BAIRD PARKER AGAR: FUNDAȚIE, PREGĂTIRE ȘI UTILIZARE - BIOLOGIE - 2025

Agarul Baird Parker este un selectiv mediu solid și cultură diferențială. A fost creat în 1962 pentru detectarea și numărarea stafilococii coagulaza pozitivi (Staphylococcus aureus).

Este alcătuit din hidrolizat pancreatic de cazeină, extract de carne, extract de drojdie, clorură de litiu, glicină, piruvat de sodiu, telurită de potasiu, emulsie de agar și gălbenuș de ou.

Coloniile tipice de Staphylococcus aureus pe agar Baird Parker. Sursa: Daizy John

Agar Baird Parker se bazează pe capacitatea S. aureus de a reduce telurita și de a produce lecitinaza. Ambele proprietăți generează o colonie cu caracteristici specifice pentru această specie. Prin urmare, este extrem de eficient în detectarea acestui microorganism.

Coloniile tipice de S. aureus sunt negre sau gri închis, cu o margine incoloră și un halou ușor care le înconjoară, diferențindu-le de alte microorganisme. Acest agent patogen poate fi găsit în probe clinice, ape, produse cosmetice și alimente crude sau gătite.

Diagnosticul sau detectarea acestuia este de maximă importanță, datorită diversității de patologii pe care le produce, precum intoxicații alimentare, sindrom de piele scaldată, sindrom de șoc toxic, abcese, meningită, septicemie, endocardită, printre altele.

Bază

Putere hrănitoare

Hidrolizatul pancreatic de cazeină, extract de carne și extract de drojdie sunt surse de nutrienți, vitamine și minerale necesare pentru dezvoltarea microbiană generală, în timp ce piruvatul și glicina sunt compuși care favorizează creșterea specifică a Staphylococcus aureus.

Selectiv

Baird Parker Agar este selectiv deoarece conține substanțe care inhibă creșterea florei însoțitoare, promovând în același timp dezvoltarea S. aureus. Compușii inhibitori sunt clorura de litiu și teluritul de potasiu.

Diferenţial

Acest mediu face posibilă diferențierea S. aureus de restul stafilococilor negativi ai coagulazei. S. aureus are capacitatea de a reduce telurita la teluri negri metalici liberi, formând colonii negre sau gri închise.

De asemenea, gălbenușul de ou furnizează substraturile pentru a demonstra prezența enzimei lecitinaza și lipaza. S. aureus este lecitinaza pozitivă și, prin urmare, se va observa un halo clar în jurul coloniei, ceea ce indică faptul că lecitina a fost hidrolizată.

În acest sens, apariția pe acest agar de colonii negre lucioase sau gri închis cu un halou ușor în jurul lor indică prezența S. aureus.

Dacă se formează o zonă de precipitații este indică activitatea lipazei. Unele tulpini de S. aureus sunt lipază pozitive, iar altele negative.

În cazul în care S. aureus este lipază pozitivă, se va observa o zonă opacă în jurul coloniei de culoare neagră sau gri închisă, iar apoi o halo ușoară datorită acțiunii lecitinazei.

Coloniile de bacterii, altele decât S. aureus, capabile să crească pe acest mediu, vor dezvolta colonii incolore sau brune, fără halo înconjurător.

Coloniile negre atipice pot fi, de asemenea, văzute cu sau fără o margine incoloră, dar fără halo ușor. Aceste colonii nu trebuie luate în considerare, ele nu corespund S. aureus.

preparare

Emulsie de gălbenuș de ou

Luați un ou proaspăt de pui, spălați-l bine și puneți-l în 70% alcool timp de 2 până la 3 ore. Oul este apoi deschis aseptic și albul este separat cu grijă de gălbenușul. După aceea, se iau 50 ml de gălbenuș și se amestecă cu 50 ml de soluție fiziologică sterilă.

Tellurit de potasiu 1% în greutate

Unele case comerciale vând telurit de potasiu 1% gata de utilizare. Se adaugă la mediu înainte ca mediul să se solidifice.

Pentru a pregăti această soluție în laborator, 1,0 g de telurită de potasiu sunt cântărite și dizolvate într-o parte a apei. Ulterior, cantitatea de apă este finalizată până la 100 ml. Soluția trebuie sterilizată prin metoda de filtrare.

Pregătirea mediului de cultură

Se cântăresc 60 g de mediu deshidratat și se dizolvă în 940 ml apă distilată. Lăsați amestecul să stea aproximativ 5-10 minute.

Aplicați căldură amestecând frecvent mediul pentru a îmbunătăți procesul de dizolvare. Se aduce la fierbere un minut. Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

Se lasă să stea până când ajunge la o temperatură de 45 ° C și se adaugă 50 ml de emulsie de gălbenuș de ou și 10 ml de telurit de 1%. Se amestecă bine și se toarnă 15-20 ml pe vasele Petri sterile.

