Agarul sare manitol sau sare manitolul este un selectiv mediu solid și cultură diferențială. A fost creat de Chapman pentru izolarea cocciilor Gram-pozitivi patogeni, în special Staphylococcus aureus.
Cu toate acestea, este utilă și izolarea Staphylococus epidermidis, care poate fi uneori prezentă ca un agent patogen oportun, și Staphylococcus saprophyticus, un agent patogen recunoscut, printre alte specii.
A. Fiola cu mediu agar de manitol sărat pregătit. B. Plăci cu agit de manitol sărat însămânțate cu tulpini bacteriene de manitol fermentant și nefermentant. Sursa: A și B: Fotografii realizate de autorul MSc. Marielsa Gil.
Unele Enterococcus sunt capabile să crească pe acest mediu, precum și anumite tije de formare a sporilor Gram-pozitive.
Acest mediu este foarte util în analiza probelor clinice, dar este utilizat și în studiul microbiologic al alimentelor și în controlul calității produselor industriale, cum ar fi produsele cosmetice, medicamentele, printre altele.
Agar de Manitol sărat este compus din extracte și peptone din carne de vită, tripteină, manitol, clorură de sodiu, roșu de fenol și agar.
Bază
Agar de manitol este selectiv datorită concentrației mari de sare. Salinitatea acționează ca o substanță inhibitoare și împiedică creșterea bacteriilor Gram negative.
De asemenea, este diferențial datorită prezenței manitolului carbohidrat și a indicatorului pH-ului roșu al fenolului. Din aceasta, bacteriile capabile să fermenteze manitolul produc acizi, acidifiază mediul, întorcând coloniile și mediul galben.
Pe de altă parte, coloniile care nu fermentează manitolul cresc în mediu luând substanțele nutritive furnizate de extractele de carne și peptone și tripteină. De acolo bacteriile extrag carbonul, azotul, vitaminele și mineralele necesare creșterii lor.
Coloniile în acest caz pot fi de culoare slabă sau roz puternic, iar mediul rămâne aceeași culoare sau se schimbă în fucsia.
Agar este substanța care oferă consistența mediului.
preparare
Pentru a prepara un litru de agat de manitol sărat, 111 g de mediu deshidratat din compania comercială preferată sunt cântărite și dizolvate în 1000 ml de apă distilată, folosind un balon.
Căldura se aplică cu agitare frecventă a mediului pentru a îmbunătăți procesul de dizolvare. Se fierbe un minut.
Vasul este plasat în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.
La sfârșitul timpului, scoateți flaconul din autoclav, lăsați-l să se odihnească și serviți între 15 până la 20 ml pe vasele Petri sterile, când temperatura este de aproximativ 50 până la 55 ° C.
Se lasă să se solidifice, comandând într-un mod inversat în plaque și păstrând în frigider până la utilizare. Înainte de a semăna o probă, așteptați ca placa să atingă temperatura camerei.
Plăcile sunt însămânțate prin stripare sau prin însămânțarea suprafeței cu o spatulă drigalski. PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 7,4 ± 0,2
Culoarea mediului deshidratat este bej deschis, iar culoarea mediului preparat este roșu portocaliu.
Aplicații
Datorită selectivității sale ridicate, acest mediu este ideal pentru semănat probe cu floră mixtă în care este căutată prezența Staphylococus aureus, ca principal agent patogen al acestui gen.
În acest sens, una dintre cele mai frecvente utilizări ale sale este în analiza microbiologică a exudatelor faringiene și a probelor de descărcare nazală, în special pentru a detecta purtătorii asimptomatici de S. aureus.
Unele țări au implementat această analiză ca o cerință obligatorie pentru persoanele care doresc să lucreze ca vânzători de produse alimentare.
Acest control împiedică contractarea persoanelor care sunt purtătoare de S. aureus, evitând astfel intoxicațiile alimentare masive, datorate consumului de alimente contaminate cu enterotoxina stafilococică.
Poate fi inclusă și în semănarea infecțiilor cu răni, culturi de sânge, LCR, lavaj bronhoalveolar, printre altele.
Agar de manitol sărat este util pentru reizolarea coloniilor din culturile de urină din agar CLED sau agar de sânge ale cărui Gram au evidențiat cocuri Gram pozitive în grupuri.
Este valabil și în analiza microbiologică a alimentelor, apei potabile, solurilor, printre alte aplicații.
QA
După ce a fost pregătit un lot de farfurii cu agar de manitol sărat, se recomandă efectuarea unui control al calității. Tulpinile de control sunt semănate pentru a arăta dacă există creștere sau nu.
Tulpini cunoscute de Staphylococcus aureus pot fi utilizate ca un control pozitiv. Ar trebui să crească satisfăcător dezvoltând colonii galbene, iar mediul transformă, de asemenea, aceeași culoare.
De asemenea, este convenabil să se includă o tulpină cunoscută de Staphylococcus epidermidis. Ar trebui să crească satisfăcător dezvoltând colonii de roz, iar mediul să rămână aceeași culoare sau să se întunece la un roz mai puternic.
Ca un control negativ, se folosesc tulpini care nu ar trebui să crească pe acest mediu. De exemplu, o tulpină cunoscută de Escherichia coli sau Klebsiella pneumoniae poate fi cultivată. Rezultatul scontat este o inhibare completă, adică fără creștere.
În plus, o placă neinoculată trebuie să fie incubată. În ea nu trebuie să existe creștere sau schimbare de culoare.
Este important ca placa să nu fie utilizată dacă există semne de deteriorare, cum ar fi contaminarea, deshidratarea, decolorarea, printre altele.
Gânduri finale
Când utilizați un mediu agar de manitol sărat, există câteva aspecte importante care trebuie luate în considerare:
- Obținerea unei creșteri a coloniilor galbene nu indică faptul că este vorba de Staphylococcus aureus. Trebuie amintit faptul că unele tulpini de Enterococcus sunt capabile să crească în acest mediu și să fermenteze manitolul, precum și anumite tije Gram-pozitive care formează sporii.
Prin urmare, este important să se efectueze un gram pe colonie și un test pentru catalază.
Pe de altă parte, trebuie considerat că și alte specii de stafilococ, altele decât aureul, sunt capabile să fermenteze manitolul. Prin urmare, este important să subculturați colonia într-un bulion de nutrienți pentru a lua de acolo și a efectua testul coagulazei.
Printre speciile Staphylococcus de importanță clinică pentru om care fermentează manitolul se numără: S. aureus, S. simulans, S. capitis ssp capitis, S. capitis ssp urealyticus, S. xylosus, S. cohnii ssp urealyticum, printre altele.
Alții pot da o reacție variabilă, adică uneori pozitivă și alteori negativă. Unii sunt S. saprophyticus, S. haemolyticus, S. Warneri, S. intermedius, printre alții.
-Nu este recomandat să se ia colonii direct din agar de manitol pentru a efectua testul coagulazei, deoarece concentrația mare de sare în mediu poate interfera cu rezultatul.
-În final, se recomandă incubarea plăcilor însămânțate cu manitol sărat timp de până la 48 de ore, deoarece unele tulpini de S. aureus pot fermenta lent manitolul, deși acest lucru nu este foarte frecvent.
Referințe
- Laboratoarele Britannia. Agar de manitol sărat. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
- „Agar de manitol sărat”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 31 octombrie 2018, ora 19:08 UTC. 17 ianuarie 2019, 20:55, disponibil la adresa: es.wikipedia.org.
- Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
- Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
- Laboratoare BD. BD Agit de sare Manitol. 2013. Disponibil la adresa: bd.com.