Mediul solid agar Hektoen sau Hektoen enteric agar este o cultură selectivă și diferențială. A fost creat la Institutul Hektoen de către King și Metzger pentru izolarea bacteriilor enteropatogene din genurile Shigella și Salmonella.
Mediul este compus din proteină peptonă, extract de drojdie, săruri biliare, lactoză, zaharoză, salicină, tiosulfat de sodiu, clorură de sodiu, citrat de fier, citrat de amoniu, albastru de bromotimol, acid fuchsin și agar. Această formulare face posibilă diferențierea genurilor Shigella și Salmonella de restul bacteriilor capabile să crească în acest mediu.
A. Virgin Hektoen agar B. Semened Hektoen agar. Sursa: Flickr.com/ Încărcătorul original a fost Philippinjl la Wikipedia franceză.
Deși există alte medii cu aceeași funcție ca Hektoen agar, acesta are un avantaj mai mare în comparație cu alte medii, mai ales atunci când doriți să recuperați speciile Shigella.
Speciile ambelor sexe cauzează probleme gastrointestinale severe la om datorită consumului de alimente contaminate; prin urmare, transmiterea este fecală - orală. De aceea, utilizarea Hektoen agar este indicată în principal în analiza microbiologică a probelor de scaun și alimente.
Bază
Hektoen Agar conține peptone și extract de drojdie ca sursă de nutrienți, oferind elementele esențiale pentru dezvoltarea microbiană.
Cu toate acestea, are și săruri biliare care acționează prin inhibarea creșterii unor bacterii, în special a celor Gram pozitive și a unor Gram negative. Din acest motiv este considerat un mediu selectiv.
Pe de altă parte, Hektoen agar este un mediu diferențial. Această proprietate este conferită de prezența carbohidraților fermentabili, cum ar fi lactoza, zaharoza și salicina, împreună cu sistemul de indicatori de pH, reprezentat de albastru de bromotimol și fucsină acidă.
Toate bacteriile capabile să crească pe acest mediu care nu aparțin genului Salmonella și Shigella vor dezvolta colonii de somon sau portocale, cu excepția genului Proteus. Acest lucru se datorează fermentației unuia sau mai multor carbohidrați prezenți, care acidifică mediul, ceea ce face ca indicatorul de pH să se transforme.
La rândul său, genurile Shigella și Salmonella nu sunt capabile să fermenteze niciunul dintre carbohidrații prezenți, folosind doar peptone ca sursă de energie, care alcalinizează mediul și, prin urmare, coloniile lor sunt de culoare albastru-verde.
În acest mediu se pot distinge și bacterii capabile să formeze hidrogen sulfurat (gaz incolor). Tiosulfatul de sodiu acționează ca sursa de sulf, în timp ce citratul de fier este dezvoltatorul. Ambii compuși fac posibilă formarea unui precipitat negru de sulfură de fier care arată reacția.
Precipitatul negru din centrul coloniei, cu un halou transparent în jurul ei, dă un aspect de ochi de pește. Această caracteristică sugerează prezența genului Salmonella.
În cele din urmă, clorura de sodiu menține echilibrul osmotic, iar agarul oferă consistența solidă a mediului.
preparare
Se cântăresc 76 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Agitați amestecul puternic și apoi lăsați-l să se odihnească timp de 10 până la 15 minute. Poate fi încălzit și fiert, dând mișcări rotative până la dizolvarea sa totală. Acest mediu nu este autoclavat.
Când mediul atinge o temperatură de aproximativ 45 ° C, un turn de 20 ml este turnat direct în vasele sterile Petri.
Agarul este lăsat să se solidifice. În acel moment sunt gata de utilizare. Se recomandă utilizarea lor imediat. Dacă acest lucru nu este posibil, acestea sunt păstrate la frigider până la utilizare.
Plăcile trebuie scoase din frigider în avans înainte de însămânțare pentru a le aduce la temperatura camerei.
