AGAR DE CIOCOLATĂ: BAZĂ, UTILIZĂRI ȘI PREPARARE - BIOLOGIE - 2025

Agarul ciocolata este un mediu de cultură solid, îmbogățit, non - selective și non - diferențial. Este utilizat în principal pentru izolarea microorganismelor solicitante din punct de vedere nutrițional, deși orice tip de bacterii pot crește în el.

Din acest motiv, utilitatea sa crește în special la semănarea probelor care sunt în mod normal sterile, cum ar fi LCR și lichidul articular. Deși este inclusă și în mijloacele alese pentru semănarea probelor polimicrobiene, dar în aceste cazuri este necesară adăugarea de antibiotice care inhibă flora concomitentă.

Agar de ciocolată cu creștere bacteriană

Acest mediu are o culoare maro caracteristică foarte asemănătoare cu ciocolata, de unde și numele acestuia. Preparatul este foarte asemănător cu cel al agarului sanguin, numai în acest caz sângele trebuie încălzit pentru ca globulele roșii să se descompună.

Preparatul său, ca și agarul de sânge, este foarte delicat, deoarece este ușor contaminat. Din acest motiv, multe laboratoare preferă să achiziționeze acest mediu deja pregătit de companii comerciale care garantează calitatea acestuia.

Bază

Acest mediu este format dintr-o bază de agar bogată în nutrienți și sânge încălzit. Hemoliza globulelor roșii asigură factorul X (hemin) și factorul V (NAD), necesare pentru creșterea unor microorganisme, precum genul Haemophilus. De asemenea, este foarte util pentru izolarea Neisserias sp.

La fel ca agarul de sânge, diferite medii pot fi utilizate ca agar de bază, în funcție de necesitate. Printre mediile utilizate se numără infuzia de inimă cerebrală și agar de soia tripticază, deși cele mai recomandate sunt agar Columbia, Müeller Hinton, GC agar și Thayer Martin agar.

Unele variante de agar de ciocolată includ un supliment fortificat disponibil comercial, numit Isovitalex sau Polivitex.

Aceste suplimente conțin vitamina B ₁₂ , L-glutamină, adenină, clorhidrat de guanină, acid p-aminobenzoic, nicotinamidă adenină dinucleotidă (NAD), pirofosfat de tiamină, nitrat feric, clorhidrat de tiamină, clorhidrat de cisteină, L-cistină și glucoză.

Este important de menționat că agarul de ciocolată este mai îmbogățit decât agarul de sânge, dar nu permite observarea tiparelor de hemoliză.

Aplicații

Sursa: pixnio.com. Autor:
Pete Seidel, Amanda Moore, MT, Todd Parker, doctorat, Audra Marsh, USCDCP

Agar de ciocolată preparat cu agar Columbia

Acest mediu conține digestia pancreasului din cazeină și inimă, digestia peptică a cărnii, clorură de sodiu, agar, extract de drojdie și amidon de porumb. De asemenea, este bogat în vitamine, minerale și aminoacizi esențiali.

Această bază de sânge încălzită este ideală pentru izolarea bacteriilor din genul Neisseria. Pe de altă parte, dacă se adaugă suplimentar la mediu un supliment pentru Brucella, microorganismul menționat poate fi izolat. Rezultatele sunt îmbunătățite folosind sângele de cal.

Agar de ciocolată preparat cu agar bază GC (pentru gonococi)

Acest mediu conține peptone, amidon de porumb, tampoane monobazice și dibasice, clorură de sodiu și agar.

Majoritatea prezentărilor de agar de ciocolată preparate comercial vin cu această bază și nu conțin sânge încălzit, ci mai degrabă un amestec sintetic de hemin și un supliment chimic de factori de creștere, vitamine, minerale, aminoacizi, factorul V și glucoză.

Agar de ciocolată preparat cu ager Müeller Hinton

Este utilizat pentru a testa susceptibilitatea antimicrobiană a microorganismelor fastidioase, cum ar fi Streptococcus pneumoniae folosind 5% sânge de oaie încălzit.

De asemenea, este utilizat pentru izolarea primară a Neisserias și Haemophilus, dar în cazul particular al izolării Haemophilus, este preferată utilizarea sângelui de cal, deoarece este o sursă bogată de factori X și V.

Pe de altă parte, dacă proba care trebuie semănată provine dintr-o zonă care nu este sterilă, se recomandă adăugarea de antibiotice pentru a inhiba flora normală a zonei.