Se lasă la solidificare, se comandă inversarea în plăci și se păstrează la frigider până la utilizare.

PH-ul final al mediului preparat trebuie să fie de 6,8 ± 0,2.

Înainte de a semăna o probă, așteptați ca placa să atingă temperatura camerei. Semănați plăcile prin stripare sau prin însămânțarea suprafeței cu o spatula Drigalski.

Culoarea mediului deshidratat este bronzată, iar culoarea mediului preparat este chihlimbar deschis.

Utilizare

Probele clinice

Probele clinice sunt semănate direct, descărcând o parte din material la un capăt al plăcii, iar de acolo este strecurat de epuizare. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C.

Probele alimentare

Se cântăresc 10 gr din proba de alimente și se omogenizează în 90 ml de apă peptonă 0,1%, de acolo se prepară diluțiile, dacă este necesar. Inoculați plăcile în trei exemplare cu 0,3 ml de soluții preparate și sămânțați la suprafață cu o spatulă Drigalski. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C.

Această metodologie permite numărarea coloniilor obișnuite obținute și este ideală atunci când este suspectată prezența S. aureus peste 10 CFU per g / ml de probă.

Dacă se suspectează că cantitatea de S. aureus este mică sau există o mulțime de flore însoțitoare, se recomandă îmbogățirea probei în bulion de soia tripticază cu 10% NaCl și 1% piruvat de sodiu. Acest lucru va promova creșterea S. aureus și va inhiba dezvoltarea florei însoțitoare. Tuburile turbid sunt însămânțate pe agar Baird Parker.

Probele de apă

Într-un sistem de filtrare în vid sterilizat, 100 ml apă de studiu sunt filtrate și, ulterior, membrana microporoasă de 0,4 microni este îndepărtată cu o forcepsă sterilă și plasată pe o placă Baird Parker. Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 35-37 ° C. Această tehnică permite numărarea coloniilor tipice S. aureus.

QA

Tulpini cunoscute precum Staphylococcus aureus ATCC 25923, Staphylococcus aureus ATCC 6538, Staphylococcus epidermidis ATCC 12228, Escherichia coli ATCC 25922 sau Proteus mirabilis ATCC 43071 pot fi utilizate pentru a evalua calitatea Agarului Baird Parker.

În cazul tulpinilor ATCC de S. aureus, se știe că reduce telurita și sunt pozitive lipaza și lecitinaza. Prin urmare, trebuie să existe o dezvoltare satisfăcătoare și să crească colonii convexe cu un centru negru și o margine incoloră, cu un halou opac și un halou ușor în exterior.

La rândul său, S. epidermidis este de așteptat să se dezvolte slab pe acest mediu, cu colonii cenușiu-cenușiu până la negru, fără halo deschis.

Pentru E. coli și P. mirabilis este de așteptat ca acesta să fie total sau parțial inhibat. În caz de creștere, coloniile brune se vor dezvolta fără o zonă opacă sau un halo ușor.

recomandări

-Mediul nu trebuie încălzit după adăugarea teluritei și a gălbenușului de ou.

-Prepararea emulsiei de gălbenuș de ou și adăugarea acesteia la mijloc este un pas foarte vulnerabil pentru contaminare. Trebuie avut grijă extremă.

-Dacă există prezența unor colonii tipice de S. aureus, acesta trebuie confirmat prin montarea unui test de coagulază pe tulpina menționată.

-Dacă există rezultate îndoielnice cu coagulază, trebuie testate și alte teste confirmative.

-Atentați să nu confundați prezența coloniilor tipice S. aureus cu coloniile negre atipice.

Referințe

1. Colaboratorii Wikipedia. Agar Baird-Parker. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 15 martie 2017, ora 19:36 UTC. Disponibil la: wikipedia.org/ Accesat pe 18 februarie 2019.
2. Laboratoare BD. Baird Parker Agar. 2006. Disponibil la adresa: bd.com
3. Laboratoarele Britannia. Baird Parker bază de agar. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
4. Laboratoarele Francisco Soria Melguizo. 2009. Baird Parker Agar. Disponibil la: http://f-soria.es/Inform
5. Laboratoarele Britannia. Tellurit de potasiu. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
6. Alarcón-Lavín M, Oyarzo C, Escudero C, Cerda-Leal F, Valenzuela F. Transportul de stafilococ aureus enterotoxigenic tip A, în frotiurile nazofaringiene la manipulatorii de alimente. Rev Med Chile 2017; 145: 1559-1564
7. Convenția standardului venezuelean 1292-89. (1989). Foods. Izolarea și enumerarea Staphylococcus aureus. Disponibil la: sencamer.gob.ve