PH-ul mediului trebuie să fie de 7,5 ± 0,2. Culoarea mediului deshidratat este violet, iar mediul pregătit este de culoare maro-verde.
Utilizare
Folosirea agarului Hektoen este recomandată pentru căutarea bacteriilor din genul Shigella și Salmonella în probe de scaun și alimente.
Posibilitatea izolării acestor bacterii este considerabil crescută dacă eșantionul este anterior îmbogățit în bulionele speciale, cum ar fi bulionul de selenit, bulionul de selenită de cistină, bulionul tetrathionat etc.
Inoculul trebuie să fie puternic, iar însămânțarea se face prin strecurare. Plăcile sunt incubate la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore în aerobioză.
Se recomandă incubarea timp de 48 de ore, deoarece caracteristicile coloniilor sunt mai clare pentru interpretarea și diferențierea lor în acest moment.
QA
Pentru a efectua controlul calității pe acest mediu, sunt utilizate tulpini bacteriene certificate, precum: Salmonella typhimurium ATCC 14028, Salmonella enteritidis ATCC 13076, Shigella flexneri ATCC 12022 și Shigella sonnei ATCC 25931.
Rezultatele așteptate sunt următoarele: Salmonella typhimurium și Salmonella enteritidis ar trebui să dezvolte colonii de culoare albastru-verde cu sau fără un centru negru. În timp ce specia Shigella va crește ca colonii de culoare albastru-verde.
Tulpinile de Escherichia coli ATCC 29212, Proteus mirabilis, Klebsiella pneumoniae ATCC 700603, Enterococcus faecalis ATCC 29212 și Staphylococcus aureus ATCC 25923 pot fi de asemenea incluse.
În aceste cazuri, caracteristicile observate sunt următoarele: E. coli și K. pneumoniae vor dezvolta colonii de somon-portocaliu în acest mediu, cu un precipitat de aceeași culoare în jurul lor. În timp ce Proteus va dezvolta colonii albastru-verzui cu sau fără un centru negru.
În timp ce S. aureus și E. faecalis trebuie inhibate, E. faecalis reușește ocazional să crească sub formă de colonii galbene foarte mici.
Pe de altă parte, întrucât acest mediu nu este autoclavat, este important să evaluați sterilitatea mediului. Prin urmare, din fiecare lot preparat, trebuie să fie incubate una până la două plăci neinoculate la 37 ° C timp de 24 de ore în aerobioză.
Evident, pe placă nu se așteaptă o creștere de niciun fel.
limitări
-Specii Proteus se pot dezvolta în acest mediu, iar caracteristicile coloniilor lor pot fi confundate cu Salmonella sau speciile Shigella. Din acest motiv, orice colonie suspectă trebuie confirmată cu teste biochimice.
-Este necesar să se însoțească utilizarea acestui mediu cu alte agari mai puțin selective, deoarece dacă microorganismul căutat se găsește în concentrații scăzute, este posibil să nu se dezvolte în acest mediu.
-Nu supraîncălziți în timpul pregătirii, deoarece căldura excesivă modifică compoziția mediului.
-In mod neobișnuit, pot apărea colonii de Salmonella care fermentează lactoza care pot trece neobservate.
Referințe
- Colaboratorii Wikipedia. Hektoen agar enteric. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 13 martie 2019, ora 23:38 UTC. Disponibil la: .wikipedia.org / Accesat 16 martie 2019.
- Laboratoare BD. BD Hektoen Enteric Agar (HE Agar). 2013. Disponibil la adresa: bd.com
- Laboratoarele Britannia. Hektoen Enteric Agar. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
- Laboratoare Difco Francisco Soria Melguizo. Hektoen agar. Disponibil la adresa: f-soria.es
- Manual Difco & BBL, Hektoen Enteric Agar. Ediția a II-a. Disponibil în: bd.com/europe