AGAR DE SOIA TRYPTICASEIN: RAȚIUNI, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Soia agar tripton sau Trypticase Soy Agar este un mediu de cultură solid și neselectiv nutrițional. Este desemnat prin literele TSA pentru acronimul său în engleză Trypticase Soy Agar. Este compus din tripteină, peptona de soia, clorură de sodiu și agar-agar.

Datorită puterii sale nutritive ridicate, este ideal pentru cultivarea de microorganisme care necesită moderat și neexigent. Mediul fără suplimente suplimentare nu este recomandat pentru culturile primare, dar este foarte util pentru subcultivarea tulpinilor pure și menținerea lor viabilă, printre alte utilizări.

Cuptor de agar de soia Trypticasein în tuburi cu capace de bakelită. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

De asemenea, acest agar servește ca bază pentru prepararea mediilor îmbogățite, cum ar fi agarul din sânge, mai ales atunci când este necesar să se respecte modelele de hemoliză și să se monteze taxonii de optochină și bacitracină, necesari în diagnosticul Streptococcus pneumoniae și respectiv Streptococcus pyogenes.

Pe de altă parte, atunci când este combinat cu antibiotice este util să se izoleze microorganismele anaerobe cu caracter clinic și strict anaerobe importante din eșantioane cu flora mixtă.

În cele din urmă, compoziția de agar de soia de tripticaseină și performanța acesteia îndeplinesc cerințele stabilite de diferitele farmacopee (europene, japoneze și nord-americane).

Bază

Pentru dezvoltarea corectă a bacteriilor este necesară prezența resurselor de energie, cum ar fi aminoacizii, vitaminele, bazele purice și pirimidice.

În acest sens, tripteina și peptona de soia furnizează aceste substanțe nutritive microorganismelor, permițând astfel dezvoltarea lor completă. Cu toate acestea, pentru bacteriile fastidioase este necesar să se suplimenteze acest agar cu sânge defibrinat sau sânge încălzit pentru a crește îmbogățirea acestuia.

Pe de altă parte, dacă se adaugă antibiotice la mediu, acesta devine un mediu selectiv. Se poate adăuga și 0,6% extract de drojdie pentru a favoriza izolarea speciilor din genul Listeria, în timp ce adăugarea de telurită de cistină și sângele de miel este ideală pentru Corynebacterium diphteriae.

În cele din urmă, clorura de sodiu asigură echilibrul osmotic la mediu, iar agarul oferă consistența solidă.

preparare

Placi de agar din soia Trypticasein

Pentru prepararea agarului de soia tripticasein, 40 g din mediul comercial deshidratat trebuie cântărite la scară digitală. Se dizolvă într-un litru de apă distilată conținută într-un balon.

Amestecul este lăsat să se odihnească 5 minute și apoi este dus la o sursă de căldură pentru a ajuta la dizolvarea mediului. Trebuie agitată frecvent și fiartă timp de 1 până la 2 minute. Ulterior, mediul este sterilizat în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

Se lasă să se răcească la 50 ° C și se distribuie în vasele sterile Petri. Se lasă să se solidifice, să se rotească, să se ordoneze în plaque și să se păstreze în frigider.

PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,3 ± 0,2.

Trebuie menționat că culoarea mediului de cultură deshidratată este bej deschis și trebuie păstrată între 10 și 35 ° C, într-un loc uscat.

La rândul său, agarul pregătit are culoarea chihlimbar deschis. Plăcile pregătite trebuie păstrate la frigider (2-8 ° C) până la utilizare.

Plăcile trebuie să atingă temperatura camerei înainte de utilizare.

Plăci de agar de soia Trypticasein completate cu sânge

Agarul de sânge este preparat prin adăugarea de 5% sânge defibrinat în momentul răcirii agarului de soia tripticasein la 50 ° C. Amestecul este omogenizat prin rotire cu mișcări blânde.

Serviți în preparate Petri sterile. Culoarea mijlocie ar trebui să fie roșu cires.

Plăci de agar de soia Trypticasein completate cu sânge încălzit

Pentru a pregăti agarul de sânge pe baza de TSA, procedați la fel ca procedurile descrise deja, dar la ieșirea din autoclav se lasă să se odihnească până când temperatura mediului este aproximativ între 56 și 70 ° C. În acel moment, sângele este plasat și amestecat până când mediul devine maro.

