup de bacterii.

Pe de altă parte, dacă se obține o imagine K / A sau A / A și testul citocrom oxidazei este pozitiv, testele suplimentare care urmează să fie asamblate vor avea ca scop identificarea tulpinilor fermentante care nu aparțin familiei Enterobacteriaceae, cum ar fi: Aeromonas, Plesiomonas, Vibrio și Pasteurella.

O STI cu hidrogen sulfurat, oxidază negativă, va ghida identificarea următoarelor genuri din familia Enterobacteriaceae: Proteus, Citrobacter, Edwardsiella, Leminorella, Pragia, Trabusiella sau Salmonella.

O STI cu sulfură de hidrogen mică sau moderată în tevul alcalin, cu fond alcalin și o oxidază pozitivă va ghida utilizarea testelor pentru identificarea tijelor Gram-negative neproducătoare de H ₂ S, precum Shewanella putrefaciens.

În cele din urmă, STI poate fi utilizat pentru investigarea producției de sulfură de hidrogen în bacili Gram pozitivi, în special atunci când este suspectat Erysipelothrix rhusiopathiae.

însămânțat

Mediul STI trebuie inoculat cu colonii pure, izolat în culturi primare sau selective. Dacă colonia este prelevată din medii selective care au fost însămânțate cu probe cu floră mixtă, trebuie avut grijă să se ia doar de la suprafață, deoarece în partea inferioară a coloniei pot exista tulpini viabile inhibate în acel mediu.

Prin urmare, bucla nu trebuie niciodată răcită pe mediu selectiv și apoi colonia este preluată și inoculată cu mediu TSI.

Semănatul se va face cu o buclă dreaptă sau ac. Se va face o puncție, având grijă ca aceasta să fie prin centrul mijlocului până la atingerea fundului, iar apoi semănatul să se termine prin inocularea suprafeței în formă de zig-zag. Nu faceți două perforații.

Se incubează la 37 ° C în aerobioză timp de 18-24 ore. Interpretați în acest moment, nici înainte, nici după.

limitări

Testul STI trebuie citit în termen de 18 până la 24 de ore de la incubare. O citire înainte de acest moment poate oferi o falsă pozitivă pentru fermentația A / A. Între timp, o lectură după acest timp poate da naștere unei imagini false negative a unui non-fermentator, datorită consumului de peptone care alcalinizează mediul.

Referințe

1. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. "Agar STI." Wikipedia, enciclopedia gratuită. 10 iulie 2018, 08:09 UTC. 10 Feb 2019, 03:33 Disponibil pe: es.wikipedia.org
5. Laboratoarele Britannia. Agar TSI (agar de fier triplu zahăr). 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
6. Laboratoare BD. Agar de fier triplu zahăr (TSI Agar). 2003. Disponibil la adresa: bd.com