SIMMONS CITRATE AGAR: JUSTIFICARE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZARE - BIOLOGIE - 2025

Agar Simmons citrat acesta este un mediu solid utilizat ca microorganisme biochimice test de identificare, în special gram - bacili negativ. Mediul original a fost creat de Koser în 1923.

Mediul citrat al lui Koser era format dintr-un bulion care conține fosfat de sodiu, fosfat de amoniu, fosfat monopotasiu, sulfat de magneziu și citrat de sodiu.

A. Mediu comercial Simmoane deshidratate Citrat Agar B. Agar preparat Simplu Citrat Agar. Sursa: A. Fotografie realizată de MSc. Marielsa Gil B. Roto2esdios, de la Wikimedia Commons

După cum se poate observa, singura sursă de carbon din mediu este citratul, iar azotul este fosfatul de amoniu, omitând proteine ​​și carbohidrați ca sursă a acestor elemente, acestea sunt frecvent întâlnite în alte medii.

Prin urmare, bacteriile inoculate în acest mediu se pot reproduce numai dacă este capabilă să preia carbonul din citrat. Testul a fost pozitiv dacă a existat turbiditate în mediu, dar a avut dezavantajul că poate apărea turbiditate nespecifică.

Această problemă a fost rezolvată de Simmons prin adăugarea de albastru de bromotimol și agar la formula inițială a lui Koser. Deși principiul este același, el este interpretat diferit.

Bază

Unele bacterii au capacitatea de a supraviețui în absența fermentației sau a producției de acid lactic, fiind nevoie să obțină energie prin utilizarea altor substraturi. În acest test, singura sursă de carbon oferită este citratul.

Bacteriile care pot supraviețui în aceste condiții metabolizează rapid citratul într-o alternativă la ruta tradițională, folosind ciclul acidului tricarboxilic sau ciclul fermentației citratului.

Catabolismul citratului de către bacterii implică un mecanism enzimatic fără intervenția coenzimei. Această enzimă este cunoscută sub denumirea de citricază (citrat oxaloacetat-liază) sau citrat desmolază. Reacția necesită prezența unui cation divalent, care în acest caz este furnizat de magneziu.

Reacția generează oxaloacetat și piruvat, care apoi dau naștere acizilor organici în mijlocul unui pH alcalin format prin utilizarea sursei de azot. Acești acizi organici sunt folosiți ca sursă de carbon care generează carbonați și bicarbonati, alcalinizând în continuare mediul înconjurător.

Mod de însămânțare

Mediul citrat Simmons trebuie inoculat ușor în coada de pește folosind o buclă dreaptă sau un ac și incubat timp de 24 de ore la 35-37 ° C. După timp, rezultatele sunt observate.

Semănatul se face numai pe suprafața agarului. Nu perforați.

Interpretare

Dacă mediul rămâne culoarea inițială (verde) și nu există o creștere vizibilă, testul este negativ, dar dacă mediul devine albastru, indică prezența produselor alcaline, care este detectată de indicatorul de pH. În acest caz, testul este pozitiv.

Citrat (+) și (-). Sursa: MSc. Marielsa gil

Acest lucru se întâmplă deoarece, dacă bacteria folosește carbonul citratului, este de asemenea capabilă să ia azotul de fosfat de amoniu cu care eliberează amoniac, alcalinizând mediul.

Pe de altă parte, dacă în mediu se observă creșterea bacteriilor, dar nu există nicio schimbare de culoare, testul trebuie considerat de asemenea pozitiv, deoarece, dacă există creștere, înseamnă că bacteriile au putut folosi citratul ca sursă de carbon, deși momentan nu există nicio modificare a pH-ului (uneori poate dura timp).

Dacă există vreo îndoială în interpretarea culorii finale, aceasta poate fi comparată cu un tub de citrat neinoculat.

preparare

Cântărește 24,2 g de mediu deshidratat pentru un litru de apă. Se amestecă și se lasă să se odihnească aproximativ 5 minute. Termină dizolvarea mediului prin încălzire timp de 1 sau două minute, agitând frecvent.

Se toarnă 4 ml în epruvete și se autoclavează la 121 ° C timp de 15 minute. Când părăsiți autoclava, înclinați cu ajutorul unui suport în așa fel încât agarul să se solidifice în formă de cioc de flaut, cu bloc mic sau cu fund și mai mult.

PH-ul final al mediului citrat este de 6,9 ​​(culoarea verde). Acest mediu este foarte sensibil la modificările de pH.

La pH 6 sau mai mic, mediul devine galben. Această culoare nu este observată în testul cu bacterii.

Și la pH 7,6 sau mai mare, mediul devine albastru prusac profund.

Utilizare

Simmons Citrate Agar este utilizat pentru identificarea anumitor microorganisme, în special bacili aparținând familiei Enterobacteriaceae și altor bacili care fermentează fără glucoză.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Gânduri finale

Mediul citrat Simmons este un test foarte delicat, deoarece pot fi obținute false erori pozitive.

Grijile care trebuie luate sunt următoarele:

inocul

Nu trebuie făcut un inocul bacterian foarte gros sau încărcat, deoarece poate provoca o culoare galbenă de cupru în locul de însămânțare, fără a afecta restul mediului, dar poate duce la crezul că există creștere. Nu înseamnă pozitivitatea testului.

De asemenea, un inocul gros poate genera o falsă pozitivă, deoarece compușii organici preformați în pereții celulari ai bacteriilor care mor, pot elibera suficient carbon și azot pentru a transforma indicatorul de pH.

Prin urmare, idealul este să semănați cu acul în locul mânerului de platină, pentru a evita luarea excesului de material.

însămânțat

Pe de altă parte, atunci când este însămânțată bateria de teste biochimice pentru identificarea microorganismului în cauză, este important ca testul citrat să fie inoculat pentru a evita transportul proteinelor sau carbohidraților dintr-un alt mediu.

În această circumstanță este posibilă obținerea unui fals pozitiv, deoarece oricare dintre aceste substanțe care sunt introduse din greșeală vor fi metabolizate și vor provoca o modificare a pH-ului.

Un alt mod de a evita preluarea substanțelor este să arzi bine bucla și să iei un nou inocul între un test și altul.

De asemenea, trebuie să aveți grijă atunci când atingeți colonia pentru a efectua inoculul, deoarece trebuie evitat să trageți o parte din agar din cultura din care provin bacteriile, din cauza celor explicate mai sus.

În acest sens, Matsen, Sherris și Branson recomandă diluarea inoculului în soluție fiziologică înainte de a inocula testul citrat pentru a evita transferul altor surse de carbon.

Intensitatea culorii

Trebuie avut în vedere că intensitatea culorii produse atunci când testul este pozitiv poate varia în funcție de casa comercială.

În plus, există microorganisme care se testează pozitiv la 24 de ore, dar există și alte tulpini care necesită 48 ore sau mai mult pentru a produce o modificare a pH-ului.

Referințe

1. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratoare BD. Pantaloni BBL Simmons Citrate Agar. 2015. Disponibil la adresa: bd.com
5. Laboratoarele Britannia. Simmons Citrate Agar. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
6. Laboratoare de diagnostic Valtek. Simmons Citrate Agar. 2016. Disponibil la adresa: andinamedica.com.