Exemplu pentru probe respiratorii în care este suspectată prezența bacteriilor din genul Haemophilus, bacitracina este utilizată pentru a inhiba creșterea Staphylococcus, Micrococcus, Streptococcus și Neisserias saprofite.

În cazul eșantioanelor de chancre genitale, în care este suspectat Haemophilus ducreyi, a fost folosită cu succes un agar de ciocolată preparat după cum urmează: Müeller - Agar Hinton cu 5% sânge de cal ciocolatizat, 1% îmbogățire cu Isovitalex și 3 pg / ml vancomicină.

Agar de ciocolată preparat cu Thayer Martin agar

Acest mediu este special pentru izolarea Neisseria gonorrhoeae. Trebuie să conțină antibiotice pentru a inhiba flora însoțitoare. Sângele de miel este folosit.

preparare

Ar trebui să vedeți indicațiile pentru prepararea agarului de bază care trebuie utilizat. Se găsesc pe spatele containerului mediului deshidratat. În general, descriu cât trebuie să cântărești pentru a prepara un litru de mediu de cultură.

Cantitatea exactă necesară poate fi pregătită în laborator, poate fi mai mult sau mai puțin de un litru.

calculele

O regulă de trei este utilizată pentru a calcula cât de mult să cântărească pentru a pregăti volumul dorit. Exemplu:

Dacă pentru 1 litru este necesar să cântărești 40 gr, iar laboratorul necesită 800 ml, se spune:

1000 ml ----------- 40 gr

800 ml -----------– X

Formula va fi următoarea:

X = 32 gr (cantitate care trebuie cântărită pentru 800 ml).

Se cântărește și se dizolvă

Cantitatea necesară este cântărită și introdusă într-un balon cu apa.

Se încălzește la foc moderat și se amestecă ușor cu mișcări rotative până când mediul deshidratat se dizolvă complet, lăsându-l să fiarbă timp de 1 minut.

Steriliza

Vasul este plasat în autoclav pentru a steriliza mediul la 121 ° C timp de 20 de minute.

Agregat de sânge

La ieșirea din autoclav, se lasă să stea până când temperatura mediului este aproximativ între 56 și 70 ° C pentru a plasa sângele și a se amesteca până când mediul devine maro.

Dacă adăugați suplimente, acesta este momentul pentru a face acest lucru. Ulterior, amestecați și serviți 20 ml la fiecare farfurie Petri sterilă.

Întreaga procedură trebuie făcută într-o capotă cu flux laminar sau în jurul arzătorului Bunsen.

Lăsați să stea până se solidifică și păstrați inversat în frigider.

Un alt mod de a prepara agar de ciocolată fără a folosi sânge

Mediul de bază este preparat așa cum s-a descris mai sus, hemoglobina deshidratată obținută comercial este dizolvată și sterilizată în autoclav.

Ambele soluții se lasă să se răcească la 50 ° C, se unesc și se adaugă suplimentul. Se amestecă în condiții aseptice și apoi se servește în preparate Petri sterile.

QA

Este important ca sângele să fie plasat la temperatura indicată, deoarece este ideal pentru a liza globulele roșii și, în același timp, a menține factorul V, care este sensibil la temperatură.

Nu trebuie să rămână bule pe suprafața agarului. De la fiecare lot de 100 de farfurii, una sau două plăci ar trebui să fie incubate în cuptor la 37 ° C timp de 24 de ore pentru a verifica sterilitatea acestora.

Pentru cele mai bune rezultate, agar de ciocolată trebuie utilizat la scurt timp după preparare.

Tulpinile bacteriene de control trebuie ținute în laborator pentru a evalua eficacitatea mediului proaspăt pentru creșterea principalelor microorganisme fastidioase de importanță clinică.

Referințe

1. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinică practică. Universitatea din Cadiz, ediția a II-a. Serviciul de publicații UCA
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Llanes R, Reyes A, Rodríguez C, Guzmán D, Llop A. Fezabilitatea utilizării mediului de cultură de bază GC-Biocen Agar în Laboratorul de Microbiologie. Rev Cubana Med Trop, 2004; 56 (3): 237-238. Disponibil la adresa: scielo.sld.
5. Colaboratorii Wikipedia. Agar de ciocolată. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 17 decembrie 2018, ora 19:54 UTC. Disponibil la adresa: en.wikipedia.org.