Agar Biggy este selectiv mediu solid și cultură diferențială. A fost conceput pentru a izola și ajuta la identificarea principalelor specii Candida. Numele său BIGGY provine de la acronimul din engleză Bismuth Glucose Glycine Yeast.
Formula originală a fost creată de Nickerson, motiv pentru care acest mediu este cunoscut și sub denumirea de agar Nickerson. În prezent este compus din extract de drojdie, glicină, dextroză, citrat de amoniu, citrat de bismut, sulfit de sodiu și agar.
Reprezentare grafică a agarului BIGGY. Sursa: Flickr.com
Agarul BIGGY este formulat pentru diferențierea speciilor Complex C. albicans, C. tropicalis, C. krusei și C. kefyr, dar și alte specii cresc, precum Candida glabrata, C. parapsiloză, C. guilliermondii, Trichosporun sp, Geotrichum candidum și Saccharomyces cerevisiae.
Are o sensibilitate și specificitate bună, însă, în comparație cu alte medii cu o funcție similară, este pe locul doi, fiind depășit de CHROMagar. Din acest motiv, multe laboratoare preferă acestea din urmă, deși este mult mai scump.
Ar trebui să fie clar că utilizarea agarului BIGGY, precum și a altor mijloace similare, ajută la o identificare rapidă prezumtivă, dar niciodată confirmatoare. Prin urmare, trebuie să fie disponibile metode suplimentare de identificare; de exemplu, sistemele de identificare Vitek 32 și API 20.
Bază
Agarul BiGGY este considerat un mediu parțial selectiv pentru izolarea drojdiilor, în special a genului Candida, deși se pot dezvolta și alte genuri.
De asemenea, este un mediu diferențial, deoarece în funcție de speciile implicate se vor observa diferite caracteristici în ceea ce privește aspectul, culoarea, forma și mărimea. Este considerat un mediu cromogen, datorită dezvoltării de culori diferite în colonii.
Culoarea coloniilor de drojdie se datorează prezenței sulfitului de bismut în agar. Nickerson și-a dat seama că drojdiile din genul Candida efectuează o reducere extracelulară a sulfitului de bismut, transformând-o în sulfură de bismut (o substanță neagră insolubilă). Aceasta rezultă în coloniile maro deschis până la negru.
Acest agar conține extract de drojdie și dextroză, care oferă sursa de nutrienți de bază și energie pentru dezvoltarea drojdiei. Glicina este un stimulent al creșterii drojdiei, în timp ce inhibă creșterea anumitor bacterii.
În același sens, citratul de amoniu și bismut, precum și sulfitul de sodiu acționează ca inhibitori ai creșterii bacteriene. Agar este agentul care conferă consistenței solide medii.
preparare
Se cântăresc 45 g de mediu de cultură deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Agitați și încălziți amestecul, fierbând 1 minut până la dizolvarea completă. Acest mediu de cultură nu este autoclavabil.
După răcire la aproximativ 45 ° C într-o baie de apă, turnați 20 ml pe vasele Petri sterile.
Culoarea mediului deshidratat este gri gălbuie și preparat este un gel alb gălbui, în care se poate observa un ușor precipitat floculant.
PH-ul trebuie să fie de 6,8 ± 0,2.
Mediul preparat trebuie păstrat la frigider (4 ° C) și ferit de lumină. Deoarece este un mediu care nu poate fi autoclavat, acesta trebuie utilizat cât mai curând posibil. Utilizarea sa este recomandată înainte de 3 zile de la preparare.
Utilizare
Plăcile sunt incubate la temperatura camerei (25 ° C) timp de 24, 48 și 72 de ore, iar timpul de incubație poate fi prelungit până la 5 zile.
Fiecare specie de Candida dezvoltă anumite caracteristici care le fac să se distingă una de alta. Producătorii de mediu descriu următoarele caracteristici pentru fiecare specie:
-Candida albicans complex: se dezvoltă pe acest agar sub formă de colonii netede, rotunde, brune sau negre, cu o ușoară graniță micelară. Cu excepția faptului că culoarea întunecată nu difuză la mijloc.
-Candida tropicalis: colonii luminoase, mici, de culoare maro închis, cu un centru negru și o ușoară graniță micelară. Culoarea închisă se difuzează spre mijloc, caracteristică tipică acestei specii, după ce a fost incubată timp de 72 de ore.
-Candida krusei dezvoltă colonii mari, plate, cu aspect dur, cu o margine brună până la negricioasă.
-Candida parakrusei: colonii de dimensiuni medii, de cele mai multe ori dure, plate. Culoarea poate varia de la maro roșiatic închis la maro roșiatic deschis. Granița coloniilor are miceliu extins, gălbui.
-Candida stellatoidea: dezvoltă colonii medii, plate, maro închis, aproape negru. Dezvoltarea micelară este foarte rară.
Un studiu realizat de Yücesoy și Marol în 2003, a arătat că mediul CHROMagar are o sensibilitate și o mai bună specificitate pentru diferențierea și identificarea diferitelor specii Candida decât BIGGY agar.
QA
Pentru controlul sterilității, plăcile neinoculate sunt incubate la 25 ° C, la întuneric, timp de 24 până la 48 de ore, este de așteptat să nu existe creștere de niciun fel sau schimbare de culoare.
Tulpinile ATCC recomandate pentru controlul calității mediului sunt:
Complexul Candida albicans ATCC 60193, Candida glabrata ATCC 2001, Candida krusei ATCC 34135. În toate acestea, este de așteptat creșterea descrisă mai sus.
De asemenea, pot fi utilizate următoarele tulpini:
Escherichia coli ATCC 25922, Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 și Staphylococcus epidermidis ATCC 12228. În primele două, se așteaptă o inhibare totală, dar în cazul creșterii parțiale, coloniile vor fi de culoare crem.
În cazul S. aureus, este de așteptat să fie total inhibat, dar dacă crește parțial, coloniile sale sunt albe.
limitări
Unele bacterii sunt capabile să crească în acest mediu și pot chiar să devină de culoare închisă, simulând o colonie Candida, dar atunci când amețiți colonia și observați-o la microscop, aceasta este ușor aruncată.
Tabel: Caracteristicile coloniilor unor drojdii pe agar BIGGY conform lucrărilor lui Yücesoy M și Marol S.
Sursa: Yücesoy M, Marol S. Performanța CHROMAGAR candida și BIGGY agar pentru identificarea speciilor de drojdie. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7
Referințe
- Yücesoy M, Marol S. Performanța CHROMAGAR candida și BIGGY agar pentru identificarea speciilor de drojdie. Ann Clin Microbiol Antimicrob. 2003; 2 (8): 1-7.
- MCD LAB. Fișă tehnică BIGGY Agar. Disponibil la: mcdlab.net/
- Laborator Neogen. BIGGY Agar. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
- Laboratoarele Conda Pronadisa. BIGGY agar. Disponibil la adresa: condalab.com
- Laboratoare BD. Agar BD BiGGY (Agar cu drojdie de glicină Bismut Glicină). 2011. Disponibil la adresa: bd.com