Bismut sulfitul agarul este un selectiv mediu solid și cultură diferențială, special formulat pentru izolarea Salmonella enterica subspecia enterica serotip typhi, printre alte specii de Salmonella. Mediul este cunoscut sub numele de BSA agar pentru acronimul său în engleză Bismuth Sulfite Agar.
Formula originală pentru agar sulfit bismut a fost creată în 1927 de Wilson și Blair (Glucose Bismuth Sulphite Iron Medium); conținea sulfit de sodiu, glucoză, soluție de bismut, citrat de amoniu, sulfat feros și agar-agar.
Creșterea a 48 de ore de incubare a Salmonella sp pe agar sulfit bismut. Sursa: Pixnio.com Autor: Dr. WR Erving, USCDCP
Astăzi există o modificare a mediului original, compus din extract de carne, peptone din carne și cazeină, indicator sulfit de bismut, glucoză, fosfat disodic, sulfat feros, verde strălucitor și agar-agar.
Există multe mijloace pentru izolarea speciilor de Salmonella, dar când vine vorba de recuperarea serotipului Typhi, agar sulfit de bismut are un avantaj notabil față de acestea, deoarece în majoritatea acestora se obține o recuperare foarte scăzută sau nu a acestui microorganism. .
Cu toate acestea, este necesar să utilizați mai multe tipuri de mediu atunci când încercați să izolați enteropatogenii, deoarece agar sulfit de bismut este mai puțin eficient pentru alte specii de Salmonella și pentru genul Shigella, care sunt inhibate sau se dezvoltă foarte slab. în acest agar.
Trebuie menționat că, dintre toate speciile de Salmonella, serotipul Typhi este unul dintre cele mai importante enteropatogene la om, acesta fiind singurul său rezervor. Acest serovar provoacă febră tifoidă, gastroenterită, bacteremie și septicemie.
Din acest motiv, este relevant să se includă acest agar atunci când se analizează apă, fecale sau probe alimentare, unde este suspectată prezența sa.
Bază
La fel ca majoritatea mediilor de cultură, Bismuth Sulfite Agar conține nutrienți pentru a promova creșterea bacteriană, cum ar fi peptonele și extractul de carne. De asemenea, glucoza funcționează ca sursă de energie și carbon.
Cu toate acestea, nu toate bacteriile vor crește pe acest mediu, întrucât Bismuth Sulfite Agar este un mediu selectiv. Conține compuși care inhibă creșterea microorganismelor Gram pozitive și a anumitor bacterii Gram negative. Acești compuși sunt: sulfitul bismut indicator și verde strălucitor.
La rândul său, fosfatul disodic menține osmolaritatea și pH-ul mediului.
In plus, bismut sulfit agar este un mediu diferențiat datorită prezenței sulfat feros, care prezintă formarea de H 2 S. H 2 S formată de bacterii reacționează cu sulfat feros și formează un clar vizibil insolubil precipitat negru.
În cele din urmă, agar-agarul oferă consistența solidă a mediului.
preparare
Se cântăresc 52,3 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă. Se încălzește amestecul să fiarbă timp de 1 minut cu agitare frecventă, până la dizolvarea completă. Nu supraîncălziți prea mult. Acest mediu nu este autoclavabil, deoarece căldura extremă dăunează mediului de cultură.
Se lasă să se răcească la 45 ° C și se agită înainte de a se servi în vasele sterile Petri. Se recomandă realizarea plăcilor cu grosime bună. Pentru a face acest lucru, trebuie turnate 25 ml în fiecare farfurie. Să se solidifice. Deoarece este un mediu care nu este sterilizat, este normal să se sugereze utilizarea imediată a acestuia.
Cu toate acestea, un studiu realizat de D'aoust în 1977, a arătat că există o recuperare mai bună a Salmonella typhimurium și a Salmonella enteritidis pe măsură ce agarul de bismut sulfat îmbătrânește, neafectând performanțele serovarilor Typhi și Paratyphi B.
