AGAR MACCONKEY: RAȚIONAMENT, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Agarul MacConkey este un mediu solid care permite izolarea exclusivă a bacteriilor Gram negative. Din acest motiv, este un mediu selectiv și permite, de asemenea, distincția între bacilul care fermentează lactoza și bacilii care nu fermentează, ceea ce îl face un mediu diferențial. Este unul dintre cele mai utilizate medii de cultură într-un laborator de microbiologie.

Acest mediu este utilizat mai ales pentru izolarea bacililor Gram negativi aparținând familiei Enterobacteriaceae, inclusiv specii oportuniste și enteropatogene.

Agar MacConkey însămânțat cu două tipuri de bacterii. Coloniile care fermentează lactoza pe partea stângă, coloniile care fermentează non-lactoza pe partea dreaptă.

Poate fi folosit și pentru izolarea altor bacili enterici care trăiesc în tractul gastrointestinal, dar nu aparțin Enterobacteriaceae, cum ar fi Aeromonas sp, Plesiomonas sp, printre altele.

În cele din urmă, poate izola alți bacili Gram-negativi care nu fermentează cu glucoză, care se găsesc în mediu, apă sau soluri, dar care pot fi uneori agenți patogeni oportunisti, precum Pseudomonas sp, Acinetobacter sp, Alcaligenes sp, Chromobacterium violaceum, Stenotrophomonas maltophilia, printre altele.

Bază

Agar MacConkey

Fundația acestui mediu poate fi explicată prin descrierea componentelor sale, deoarece fiecare are un scop care determină o proprietate a acestuia.

Săruri biliare și violet cristal

În acest sens, agarul MacConkey are o compoziție complexă. În primul rând conține săruri biliare și cristal violet.

Aceste elemente sunt responsabile de inhibarea creșterii bacteriilor Gram pozitive și a unor bacili Gram negativi fastidiosi. La rândul său, favorizează dezvoltarea bacililor Gram negativi care nu sunt afectați de aceste substanțe. Prin urmare, este un mediu selectiv.

Se spune că este ușor selectivă în comparație cu alte medii care inhibă, de asemenea, creșterea bacteriilor Gram pozitive și, de asemenea, a majorității bacteriilor Gram negative.

Peptone, polipectone și lactoză

Conține substanțe care furnizează substanțele nutritive necesare microorganismelor care se dezvoltă în acest mediu, cum ar fi peptonele, polipectonele și lactoza.

Lactoza este punctul cheie pentru ca mediul să fie un mediu diferențial, deoarece microorganismele care au capacitatea de a fermenta lactoza vor dezvolta colonii roz puternice.

Unele bacterii pot fermenta lactoza lent sau slab, dezvoltând colonii roz pal și rămân lactoză pozitivă.

Cei care nu fermentează lactoza folosesc peptone ca sursă de energie, producând amoniac, alcalinizând mediul. Din acest motiv, coloniile originare sunt incolore sau transparente.

Indicator PH

Schimbarea de culoare se realizează printr-un alt compus esențial pe care îl are agarul MacConkey. Acest compus este indicatorul de pH, care în acest caz este roșu neutru.

Fermentarea lactozei generează producția de acizi mixți. Aceștia acidifică mediul până la un pH sub 6,8.

Acest lucru face ca indicatorul de pH să se îndrepte către o nuanță roz profund. Intensitatea culorii poate varia în funcție de pH-ul final.

Apa distilată, clorură de sodiu și agar

Pe de altă parte, conține apă distilată și clorură de sodiu care conferă hidratare medie și echilibru osmotic. În cele din urmă, mediul conține agar, care este baza care oferă consistența unui mediu solid.

Mediul de agar MacConkey preparat trebuie să aibă un pH final ajustat la 7,1 ± 0,2.

preparare

Pentru un litru de agar MacConkey, trebuie cântărit 50 g de mediu deshidratat, apoi introdus într-un balon și dizolvat într-un litru de apă distilată. După 10 minute de repaus se încălzește, amestecând constant până la fierbere timp de 1 minut.

Vasul este apoi introdus în autoclav și sterilizat la 121 ° C timp de 20 de minute. La sfârșitul timpului, este îndepărtat din autoclav și lăsat să se răcească până la temperatura de 45 ° C, pentru a servi mai târziu în vase Petri sterile în interiorul unei hote cu flux laminar sau în fața arzătorului Bunsen.

Se lasă să se solidifice și să se păstreze într-un suport pentru plăci inversate și să se răcească la frigider la 2-8 ° C până la utilizare.

