AGAR MRS: FUNDAȚIE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Agar MRS este o cultură selectiv mediu solid utilizat pentru izolarea și enumerarea bacteriilor producătoare de acid lactic, în special din genul Lactobacillus. Acest agar a fost creat în 1960 de Man, Rogosa și Sharpe, purtând același nume, dar datorită complexității sale, adesea se utilizează abrevierea MRS.

Este compus din proteină peptonă, extract de carne, extract de drojdie, glucoză, sorbitan monoleat, fosfat dipotazic, acetat de sodiu, citrat de amoniu, sulfat de magneziu, sulfat de mangan și agar.

Omul Rogosa și Sharpe Agar (MRS) însămânțate cu Lactobacillus sp. Sursa: Fotografie donată pentru acest articol de către autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografie realizată în timpul anchetei intitulată: Evaluarea bacteriilor cu acid lactic și a bifidobacteriilor cu potențial probiotic în laptele matern și scaunele pentru sugari. .

Această compoziție permite dezvoltarea corespunzătoare a bacteriilor cu acid lactic din probe clinice, cum ar fi fecale, secreții vaginale, probe orale și lapte matern, precum și alimente lactate și din carne.

Nu este utilizat în mod obișnuit în laboratoarele clinice, deoarece bacteriile cu acid lactic sunt rareori implicate în procesele bolii. Cu toate acestea, în domeniul microbiologiei alimentare, utilizarea agarului MRS este mai frecventă.

Pe de altă parte, acest mediu este folosit de unele centre de cercetare al căror obiectiv este studiul bacteriilor cu acid lactic.

Bază

Omul, Rogosa și Sharpe agar au o compoziție destul de complexă. Prin descompunerea funcției fiecăreia dintre componentele sale, se poate explica fundamentul acesteia.

Proteina peptonă, extractul de carne, extractul de drojdie și glucoza sunt nutrienți care asigură sursa de carbon, azot, vitamine și minerale necesare creșterii bacteriene. Mai mult, glucoza este sursa de energie universală utilizată în majoritatea mediilor de cultură.

Pe de altă parte, pentru a favoriza creșterea bacteriilor cu acid lactic, este necesară prezența cofactorilor (cationilor) esențiali în metabolismul Lactobacillus și al bacteriilor aferente; Acești compuși sunt sărurile de sodiu, magneziu și mangan.

De asemenea, monolatul de sorbitan sau polisorbatul 80 sunt o sursă importantă de acizi grași, deoarece sunt absorbiți ca nutrienți.

Mai mult, monolatul de sorbitan și citratul de amoniu acționează prin inhibarea dezvoltării florei însoțitoare, în special a bacteriilor Gram negative, oferind caracterul selectiv al acestui agar.

În cele din urmă, agar-agar este cel care oferă consistența solidă mediului.

Există și alte variante de agar Man Rogosa Sharpe; unul dintre ele este suplimentat cu cisteină (MRSc), foarte util pentru izolarea bifidobacteriilor, printre alte microorganisme. Pe de altă parte, există mediul MRS suplimentat cu neomicină, paromomicină, acid nalidixic și clorură de litiu, special pentru numărarea selectivă a bifidobacteriilor în produsele lactate.

preparare

Se cântăresc 68,25 grame de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Se lasă să stea 5 minute. Pentru a se dizolva complet, apelați la o sursă de căldură, amestecând frecvent și fierbeți timp de 1 până la 2 minute. Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

Când părăsiți autoclavul, lăsați să stea câteva minute și distribuiți-l cât este încă fierbinte în vasele Petri sterile.

Se lasă solidificarea și inversarea plăcilor, se comandă în rafturi și se refrigerează până la utilizare. Lăsați plăcile să se încălzească la temperatura camerei înainte de utilizare.

PH-ul mediului trebuie să fie de 6,4 ± 0,2. Unele case comerciale recomandă un pH cuprins între 5,5 și 5,9.

Mediul deshidratat are culoare bej și preparat este chihlimbar închis.

Atât mediul deshidratat cât și plăcile preparate trebuie păstrate la 2-8 ° C.

Aplicații

Plăcile de agar MRS pot fi însămânțate la suprafață (epuizare sau spatula Drigalski). Poate fi semănat și prin adâncime. Plăcile trebuie incubate la 37 ° C în microaerophilicity (4% O ₂ și 5-10% CO ₂ ) timp de 24 până la 72 ore.

Metoda de semănat este aleasă în funcție de scopul urmărit (izolarea sau numărarea).

Caracteristicile coloniilor

Coloniile prezumtive de Lactobacillus cresc de culoare albicioasă și au un aspect mucoid sau cremos pe acest agar. Ulterior trebuie identificate.

Izolarea bacteriilor cu acid lactic

Pentru aceasta se folosește însămânțarea de suprafață. Probele care trebuie semănate necesită o procedură anterioară.

În cazul probelor de lapte matern, se recomandă centrifugarea a 1 ml de probă la 14.000 rpm timp de 10 minute, pentru a elimina stratul gras. 900 ul este aruncat, iar în restul de 100 ul sedimentul este suspendat și turnat pe suprafața agarului MRS, apoi trebuie distribuit uniform cu o spatulă Drigalski.

În cazul probelor de scaun, un (1) gram de scaun este cântărit și omogenizat în 9 ml de apă peptonă 0,1% sterilă, corespunzând unei diluții de 1/10. Apoi se fac diluții seriale, până când ^{se obține} o diluare finală de 10 ^-4 .