D'aoust recomandă utilizarea plăcilor în ziua a 4-a de refrigerare, deși avertizează că pe măsură ce vârstele medii, selectivitatea scade, iar tulpinile de Proteus vulgaris se dezvoltă mai ușor.
Din acest motiv, pentru probele puternic contaminate, cum ar fi fecalele, este de preferat să se utilizeze mediu proaspăt preparat. În caz contrar, folosiți în ziua a 4-a de preparare. Alți autori recomandă utilizarea plăcilor în ziua următoare după preparare, păstrate la frigider.
Plăcile refrigerate trebuie temperate înainte de utilizare. PH-ul mediului trebuie să fie de 7,5 ± 0,2. Mediul brut este bej, iar mediul preparat este opalescent gri-verzui.
Aplicații
Printre eșantioanele care pot fi plantate în acest mediu se numără mostre de fecale, apă potabilă sau reziduală și alimente.
Pentru a îmbunătăți izolatele, se recomandă efectuarea unui tratament de pre-îmbogățire cu bulion de lactoză și după îmbogățirea cu bulion tetrathionat sau bulion de selenită de cistină, înainte de a se însămânța pe agar sulfit bismut.
Plăcile sunt incubate la 35 ° C ± 0,2 timp de 24 până la 48 de ore, în aerobioză.
Caracteristicile coloniilor pe agar sulfit bismut
Coloniile de Salmonella Typhi sunt de obicei observate pe acest agar în 24 de ore, cu un centru negru și înconjurate de un verde luminos halo. Întrucât, în 48 de ore, devin complet negre din cauza formării de hidrogen sulfurat.
-Acest mediu inhibă majoritatea speciilor din genul Shigella.
- S. Typhi și S. arizonae pot da colonii foarte similare.
-Coliformele care produc H 2 S precum Proteus și Citrobacter produc colonii similare cu cele ale Salmonella, astfel încât este necesar să se efectueze teste de identificare biochimică.
-Trebuie efectuată o striație bună pentru a obține colonii izolate; Este singura modalitate de a observa caracteristicile tipice ale coloniilor din genul Salmonella.
QA
Pentru controlul sterilității, o placă neinoculată este incubată la 37 ° C, este de așteptat să nu existe creștere sau schimbare de culoare.
Pentru controlul calității, tulpini cunoscute, cum ar fi:
Escherichia coli ATCC 25922, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Salmonella Typhi ATCC 19430, Shigella flexneri ATCC 12022, Enterococcus faecalis ATCC 29212.
Se așteaptă ca Escherichia coli și Shigella flexneri să fie parțial inhibate prin dezvoltarea coloniilor verzui și respectiv a brunului. Întrucât, ambele salmonele trebuie să aibă o dezvoltare excelentă, cu coloniile negre cu luciu metalic, iar în final Enterococcus faecalis trebuie să fie total inhibat.
Referințe
- Wilson, W. și EM McV. Blair. Utilizarea unui mediu de fier sulfit Bismut cu glucoză pentru izolarea B. typhosus și B. proteus. The Journal of Hygiene, 1927; 26 (4), 374-391. Preluat de la .jstor.org
- D'aoust JY. Efectul condițiilor de depozitare a performanței agarului de sulfit bismut. J Clin Microbiol. 1977; 5 (2): 122–124. Disponibil în: ncbi.nlm.nih.gov
- Laboratoare IVD Agar bismut-sulfit conform WILSON-BLAIR. 2009.Disponibil la: BismuthSulfitagar_span_Jan_2009% 20 (2) .pdf
- Laboratoare Himedia. Agar sulfit bismut. 2017. Disponibil la adresa: himedialabs.com
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
- Morales R, de la Cruz D, Leyva G și Ybarra M. Calitatea bacteriologică a laptelui de capră brut produs în Miravalles, Puebla. Rev Mex de Ing Quím 2012; 11 (1): 45-54