THAYER MARTIN AGAR: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2024

Agar Thayer Martin acesta este un mediu selectiv foarte nutritiv și solide pentru izolarea Neisseria meningitidis și Neisseria gonorrhoeae; ambele cunoscute sub denumirea de Neisserias patogene sau clinic importante.

Una dintre cele mai importante caracteristici speciale ale Thayer Martin Agar este conținutul ridicat de suplimente nutritive. Această proprietate este esențială, deoarece Neisserias sunt microorganisme foarte solicitante din punct de vedere nutrițional și, prin urmare, nu cresc în mediile comune.

Thayer Martin / Agar Thayer Martin mediu de afaceri. Imagine sursă 1: Luată de autor MSc. Marielsa Gil, imaginea 2. Bacteria Pixinio.comcolcolizată, modificată, Thayer, Martin, agar.

Pe de altă parte, întrucât aceste microorganisme se găsesc în mod normal în zone nesterile, adăugarea de inhibitori este necesară pentru a împiedica creșterea florei însoțitoare, fără a afecta dezvoltarea genului Neisseria.

Acest agar este compus din agar de bază GC, hemoglobină, suplimente nutritive suplimentare și un complex de substanțe inhibitoare (antibiotice și antifungice). Casele comerciale vând fiecare supliment suplimentar.

Eșantionul care va fi semănat în acest mediu va depinde de microorganismul căutat. Pentru Neisseria gonorrhoeae, exemplarele ideale sunt secrețiile vaginale și uretrale. În timp ce pentru Neisseria meningitidis, cele mai utilizate probe sunt CSF, exudate faringiene și nazofaringiene.

Bază

Neisserias sunt microorganisme clasificate ca enervante și, prin urmare, izolarea lor este dificilă. Prin urmare, Thayer Martín este un mediu complex și fiecare dintre componentele sale îndeplinește o funcție care este explicată mai jos:

Agar de bază GC

Agar GC conține proteină peptonă, amidon de porumb, clorură de sodiu, fosfat dipotasiu, fosfat monopotasiu și agar-agar. Componentele sale furnizează substanțele nutritive de bază pentru dezvoltarea microbiană, neutralizează acizii grași toxici, ajută la menținerea echilibrului osmotic, definește pH-ul și oferă o consistență solidă mediului.

Hemoglobină

Hemoglobina furnizează factorii V și X (nicotinamidă adenină dinucleotidă NAD și respectiv hemin). Din acest motiv, speciile Haemophilus cresc și în acest mediu. Hemoglobina poate fi obținută comercial sub formă deshidratată sau s-a adăugat în mediu sânge de bovine proaspăt defibrinat.

Supliment de îmbogățire

Pe de altă parte, trebuie adăugat și un supliment de îmbogățire la mediul Thayer-Martin, deoarece substanțele nutritive conținute în agarul de bază nu sunt suficiente pentru cerințele genului Neisseria.

Cel mai des utilizat supliment de îmbogățire se numește isovitalex. Conține glutamină, adenină, NAD, cocarboxilază, guanină, azotat feric, acid p-amino benzoic, vitamina B12, tiamină și glucoză. Toți acești compuși sunt necesari pentru dezvoltarea corespunzătoare a Neisserias patogene.

inhibitori

Deoarece este un mediu extrem de hrănitor, trebuie folosiți inhibitori care împiedică creșterea microorganismelor din flora obișnuită a zonei și favorizează astfel izolarea genului Neisseria.

Complexul inhibitor este compus din vancomicină, colistină și nistatină. Vancomicina inhibă creșterea bacteriilor Gram pozitive, colistina împiedică creșterea bacteriilor Gram negative, cum ar fi Pseudomonas și unele Neisserias saprofite, și nistatina acționează asupra drojdilor precum Candida albicans.

Cu toate acestea, Thayer Martin Agar a fost ulterior modificat; modificările au constat în adăugarea de trimetoprim, creșterea cantității de agar și adăugarea de glucoză suplimentară. Aceste modificări au îmbunătățit semnificativ recuperarea speciilor de Neisseria gonorrhoeae.

Trebuie menționat faptul că trimetoprimul inhibă creșterea genului Proteus și formarea sa roșie în consecință. În acest sens, antibioticele furnizează caracterul selectiv mediului Thayer Martin.

preparare

Agar original Thayer Martin

-GC agar

Se cântăresc 8,2 g mediu GC deshidratat și se suspendă în 100 ml. Se amestecă și se fierbe timp de 1 minut cu agitare frecventă pentru a se dizolva complet. Sterilizați amestecul într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

- 2% hemoglobină

Suspendă 2 g de hemoglobină deshidratată în 2 sau 3 ml de apă distilată fierbinte până când se formează un amestec uniform. Adăugați puțin câte puțin apă pentru a completa un volum de 100 ml. Suspensia trebuie să fie omogenă înainte de sterilizare.

