TCBS agarul este un mijloc de cultură solid înalt selectiv și diferențial, utilizate pentru izolarea si cultivarea bacteriilor din genul Vibrio, in special Vibrio cholerae, V. parahaemolyticus și V. vulnificus ca patogeni majori de acest gen.
Acronimul TCBS înseamnă Thiosulfate Citrate Bile Sucrose. Acest agar este cunoscut și ca mediu selectiv pentru Vibrios. Formula originală a fost creată de Nakanishi și ulterior modificată de Kobayashi.
Mediu TCBS comercial și placă de agar TCBS însămânțate cu Vibrio cholerae. Sursa: foto 1: realizată de autor MSc. Marielsa Gil / Foto 2: Microrao, JJMMC, Davangere, Karnataka, India
Este compus din extract de drojdie, peptonă de carne, tripteină, citrat de sodiu, tiosulfat de sodiu, bilă de boi, zaharoză, clorură de sodiu, citrat feric, albastru bromotimol, albastru timol și agar.
Această compoziție permite o dezvoltare adecvată a speciilor Vibrio din probe de apă, alimente și fecale; cu excepția Vibrio hollisae, care nu crește pe acest mediu. Mai mult, mediul TCBS este capabil să inhibe creșterea altor bacterii însoțitoare, în special coliformele.
Datorită problemelor grave gastrointestinale și extra-intestinale produse de unele specii din genul Vibrio, diagnosticul acestuia este foarte important. Oamenii sunt infectați în principal prin consumul de alimente crude sau necoapte din mare sau din apele poluate, dar și prin infecția rănilor.
Din această cauză, laboratoarele clinice trebuie să includă agar TCBS în studiul culturii de scaun a probelor de scaun lichid, în special cu apariția apei de orez. Mai ales dacă pacientul raportează că a fost în contact cu apa de mare sau că a consumat crustacee sau pește.
Bază
Extractul de drojdie, peptonele din carne și tripteina sunt sursa nutritivă a acestui mediu. Cu toate acestea, agar TCBS este un mediu inospital pentru majoritatea bacteriilor.
Selectivitatea sa ridicată este dată de adăugarea de citrat de sodiu și bilă de boi; ambii sunt agenți inhibitori care asigură, de asemenea, un pH alcalin mediului, restricționând creșterea florei însoțitoare și favorizând creșterea V. cholerae, printre alte specii. Trebuie menționat că Vibrio cholerae este foarte sensibil la aciditate.
La rândul său, clorura de sodiu echilibrează osmotic mediul. Mai mult, întrucât concentrația sa este mare, acționează și ca agent inhibitor, favorizând creșterea bacteriilor halofile.
Sucroza este zahărul fermentabil care, împreună cu indicatorii de pH albastru bromotimol și albastru timol, conferă mediului caracterul său diferențial. Din acest motiv, cu acest mediu este posibilă diferențierea tulpinilor care fermentează zaharoză de cele care nu fermentează.
Coloniile de tulpini care fermentează zaharoză au culoare galbenă și vor transforma mediul de la verde la galben datorită producției de acid. Neferiferele cresc translucide, iar mediul rămâne culoarea originală (verde).
De asemenea, acest mediu conține tiosulfat de sodiu ca sursă de sulf și citrat feric ca agent de dezvoltare. Ambele prezintă bacterii capabile să producă hidrogen sulfurat (gaz incolor). H 2 S este format din Tiosulfat și , ulterior , după reacția cu citrat feric un vizibil formează un precipitat negru.
În cele din urmă, agarul este ceea ce oferă consistența solidă mediului.
preparare
Se cântăresc 89 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Ajutați la dizolvarea prin încălzire și agitare frecventă. Amestecul poate fi fiert până la 2 minute.
Acest mediu nu este autoclavat. După dizolvare, se servește direct pe plăci sterile. Când se solidifică, sunt aranjate într-un mod inversat pe trombocite și păstrate la frigider (2-8 ° C) până la utilizare.
Mediul după preparare trebuie să rămână la pH 8,6 ± 0,2.
