AGAR DEXTROZĂ DE CARTOF: RAȚIONAMENT, PREPARARE ȘI UTILIZARE - BIOLOGIE - 2025

Cartof agar dextroză este un mediu solid non - cultură nutritiv selectiv. Speciile bacteriene și fungice pot crește în el, dar utilizarea sa este indicată în special pentru izolarea ciupercilor filamentare și a drojdiilor. Este, de asemenea, cunoscut ca mediu PDA pentru expresia engleză Potato Dextrose Agar.

Este util în special pentru izolarea ciupercilor fitopatogene, adică a celor care afectează plantele. Pentru semănarea eșantioanelor din legume infectate, se pot utiliza alte mijloace, cum ar fi Sabouraud agar sau malta-agar, cu toate acestea, pentru utilizarea de rutină, agarul dextroză de cartof este preferat, deoarece se obține o sporulare mai mare.

Aspergillus niger și, respectiv, Sinemas pe agar dextroză cartofi. Sursa: Alextrevelian 006 la English Wikipedia / Joselrojas

De asemenea, este utilizat pentru numărarea coloniilor fungice în probe de produse cosmetice, produse farmaceutice și unele alimente lactate. De asemenea, este potrivit pentru semănat probe de resturi de piele în căutarea dermatofitelor, care cresc foarte bine în acest mediu, dezvoltându-și pigmenții caracteristici.

Mediul dextroză de cartofi este un mediu foarte simplu și ușor de preparat în laborator. Conține, după cum îi spune și numele, infuzie de cartof, dextroză și agar-agar. În plus, pot fi adăugate substanțe inhibitoare pentru a preveni creșterea bacteriilor și pentru a crește selectivitatea pentru speciile fungice.

Bază

Agar dextroză de cartof este un mediu de cultură care oferă elementele nutritive necesare dezvoltării ciupercilor filamentare și a drojdiilor.

Combinația infuziei de cartof cu glucoză asigură sursa de energie perfectă pentru o creștere satisfăcătoare a ciupercilor. În timp ce agarul este cel care oferă consistența mediului.

Mediul singur nu inhibă creșterea bacteriilor, prin urmare este un mediu neselectiv. Pentru a-l face selectiv, are nevoie de adăugarea de substanțe inhibitoare, cum ar fi acidul tartric sau antibiotice.

preparare

-Preparat de casă (necomercial) de agar dextroză de cartofi

Vasele Petri

Este pregătit după cum urmează:

În primul rând, cartofii se spală foarte bine, îndepărtând solul pe care îl dețin. Se taie în felii subțiri cu tot și coajă. Se cântăresc 200 de grame de cartofi și se fierb într-un litru de apă distilată timp de o jumătate de oră.

La sfârșitul timpului, filtrați sau strecurați tot preparatul printr-o cheesecloth.

Lichidul obținut este completat cu apă distilată până la un litru. La perfuzie se adaugă 20 g de agar-agar și 20 g de dextroză, se amestecă bine și se autoclavează la 121 ° C, la 15 kilograme de presiune timp de 15 minute.

Se lasă să se răcească la 50 ° C și se servește în vasele sterile Petri. Plăcile pregătite sunt păstrate la frigider.

wedges

Pot fi preparate și pană de agar dextroză cu cartofi.

În acest caz, înainte de sterilizarea în autoclavă, 12-15 ml de mediu sunt așezați în tuburi, mai târziu sunt autoclavate și la lăsare se așază pe suporturi speciale până se solidifică. Păstrați la frigider.

Mediul rămâne la un pH de 5,6 ± 0,2, cu toate acestea, unele laboratoare adaugă 10% acid tartric pentru a reduce pH-ul până la 3,1 ± 0,1 pentru a inhiba creșterea bacteriană.

În același sens, alte laboratoare preferă să adauge antibiotice pentru a-l face selectiv pentru cultivarea ciupercilor și pentru a preveni creșterea bacteriilor.

-Prepararea comercială a agarului dextroză de cartofi

Se cântăresc 39 g de mediu deshidratat disponibil comercial și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Lasă-l să se odihnească 5 minute.

Amestecul se încălzește cu agitare frecventă până la dizolvarea completă. Ulterior, este sterilizat într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

Plăcile sau panele pot fi pregătite. Procedați așa cum este descris mai sus.

PH-ul rămâne la 5,6 ± 0,2. Dacă se dorește un pH de 3,1, înainte de servirea pe farfurii, trebuie adăugate 14 ml acid tartric 20% steril.

Mediul brut este bej, iar mediul preparat este chihlimbar deschis, cu aspect ușor tulbure sau opalescent.

Aplicații

Proces pentru semănarea probelor de plante pe agar dextroză de cartof

-Pentru frunze pătate

Frunzele sunt tăiate în bucăți.

Într-un pahar de 50 cmc cu 50% alcool, așezați bucățile frunzelor (piese pătate și sănătoase), pentru a dezinfecta suprafața timp de 20 până la 30 de secunde. Aruncați alcoolul și adăugați hipoclorit de sodiu 20% timp de 40 până la 50 de secunde dacă sunt frunze subțiri și creșteți timpul până la 80 de secunde dacă este scoarță și bușteni.

Aruncați hipocloritul de sodiu și luați bucățile dezinfectate cu un forceps steril și așezați-le pe suprafața mediului (maxim 10 bucăți). Setați data și incubați la 20-30 ° C.

-Pentru fructe și tuberculi

Dacă fructele sunt cărnoase, deschideți fructele afectate de ciupercă și luați bucăți cu un bisturiu steril, atât din părțile bolnave cât și cele sănătoase și așezați-le pe suprafața agarului.

Dacă fructele sunt citrice, cum ar fi o lămâie sau o portocală, trebuie să fie deschise și semințele sale să fie semănate.