Sterilizați în autoclav 15 minute.

-Suplus de îmbogățire

Reconstituiți flaconul comercial cu diluantul furnizat de aceeași societate comercială. Amesteca bine. Cantitatea de diluant de utilizat va fi specificată în instrucțiunile kitului.

- supliment de inhibiție VCN (vancomicină, colistină, nistatină)

Reconstituiți flaconul cu diluantul furnizat de societatea comercială. Amesteca bine. Cantitatea de diluant de utilizat va fi specificată în instrucțiunile kitului.

-Pregătit

Pentru fiecare 100 ml de agar GC se procedează după cum urmează:

Când agarul GC părăsește autoclavul, lăsați-l să se răcească la o temperatură de aproximativ 50 ° C și adăugați 2 ml de soluție de hemoglobină preparată, 2 ml de supliment de îmbogățire (izobitalex sau britalex) și 2 ml de supliment de inhibiție. Se amestecă și se servește în preparate Petri sterile.

Lăsați să se solidifice și păstrați la frigider până la utilizare.

Culoarea mediului preparat este roșu cherry. PH-ul final al mediului este de 7,2 ± 0,2

Ager Thayer Martin modificat

Se cântăresc 8,2 g mediu GC deshidratat și se suspendă în 100 ml. Se adaugă 1 g de agar-agar și se adaugă 0,3 g de glucoză. Se amestecă și se fierbe timp de 1 minut cu agitare frecventă pentru a se dizolva complet. Sterilizați amestecul într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

Pregătiți hemoglobina și suplimentul de îmbogățire, așa cum s-a descris anterior.

Suplimentul de suprimare utilizat este VCNT (vancomicină, colistină, nistatină, trimetoprim).

-Pregătit

Procedați așa cum este descris pentru agarul Thayer Martin original.

Utilizare

Thayer Martin Agar trebuie lăsat să se încălzească înainte de epruvetarea epruvetelor. Probele utilizate în mod obișnuit sunt tampoanele faringiene, tampoanele nazale, secrețiile vaginale, uretrale și / sau rectale și LCR.

Folosiți probe proaspete și faceți inocule puternice pe agar. Eșantioanele sunt însămânțate direct prin descărcarea materialului și apoi epuizarea pe suprafață.

Plăcile sunt incubate la 35-37 ° C timp de 24 până la 48 de ore într-un borcan microaerofil (5% CO ₂ ). La sfârșitul timpului de incubație, plăcile sunt examinate pentru coloniile mici, gri și uneori cu aspect mucoid.

Efectuați teste bio și chimice confirmative pe colonii suspecte.

QA

Următoarele tulpini microbiene pot fi utilizate pentru controlul calității Thayer Martin Agar.

Neisseria gonorrhoeae ATCC 49226 și Neisseria meningitidis ATCC 13090; o dezvoltare satisfăcătoare este așteptată în ambele tulpini.

De asemenea, trebuie incluse următoarele tulpini: Staphylococcus epidermidis ATCC 14990, Escherichia coli ATCC 25922, Proteus mirabilis ATCC 43071 și Candida albicans ATCC 10231. În toate acestea, este de așteptat o inhibare totală sau parțială în acest mediu.

limitări

-Trebuie să țineți cont de faptul că bacteriile rezistente la inhibitorii folosiți pot crește în mediu.

-Există tulpini de Neisseria gonorrhoeae care pot fi sensibile la concentrația de vancomicină utilizată. Din acest motiv, se recomandă utilizarea agarului de ciocolată suplimentat cu isovitalex, dar fără inhibitori.

-Există tulpini de drojdie rezistente la nistatină, care pot crește în acest mediu și pot interfera cu izolarea Neisserias patogene, în special a gonococilor.

Referințe

1. Laboratoare de diagnostic Valtek. Thayer-Martin Agar. 2016. Disponibil la adresa: com
2. Laboratoarele Britannia. Thayer Martin Medium Modified. 2010. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Colaboratorii Wikipedia. Agă Thayer-Martin. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 26 octombrie 2017, ora 16:33 UTC. Disponibil la: wikipedia.org 4. Accesat pe 28 februarie 2019.
4. Laboratoarele Britannia. GC agar. 2010. Disponibil la adresa: britanialab.com.
5. Laboratoare BBL ™ Enrichment Mediu pentru Microorganisme Fastidioase. 1999. Disponibil în: bd.com
6. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.