Culoarea mediului deshidratat este bej deschis sau bej-verzui, iar culoarea mediului este verde pădure sau verde albăstrui.
Este important să permiteți plăcile să se încălzească înainte de a semăna probele.
Utilizare
Cel mai frecvent specimen pentru izolarea Vibrios este scaunul diareic.
Probele de taburet, dacă nu pot fi însămânțate imediat pe mediul selectiv, trebuie transportate pe mediul Cary Blair.
Pentru a crește sensibilitatea culturii, materiile fecale pot fi trecute prin apă peptoneă la pH 8,4 ca mediu de îmbogățire timp de maximum 8 ore, de acolo este subcultivată la mediu TCBS.
Trebuie, de asemenea, să se țină seama de faptul că unele tulpini de Vibrios pot provoca septicemie la pacienții imunosuppressi, prin urmare pot fi izolate de culturile de sânge. De asemenea, probe de apă și alimente din mare pot fi analizate atunci când există focare epidemice de boală de holeră.
însămânțat
Inoculul probei de studiu trebuie să fie proeminent, însămânțarea se realizează prin metoda striației prin epuizare. Plăcile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore în aerobioză.
Coloniile prezumtive de Vibrio cholerae sunt de dimensiuni medii, netede, opace, cu margini subțiri și de culoare galbenă datorită fermentării zaharozei.
Speciile de V. alginolyticus, V. fluvialis, V. hareyi, V. cincinnatiensis, V. furnissii, V. metschnikovii și unele V. vulnificus cresc într-un mod similar. Alte specii importante de Vibrios din punct de vedere clinic, cum ar fi V. parahaemolyticus, nu fermentează zaharoza, dezvoltându-se ca colonii verzi de măsline.
Placă de agar TCBS însămânțată cu Vibrio parahaemolyticus. Sursa: isis325 Flickr
Pe de altă parte, trebuie avut în vedere faptul că unele tulpini de Aeromonas și Plesiomonas care sunt oxidază (+) pot crește în acest mediu, dezvoltând colonii galbene care pot confunda clinicianul. În timp ce unele tulpini de Pseudomonas, de asemenea, oxidază (+) cresc ca colonii verzi ca V. parahaemolyticus.
Prescripţie
Testul de oxidază care este pozitiv pentru genul Vibrio nu trebuie efectuat niciodată din coloniile obținute din agar TCBS, deoarece rezultatul obținut va fi un fals negativ. Compușii din mijloc interferează puternic cu acest test. Prin urmare, trebuie să fie făcut din subculturi pe agar de sânge.
QA
Pentru a dovedi că mediul este în stare bună, este recomandabil să plantezi tulpini de control cunoscute sau certificate și să observe dacă creșterea respectă caracteristicile așteptate.
Pentru aceasta puteți utiliza tulpini de:
-Vibrio cholerae- - creștere satisfăcătoare (colonii galbene, graniță translucidă).
-Vibrio parahaemolyticus - - creștere satisfăcătoare (colonie cu centru verde și graniță translucidă).
-Vibrio alginolyticus ATCC 17749 - creștere satisfăcătoare (colonii galbene cu halos de aceeași culoare în jurul coloniei).
-Enterococcus faecalis ATCC 29212 - inhibare totală sau parțială (mici colonii galbene sau translucide).
-Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853-– inhibare parțială sau totală (colonii albastre).
-Escherichia coli ATCC 25922 - Complet inhibat.
-Proteus mirabilis ATCC 43071 -– Inhibare totală sau parțială. (Coloniile mici, centru verde, graniță translucidă).
Incubarea mediului neinoculat trebuie să fie neschimbată.
Referințe
- Laboratoare Difco Francisco Soria Melguizo. Agar TCBS. 2009. Disponibil la adresa: f-soria.es
- Laborator BD. BD. TCBS Agar 2003. Disponibil la adresa: bd.com
- Laboratoarele Britannia. TCBS Mediu. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
- Laboratoare Acumedia TCBS Agar. 2016. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.