Agarul cetrimide sau cetrimide este un mediu selectiv de cultură solid concepute pentru izolarea Pseudomonas aeruginosa. Se bazează pe arătarea producției de pigmenți caracteristici acestei specii și a fost făcută din modificarea Tech agar, creată de King, Ward și Raney.
Formula inițială conținea săruri de clorură de magneziu, sulfat de potasiu, digestia pancreatică a gelatinei și agar-agar. Modificarea formulei a constat în adăugarea de cetrimidă (bromură de cetil trimetil amoniu) și glicerol.
Agar Cetrimide însămânțat cu Pseudomonas aeruginosa Sursa: BiotechMichael, de la Wikimedia Commons
Cetrimida agar este utilă pentru studiul microbiologic al probelor în care este suspectată prezența Pseudomonas aeruginosa. Trebuie menționat că această bacterie este extrem de importantă, deoarece, deși face parte din microbiota normală a mediului, se comportă frecvent ca un agent patogen oportunist.
Prin urmare, una dintre cele mai frecvente probleme cauzate de acest germen sunt infecțiile nosocomiale, adică cele care apar în mediul spitalicesc, atacând pacienții care au un sistem imunitar deprimat.
Pe de altă parte, datorită afinității pe care acest microorganism o are cu umiditatea, cele mai vulnerabile obiective de contaminare sunt: echipamente de respirație asistată, medicamente, nebulizatoare, surse de apă, aparate de aer condiționat, dezinfectanți, soluții săpun, soluții injectabile, răni deschise , catetere, tuburi urinare, printre altele.
În acest sens, agarul de cetrimidă este util pentru a efectua controale și culturi microbiologice la elementele menționate anterior.
Bază
Agra Cetrimide se bazează pe capacitatea mediului de a promova creșterea P. aeruginosa, de a stimula producția de pigmenți și, la rândul său, de a inhiba creșterea altor microorganisme.
Aceste proprietăți se datorează funcției fiecăreia dintre componentele sale. Peptona gelatină prezentă servește ca sursă de azot, vitamine și minerale. Glicerina sau glicerina funcționează ca o sursă de carbon.
La rândul său, cetrimida (bromura de cetil trimetil amoniu) este substanța care inhibă creșterea bacteriilor, altele decât P. aeruginosa, inclusiv alte specii aparținând aceluiași gen.
Inhibiția are loc deoarece cetramida acționează ca un detergent cationic, reușind să destabilizeze membrana plasmatică a majorității bacteriilor, cu excepția P. aeruginosa și a altor altele care reușesc să supraviețuiască.
Pe de altă parte, conține clorură de magneziu și sulfat de potasiu. Acești compuși stimulează expresia fenotipică legată de capacitatea Pseudomonas aeruginosa de a produce diverși pigmenți, incluzând: pirocianină, pirovedină, piorrubină, piomelanină și fluoresceină. În cele din urmă, conține agar-agar, ceea ce îi conferă o consistență solidă.
Interpretare
Interpretarea creșterii obținute în acest agar se realizează după cum urmează:
Observarea unor colonii rotunde, netede, cu margini obișnuite, cu producerea de pigmenți albastru-verzui, verzi, maro sau roșiatici, plus emisia de miros fructat (aminoacetofenonă), este un rezultat prezumtiv al prezenței acestei bacterii în respectiva probă.
Pe de altă parte, observarea pe colonii a unui pigment galben verzui strălucitor este indică P. aeruginosa atunci când placa este expusă la lumina ultravioletă.
Fluorescența coloniilor de P. aeruginosa pe agar de cetrimidă sub lumină ultravioletă.
Trebuie menționat că fiecare culoare observată se datorează producției unui pigment specific. Pigmentul albastru-verde corespunde producerii de pirocianină, de la verde la pioverdină, roșiatic la piorubină, maro la piomelanină și fluorescență galben-verde strălucitor sub lumină UV la fluoresceină.
preparare
Se cântăresc 43 g de mediu deshidratat și se dizolvă în apă distilată. Se adaugă 10 ml glicerol. Duceți amestecul la o sursă de căldură. Se lasă să fiarbă câteva minute până la dizolvarea completă.
