Agar Endo sau Endo mediul este un mediu solid, diferențial și cu un anumit grad de cultură selectivitate. Formula originală a fost creată de Endo în 1904 pentru a diferenția fermentarea lactozei de bacteriile care nu fermentează. Inițial a fost proiectat pentru izolarea Salmonella typhi, dar mai târziu obiectivul mediului s-a îndreptat către căutarea coliformelor.
Principiul Endo Agar a rămas, dar formularea sa a suferit nenumărate schimbări de-a lungul anilor. În prezent, mediul este format din digestia peptică a țesutului animal, lactoză, fosfat de hidrogen dipotasiu, sulfit de sodiu, fuchsină de bază și agar.
A: Virgin Endo Agar B: Agar Semănat Endo, în mijlocul agarului puteți observa strălucirea metalică a unei tulpini de E. coli. Sursa: A: Strolch1983 / B: LenkaM
Utilizarea principală a mediului a fost legată de izolarea și diferențierea bacililor Gram negativi aparținând familiei Enterobacteriaceae și altor familii apropiate.
Multă vreme a fost utilizat pentru detectarea coliformelor în probe de apă, lactate și alimente, dar astăzi utilizarea acestui mediu a fost deplasată de alții cu funcții similare. Cu toate acestea, unele laboratoare de microbiologie utilizează acest agar pentru izolarea Enterobacteriaceae din probe de origine clinică.
Bază
Endo agar conține peptone care servesc ca sursă de aminoacizi, azot, carbon și energie, necesare pentru creșterea microorganismelor nedemne.
Pe de altă parte, caracterul ușor selectiv al agarului este furnizat prin adăugarea de sulfit de sodiu și fucsină de bază; ambele componente inhibă parțial sau total creșterea majorității bacteriilor Gram pozitive.
Caracterul diferențial este dat de prezența carbohidratului fermentabil, care în acest caz este lactoză și fuchsină de bază, care servește și ca indicator al pH-ului.
Bacteriile gram-negative care cresc pe acest agar și sunt capabile să fermenteze lactoza vor forma colonii roz puternice; fiind patognomonic al Escherichia coli formarea unor colonii de roșu închis cu un luciu metalic verzui irident. Acest lucru se datorează producției ridicate de acizi din fermentația carbohidraților.
Trebuie remarcat faptul că mediul din jurul coloniilor transformă, de asemenea, o culoare roz puternică. În timp ce tijele Gram negative negative care fermentează fără lactoză formează colonii roz pal, similare cu cele medii sau incolore.
Dipotasiu hidrogen fosfat echilibrează pH-ul mediului, iar agarul este componenta care oferă consistența solidă.
preparare
Endo agar
Se cântăresc 41,5 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Se încălzește amestecul cu agitare frecventă până când se dizolvă complet mediul. Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C, la presiune de 15 lb, timp de 15 minute.
Când scoateți din autoclav, lăsați să se răcească la o temperatură de aproximativ 45-50 ° C, agitați amestecul pentru a se omogeniza înainte de servire. Turnați 20 ml în vasele sterile Petri.
Lăsați plăcile să se solidifice, să se întoarcă și să se păstreze într-o placă sau înveliți cu hârtie întunecată înainte de a le păstra în frigider. Este foarte important să protejați mediul preparat de lumina directă. O cea mai bună practică este să pregătești cantitatea exactă de care vei avea nevoie.
Dacă sunt păstrate la frigider, plăcile trebuie lăsate să se încălzească înainte de utilizare.
PH-ul mediului trebuie să fie între 7,2 și 7,6, iar culoarea mediului preparat este roz pal.
Varianta M-Endo agar
Există o altă versiune a Endo agar (m-Endo) care urmează formula McCarthy, Delaney și Grasso, care conține mai mulți compuși și variază sub formă de preparat.