Serviți în preparate Petri sterile. Culoarea mediului este maro-ciocolată.

Trupuri de soia Agar Wedges

Procedura de preparare a agarului este aceeași cu cea descrisă pentru plăci, cu diferența că, în loc de a servi mediul pe vasele Petri, acesta este distribuit între 10 și 12 ml în tuburi cu capace Bakelite înainte de sterilizare.

Ulterior, tuburile sunt autoclavate la 121 ° C timp de 15 minute. Când pleacă, sunt înclinați cu ajutorul unui suport și au voie să se solidifice.

Pânzele pregătite sunt însămânțate pe suprafață și servesc pentru a menține viabilă anumite microorganisme neexigente pentru un anumit timp.

Aplicații

Trypticasein Soy Agar este utilizat în următoarele cazuri:

- Ca bază pentru pregătirea agarului clasic de sânge care este utilizat în mod obișnuit în majoritatea laboratoarelor.

-I izolarea bacteriilor solicitante.

-Observarea modelului hemolizei.

-Execuția testelor de diagnostic.

- Ca bază pentru prepararea agarului special de sânge pentru Corynebacterium diphteriae, cu telurită de cistină și sânge de miel.

- Ca bază pentru prepararea agarului de sânge de miel, plus kanamicina-vancomicina pentru creșterea anaerobilor, în special Bacteroides sp.

- Pentru întreținerea tulpinilor neexigente (Bacterioteca).

- Numărul de microbii aerobe în studiul limitei microbiene a probelor de apă, mediu, alimente și produse cosmetice.

însămânțat

Eșantioanele pot fi semănate direct pe suprafața Tripticaseinei Soy Agar completată cu sânge sau alți aditivi. Este semănat prin epuizare.

Întrucât, plăcile de agar din soia tripticaseină fără aditivi sunt utilizate în general la subcultivarea tulpinilor microbiene (bacterii sau drojdie).

QA

Controlul Sterilității

Pentru a verifica sterilitatea diferitelor medii preparate cu agar bază de soia tripticasein, se recomandă următoarele: din fiecare lot preparat, trebuie să fie incubate 1 sau 2 plăci sau tuburi neinoculate la 37 ° C timp de 24 de ore pentru a demonstra sterilitatea lor. În toate cazurile, acesta trebuie să rămână fără creștere.

Dacă se constată contaminare, întregul lot trebuie aruncat.

Controlul creșterii

Următoarele tulpini bacteriene pot fi utilizate pentru a studia funcționarea corectă a agarului de soia trypticasein: Escherichia coli ATCC 8739, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Pseudomonas aerugiosa ATCC 9027 și Enterococcus faecalis ATCC 29212.

Tulpinile sunt însămânțate și incubate aerob la 37 ° C timp de 24 de ore.

În toate cazurile, creșterea trebuie să fie satisfăcătoare.

Se pot utiliza și ciuperci cum ar fi complexul Candida albicans ATCC 10231 și Aspergillus niger ATCC 16404. Se estimează o creștere bună pentru ambele tulpini.

Controlul creșterii și modelul de hemoliză al agarului de soia tripticasein completat cu sânge

Pentru a verifica buna funcționare a agarului de sânge preparat cu această bază, se pot utiliza următoarele tulpini: Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC 6305 și Streptococcus pneumoniae ATCC 49619.

Sunt însămânțate și incubate la 37 ° C în microaerofilicitate timp de 24 de ore.

În toate cazurile, creșterea ar trebui să fie satisfăcătoare, ținând cont de faptul că beta-hemoliza (halo ușor în jurul coloniei) ar trebui să fie observată în S. pyogenes și alfa hemoliza (halo verzui în jurul coloniei) trebuie observată la ambele tulpini de S. pneumoniae. colonii).

Referințe

1. Colaboratorii Wikipedia. Trypticase sunt agar. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 17 decembrie 2018, ora 15:47 UTC. Disponibil la: https://en.wikipedia.org
2. Laboratoarele Britannia. Triptein agar de soia. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Laboratoare Neogen. Agar de soia triptic. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
5. Laboratoare BD. Trypticase Eu sunt Agar. 2014. Disponibil la adresa: .bd.com