Când suprafața fructului este afectată și se observă sporii, ideal este să folosiți metoda de grătare pe farfurie; Aceasta constă în atingerea sporilor cu o spatulă în formă de „L” sterilizată și răcită, apoi realizarea unei semințe în zig-zag de 2 până la 3 ori pe agar.

-Pentru cereale

Sunt dezinfectate așa cum este descris în frunze și apoi plasate pe agar.

-Pentru ramuri și tulpini

Coaja este răzuită și mai târziu bucăți din partea sănătoasă și bolnavă sunt luate și semănate direct pe agar.

Plăcile însămânțate sunt incubate aerob la 20-30 ° C timp de 72 de ore.

Procedeu pentru semănarea probelor de piele, păr sau unghii pe agar dextroză de cartof

Eșantionarea trebuie făcută folosind o lamă de bisturiu nr. 11, fie pentru a tăia părul afectat, solzi de piele, fie unghiile în căutarea dermatofitelor. Înainte de a lua proba, zona trebuie dezinfectată cu 70% alcool.

-Santion de piele

În leziunile scaltoase, marginea leziunii ar trebui să fie răzuită, deoarece ciuperca este mai probabil să se găsească acolo.

În leziunile exudative, proba este prelevată cu un tampon uscat sau umed. Semănați imediat agar dextroză cartofi sau Sabouraud agar. Evitați mijloacele de transport.

O altă metodă de eșantionare este prin tehnica pătratului covorului Mariat și Adan Campos. În acest caz, zona afectată este frecată de 5 ori cu o bucată de lână sterilă pentru cultivarea ulterioară.

Proba poate fi plasată direct în mediul de cultură.

-Santion de păr

În funcție de patologie, partea afectată poate fi tăiată sau dezrădăcinată. Introduceți eșantionul în mediul de cultură.

-Proba probei

O parte specifică a unghiei afectate poate fi răzuită sau tăiată. Acesta va depinde de tipul de prejudiciu.

Tăiați eșantionul în bucăți de 1 mm înainte de semănat pentru a crește probabilitatea de contact a ciupercii cu mediul de cultură.

Procedura de identificare

Coloniile obținute pe placă sunt izolate în tuburi care conțin agar dextroză de cartofi pentru a efectua apoi studiul macroscopic al coloniilor (aspect, culoare, consistență, grad de dezvoltare.

Studiul microscopic (observarea structurilor și a formațiunilor acestora) se poate face prin microculturi sau observare directă la microscop între diapozitiv și diapozitiv.

Numărul de colonii

Acest mediu poate fi utilizat și pentru determinarea încărcăturii fungice și a drojdiei prezente în probe vegetale, alimentare, cosmetice sau medicamente. În acest scop, se folosește agar dextroză de cartof suplimentată cu antibiotice, cum ar fi: (cloramfenicol, clorotetraciclină sau ambele).

Se toarnă 1 ml de probă - de preferință diluat - într-un vas Petri steril și gol, apoi se topește un strat de agar dextroză de cartofi și se lasă să se răcească la 45 ° C. Turnați pe vasul Petri și rotiți până la omogenizare. Lasă-l să se odihnească până se solidifică.

Se incubează aerob la 20-25 ° C (mucegaiuri) sau 30-32 ° C (drojdii) timp de 5 până la 7 zile sau mai mult, în funcție de tipul de ciupercă căutată și de tipul de probă. Două plăci pot fi utilizate pentru a incuba în ambele intervale de temperatură.

Numărarea coloniilor fungice într-o probă de alimente. Agar de dextroză de cartof completat cu antibiotice. Sursa: fotografie Pxhere.com / 777267

Întreținerea tulpinilor fungice

Agat Dextrose Potato poate fi utilizat pentru a menține tulpini fungice viabile timp de câțiva ani.

Pentru aceasta, ciuperca este cultivată pe pene de agro dextroză agat și, odată ce ciuperca a crescut, este acoperită cu ulei mineral. Uleiul trebuie să fie sterilizat într-o autoclavă timp de 45 de minute și să aibă o vâscozitate de aproximativ 300 până la 330 Saybolt. Uleiul trebuie să fie cu 1 până la 2 cm deasupra vârfului tevii.

QA

Din fiecare lot pregătit, luați 1 sau 2 farfurii și incubați-le la 25 ° C timp de 48 ore sau la 20 ° C timp de 96 ore. Un bun control al sterilității este unul în care nu se observă dezvoltarea coloniei.

Tulpini de control cunoscute sau certificate pot fi de asemenea utilizate, cum ar fi:

Saccharomyces cerevisiae ATCC 9763, Candida albicans ATCC 10231, Aspergillus brasiliensis ATCC 16404, Trichophyton mentagrophytes ATCC 9533. Se estimează o creștere bună în toate cazurile.

Referințe

1. Laboratoarele Britannia. Cartofi de agar cu glucoză. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
2. Laboratoare Neogen. Agar Dextroză de cartofi. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
3. Laboratorul Insumolab. Agar dextroză cartofi. Disponibil la adresa: insumolab.cl
4. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Casas-Rincón G. Micologie generală. 1994. Ediția a 2-a Universitatea Centrală din Venezuela, Ediții bibliotecare. Venezuela Caracas.
6. Aceituno M. Evaluarea calității microbiologice în fardul de ochi, tipul de pulbere compactă a unui laborator național de producție, conform metodei de referință Pharmacopea Usp 2005. Teza de calificare pentru titlul de Chimic farmaceutic. Universitatea din San Carlos din Guatemala.
7. Cuétara M. Prelucrarea probelor de suprafață. Revista Iberoamericană de Micologie. 2007; pp. 1-12