Această variantă conține: lactoză, triptoză, digestie enzimatică a cazeinei, digestie enzimatică a țesutului animal, clorură de sodiu, fosfat de potasiu dibasic, sulfit de sodiu, extract de drojdie, fosfat de potasiu monobazic, fuchsin de bază, deoxiclolat de sodiu, lauril sulfat sodiu și agar.
În acest caz, 51 g de mediu deshidratat sunt cântărite și suspendate într-un litru de apă distilată conținând 20 ml de etanol.
Se încălzește ușor în timp ce se agită până când mediul se dizolvă complet. Nu trebuie supraîncălzit și nu trebuie autoclavat. După ce amestecul este omogen, serviți în vasele sterile Petri și lăsați să se solidifice.
Utilizare
În unele țări, este încă utilizat pentru a număra coliformele totale și fecale în probele alimentare și de apă, în special prezența Escherichia coli ca principal indicator al contaminării fecale.
M-Endo agar este recomandat de American Public Health Association (APHA) pentru monitorizarea și controlul programelor de dezinfectare și tratare a apelor uzate, precum și pentru evaluarea calității apei potabile.
Cea mai utilizată metodă este filtrarea membranei, după îmbogățirea probei cu bulion de Lauryl sulfat timp de 2 până la 4 ore.
Poate fi, de asemenea, utilizat ca substitut al agarului EMB în analiza microbiologică a alimentelor și a apei prin cea mai probabilă tehnică de număr (MPN), în special în faza de confirmare completă pentru a corobora prezența E. coli de la bulionele CE tulbure.
QA
Sunt semănate tulpini de control cunoscute sau certificate pentru a evalua calitatea lotului Endo agar pregătit.
Printre tulpinile care pot fi utilizate în acest scop se numără: Escherichia coli ATCC 25922, Escherichia coli ATCC 11775, Enterobacter cloacae ATCC 13047, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella flexneri ATCC 12022, Proteus miracaliscus ATCC 14000000 .
Tulpinile sunt însămânțate prin epuizare și sunt incubate la 37 ° C timp de 24 de ore în aerobioză.
Rezultatele așteptate sunt:
- Pentru Escherichia coli: colonii roșii puternice, cu luciu metalic.
- Pentru E. cloacae și K. pneumoniae, coloniile ar trebui să fie mucoide roz.
- În cazul S. typhimurium, S. flexneri și P. mirabilis, coloniile sunt de obicei roz pal sau incolore.
- În cele din urmă, E. faecalis este de așteptat parțial inhibat, de aceea creșterea sa trebuie să fie slabă, cu colonii roz foarte puternice.
limitări
-Edo mediul are o putere selectivă scăzută, prin urmare, este posibil ca unele microorganisme Gram pozitive, cum ar fi Staphylococcus, Enterococcus și chiar drojdii să poată crește.
-Alți bacili care nu aparțin familiei Enterobacteriaceae se pot dezvolta în acest mediu, precum Pseudomonas sp și Aeromonas sp. Caracteristicile acestor tulpini sunt coloniile neregulate incolore.
-Acest mediu preparat este foarte sensibil la lumină, prin urmare, expunerea prelungită la acesta deteriorează sistemul indicatorilor, dăunând ireversibil mediului.
-Componentele mediului sunt considerate cancerigene, de aceea trebuie evitat contactul direct.
-Mediul deshidratat este foarte higroscopic și trebuie păstrat în recipientul original la temperatura camerei, bine închis și într-un mediu uscat.
Referințe
- Laboratoare BD. Endo Agar. 2013. Disponibil la adresa: bd.com
- Laboratoare Neogen. M Endo Agar. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
- Endo Agar. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 7 sept. 2017, 08:27 UTC. 28 Feb 2019, 22:55. Disponibil la adresa: en.wikipedia.
- Laboratorul MercK Endo agar. 2019. Disponibil la adresa: merckmillipore.com
- Laboratoare tehnice. M –Endo Agar LES. 2015. Disponibil la adresa: liofilchem.net