În cele din urmă, 100 ul din diluțiile 10 ^-2 , 10 ^-3 și 10 ^-4 sunt luate și fiecare diluție este însămânțată pe agar MRS, distribuindu-se uniform cu o spatulă Drigalski.

Bacteriile cu acid lactic contează

În acest caz însămânțarea se face prin adâncime.

Pentru probele de lapte matern, se iau 1 ml și se introduc într-un tub de plastic conic steril. Se adaugă agar MRS la o temperatură aproximativă de 40 ° C la un volum final de 25 ml, obținându-se un amestec omogen. Ulterior, se toarnă în vasele Petri sterile într-un mod uniform și se lasă să stea până la polimerizare.

Pentru probele de scaun se fac diluții, așa cum s-a descris anterior. Luați 1 ml din fiecare diluție și puneți-o în tuburi de plastic conice sterile. Agar MRS topit este adăugat la un volum de 25 ml.

Amestecul fiecărei diluări este turnat uniform în vasele sterile Petri. În cele din urmă, se lasă în repaus până la polimerizare.

Numărul de colonii pe Agar Man Rogosa și Sharpe (MRS). Sursa: Fotografie donată pentru acest articol. Autori: Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Fotografie realizată în timpul cercetării intitulată: Evaluarea bacteriilor cu acid lactic și a bifidobacteriilor cu potențial probiotic în laptele matern și materiile fecale pentru sugari.

Nivel de cercetare

În fiecare zi, studiul bacteriilor cu acid lactic câștigă mai mult interes; Cercetătorii încearcă în special să afle despre tulpinile noi și potențialul lor ca fermeni de pornire pentru standardizarea fabricării produselor lactate, printre alte utilizări.

În acest sens, Alvarado și colab. (2007) au utilizat agar MRS pentru a efectua un studiu în care au izolat, identificat și caracterizat bacteriile de acid lactic, prezente într-o brânză arteziană africană din Venezuela.

În brânză au descoperit prezența bacteriilor din genurile Lactococcus și Lactobacillus și au ajuns la concluzia că amestecurile de tulpini izolate sunt potrivite ca tulpini de început în fabricarea brânzeturilor din lapte pasteurizat.

Pe de altă parte, Sánchez et al. (2017) a folosit agar MRS pentru a investiga prezența bacteriilor cu acid lactic în tractul digestiv al purceilor, pentru a le folosi ca probiotice native care cresc productivitatea purceilor sănătoși.

Cu acest mediu au reușit să izoleze patru specii: Lactobacillus johnsonii, Lactobacillus brevis, Enterococcus hirae și Pediococcus pentosaceus.

La fel, Báez și colab. (2019) a utilizat agar MRS pentru a evalua bacteriile cu acid lactic (LAB) și bifidobacteriile cu potențial probiotic în laptele matern și materiile fecale pentru sugari.

Au reușit să izoleze 11 BAL și 3 Bifidobacteria sp în laptele matern și 8 BAL și 2 Bifidobacteria sp. în materii fecale. Toți au îndeplinit anumiți parametri care le dovedesc ca fiind bacterii cu activitate probiotică.

Autorii au concluzionat că atât laptele matern, cât și fecalele de la sugari exclusiv alăptați servesc ca surse naturale de bacterii probiotice.

QA

Pentru a evalua calitatea agarului MRS, controlați tulpini precum:

Lactobacillus fermentum ATCC 9338, Lactobacillus casei ATCC 393, Bifidobacterium bifidum ATCC 11863, Lactobacillus plantarum MKTA 8014, Lactobacillus lactis MKTA 19435, Pediococcus damnosus MKTA 29358, Escherichus coli și Bacherus coli.

Rezultatele așteptate sunt o creștere satisfăcătoare pentru primele 6 bacterii, în timp ce E. coli și Bacillus cereus trebuie complet inhibate.

Referințe

1. Alvarado C, Chacón Z, Otoniel J, Guerrero B, López G. Izolarea, identificarea și caracterizarea bacteriilor cu acid lactic a unei brânzeturi artizanale andine afumate din Venezuela. Utilizarea sa ca cultură inițială. Ciente. (Maracaibo) 2007; 17 (3): 301-308. Disponibil pe: scielo.org.
2. Sánchez H, Fabián F, Ochoa G, Alfaro Izolarea bacteriilor cu acid lactic din tractul digestiv al purcelului. Rev. investiga. veterinar. Peru 2017; 28 (3): 730-736. Disponibil pe: scielo.org.
3. Báez E, González G, Hernández G, López E, Mega M. Evaluarea bacteriilor cu acid lactic și a Bifidobacteriilor cu potențial probiotic în laptele matern și materii fecale la sugari în municipiul Acevedo, Miranda 2017. Lucrări de licență pentru a se califica pentru diploma de licență în Bioanaliza. Universitatea Carabobo, Venezuela.
4. Laboratorul Britannia. DOAMNA agar. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
5. Colaboratorii Wikipedia. DOAMNA agar. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 10 ianuarie 2018, ora 19:44 UTC. Disponibil la: wikipedia.org Accesat la 17 februarie 2019.
6. Roy D. Media pentru izolarea și enumerarea bifidobacteriilor din produsele lactate. Int J Food Microbiol, 200128; 69 (3): 167-82.