Pentru a obține un agar MacConkey care inhibă efectul de umflare produs de genul Proteus, se folosește un agar MacConkey cu sare scăzută.

Utilizări de agar MacConkey convențional

MacConkey Agar este inclus în toate seturile de medii de cultură aranjate pentru semănatul probelor clinice primite în laborator. Este util și în microbiologia alimentară și în microbiologia mediului.

Diversitatea tijelor Gram negative care cresc în acest mediu exprimă caracteristici fenotipice care ajută la realizarea unui diagnostic prezumtiv al speciei în cauză. De exemplu, dimensiunea, culoarea, consistența și mirosul coloniilor, sunt câteva dintre caracteristicile care pot ghida.

În acest mediu, speciile Escherichia coli, Klebsiella sp și Enterobacter sp produc colonii roz puternice, înconjurate de o zonă de bilă precipitată.

În timp ce, bacterii precum Citrobacter sp, Providencia sp, Serratia sp și Hafnia sp pot apărea incolore după 24 de ore sau roz pal în 24 -48 ore.

De asemenea, genurile Proteus, Edwadsiella, Salmonella și Shigella produc colonii incolore sau transparente.

Alte variante de MacConkey agar

Există și alte variante de MacConkey Agar care au scopuri specifice. Sunt menționate mai jos:

Agar MacConkey cu sorbitol

Acest mediu a fost conceput pentru a distinge tulpina enteropatogenă (enterohemoragică Escherichia coli O157: H7) de restul tulpinilor de Escherichia coli.

Acest mediu schimbă lactoza glucidică cu sorbitolul. Tulpinile enterohemoragice de E. coli O157: H7 diferă de restul, deoarece nu fermentează sorbitolul și, prin urmare, se obțin colonii transparente, în timp ce restul tulpinilor de E. coli fermentează sorbitolul și coloniile sunt de culoare roz puternică.

Agar MacConkey fără cristal violet și nici sare

Acest agar diferă foarte mult de agarul clasic MacConkey, deoarece nu are un cristal violet și bacteriile Gram pozitive pot crește.

Pe de altă parte, absența sării inhibă apariția aglomerării pe agar produsă de unii bacili enterici, cum ar fi cei din genul Proteus și facilitează astfel izolarea tuturor bacteriilor prezente, inclusiv a bacteriilor Gram pozitive.

Agar MacConkey cu cefoperazone

Această variantă Agar MacConkey a fost concepută pentru a izola inițial Laribacter hongkongensis și ulterior s-a dovedit a fi utilă pentru izolarea Arcobacter butzleri. Ambele sunt tije Gram negative ușor curbate, rezistente la cefoperazone.

Aceste bacterii au fost legate recent de cauza gastroenterite și au dobândit diaree la persoanele asiatice și europene, apărând ca doi puternici agenți patogeni emergenți.

Antibioticul permite inhibarea florei însoțitoare a tractului gastro-intestinal, ceea ce favorizează dezvoltarea acestor bacterii, împiedicând trecerea lor neobservată, deoarece necesită 72 de ore pentru a crește.

Agar MacConkey preparat cu apă de mare la 10% v / v

Această variantă este utilă pentru evaluarea indicatorilor sanitari bacterieni ai contaminării fecale, incluzând coliformele totale și coliformele fecale în apele sărate recreative (plaje și golfuri).

Cortez și colab., În 2013, au demonstrat că mediul preparat în acest fel crește semnificativ recuperarea acestor microorganisme în mediul salin, comparativ cu utilizarea agarului MacConkey preparat cu apă distilată.

Acest lucru se datorează faptului că mediul modificat stimulează creșterea bacteriilor care sunt fiziologic într-o stare de latență „viabilă, dar non-culturabile”, prin urmare, acestea nu pot fi recuperate în medii convenționale.

Referințe

1. Lau SK, Woo PC, Hui WT și colab. Utilizarea agarului cefoperazone MacConkey pentru izolarea selectivă a Laribacter hongkongensis. J Clin Microbiol. 2003; 41 (10): 4839-41.
2. Agar MacConkey. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 4 Apr 2018, 18:16 UTC. 29 Dec 2018, 15:22 en.wikipedia.org
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
5. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efectul mediilor de cultură preparate cu apa de mare asupra indicatorilor de sănătate în apele marine ale spa-urilor din Chichiriviche, statul Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinică practică. Universitatea din Cadiz, ediția a II-a. Serviciul de publicații UCA