Autoclave la 121 ° C timp de 15 minute. Lăsați să stea și serviți în vasele sterile Petri când temperatura este în jur de 50 ° C.
Se lasă să se solidifice, să se rotească, să se ordoneze în plaque și să se păstreze în frigider până la utilizare. Plăcile cu agar de cetrimidă trebuie scoase din frigider înainte de semănat și lăsate să ajungă la temperatura camerei.
PH-ul final al mediului trebuie să fie de 7,2 ± 0,2.
Culoarea mediului deshidratat este bej și preparatul este alb opac.
Aplicații
Toate tipurile de eșantioane în care este suspectată prezența Pseudomonas aeruginosa pot fi semănate pe agar de cetrimidă. Prin urmare, este util în toate domeniile microbiologiei (mediu, industrial, clinic, apă și alimente).
Este de mare importanță analiza mediilor spitalicești și, astfel, să poți aplica măsuri corective, deoarece acest microorganism ajunge la pacienți prin echipamente contaminate, medicamente, soluții și consumabile utilizate de pacient.
În acest fel, microorganismul poate infecta tractul respirator inferior, tractul urinar și rănile pacienților imunosuppressi.
Numărul coloniilor de P. aeruginosa se poate face și în testele limită microbiene.
însămânțat
Agra Cetrimide poate fi utilizat ca cultură primară. Placa este inoculată pe una din marginile ei și de acolo este distribuită prin epuizare până la restul plăcii. Probele de lichid pot fi însămânțate la suprafață cu o spatulă drigalski.
Plăcile sunt incubate aerob la 37 ° C pentru 24 de ore de incubare.
limitări
-Un procent mic de tulpini de Pseudomonas aeruginosas nu produc piocianină, deci un fals negativ poate fi interpretat.
-Unele specii de importanță clinică Pseudomonas sunt inhibate în acest mediu.
-În ciuda respectării caracteristicilor descrise pentru Pseudomonas aeruginosa, acestea trebuie coroborate cu teste de identificare suplimentare. Un test care nu trebuie ratat este testul oxidazei, trebuie să dea rezultate pozitive.
-Unele Enterobacteriaceae pot crește în acest mediu și pot dezvolta un pigment galben, dar diferă de Pseudomonas aeruginosa prin faptul că atunci când placa este supusă luminii ultraviolete nu există fluorescență.
- Serratia marcescens reușește să se dezvolte și produce un pigment roz.
-Dacă plăcile însămânțate cu agar de cetrimidă sunt expuse pentru o perioadă la temperatura camerei, tulpinile de P. aeruginosa pot pierde fluorescența observată sub lumină ultravioletă, cu toate acestea proprietatea este recuperată dacă sunt din nou incubate la 37 ° C.
QA
Pentru a analiza performanța bună a agarului de cetrimidă, se pot folosi tulpini de control, precum: Pseudomonas aeruginosa ATCC 9027, Stenotrophomonas maltophilia ATCC 13637, Escherichia coli ATCC 25922 și Staphylococcus aureus ATCC 25923.
Rezultatele așteptate sunt:
- Creștere bună pentru P. aeruginosa, cu pigment albastru-verde și fluoresceină pozitivă.
- S. maltofilia și S. aureus vor fi parțial inhibate complet.
- Se așteaptă ca Escherichia coli să fie complet inhibată.
Referințe
- Callicó A, Cedré B, Sifontes S, Torres V, Pino Y, Callís A, Esnard S. Caracterizarea fenotipică și serologică a izolatelor clinice ale Pseudomonas aeruginosa. VacciMonitor. 2004; 13 (3): 1-9.
- Laboratoarele Conda Pronadisa. Baza agarului cetrimidic. 2014. Disponibil la adresa: condalab.com
- Laboratoarele Britannia. Agar Cetrimidă. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
- Laboratoare BD. BD Pseudosel agar (Cetrimide agar). 2013. Disponibil la adresa: bd.com
- Francisco Soria Melguizo Laborator, CA Cetrimide agar. 2009. Disponibil la: http://f-soria.es