ULEI DE IMERSIUNE: COMPOZIȚIE, CARACTERISTICI, UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Uleiul de imersie este un lichid vâscos limpede care are un indice de refracție ridicat. Din acest motiv este utilizat pe scară largă în observațiile microscopice, deoarece oferă proprietatea de a concentra lumina atunci când trece prin obiectivul 100X al microscopului, crescând puterea de rezolvare a acestuia.

Aceasta se întâmplă deoarece se formează o peliculă vâscoasă între obiectiv și frotiu, împiedicând răspândirea razelor de lumină când ajung în aer, concentrând astfel fasciculele de lumină spre probă.

Dropper cu imersie în ulei și microscop focalizat cu obiectiv 100X folosind imersiunea în ulei. Sursa: Pixabay.com

Uleiul de imersie este utilizat doar cu obiectivul 100X. De aceea, obiectivul 100X se mai numește și obiectiv de imersiune. Restul sunt cunoscute sub denumirea de ținte uscate. Acest obiectiv nu poate fi utilizat fără uleiul de imersiune, deoarece fără el, vizualizarea nu ar fi satisfăcătoare.

Principala funcție a uleiului de imersiune este de a oferi imagini mai clare, mai clare și mai definite, permițând observarea detaliilor care nu ar fi posibile cu alte lentile.

Primul ulei folosit în acest scop a fost uleiul de anason, utilizat împreună cu prima lentilă de imersiune creată de Giovanni Battista Amici. Acest lucru a prevenit doar aberațiile cromatice, dar nu a mărit deschiderea numerică a sistemului de lentile.

Apoi s-a folosit uleiul de cedru, dar a avut multe dezavantaje care i-au forțat refuzul. Printre ele a fost aciditatea ridicată, care a afectat obiectivele pe termen scurt.

Ulterior, alte substanțe, cum ar fi apa și glicerina, au fost utilizate până la crearea uleiurilor sintetice de imersie, care puțin câte puțin au fost rafinate până când au ajuns la uleiul de imersie curent, care este un compus complex de substanțe organice.

Compoziția uleiului de imersiune

Uleiul de imersie este alcătuit dintr-un amestec de compuși organici precum: terfenil, terfenil hidrogenat, hidrocarburi naturale și polibuteni.

Caracteristicile uleiului de imersiune

Uleiul de imersie este un lichid galben deschis, ușor vâscos , în aparență, cu un miros caracteristic și o densitate între 0.92-0.99 g / cm ³ .

Uleiul de imersie nu este solubil în apă și are un punct de fierbere de 340 ° C. Indicele de refracție a (n 20 ° C / D): variază între 1.482 - 1.516. Între timp, indicele de bliț este de 110 ° C, iar vâscozitatea variază între 100 și 120 mPa.s.

Acest produs trebuie aruncat corespunzător, deoarece este ecotoxic. Cu alte cuvinte, dăunează mediului, afectând în principal animalele acvatice. Pe de altă parte, este iritant pentru piele și mucoase. Dacă este ingerat, este nefrotoxic și cardiotoxic.

Uleiul de imersie este stabil la 15-25 ° C, temperatura la care trebuie păstrat.

Bazele uleiului de imersiune

Când se utilizează lentile de mărire mai mare, intensitatea luminii trebuie crescută. Cu toate acestea, multe dintre fasciculele de lumină se pierd deoarece sunt împrăștiate la atingerea aerului (spațiul dintre copertina și lentila) și chiar unele raze sunt reflectate în totalitate.

Uleiul de imersie are un indice de refracție similar cu sticla. Prin urmare, când uleiul intră în contact între lentila 100X și capacul de acoperire, fasciculele de lumină sunt concentrate.

Razele concentrate trec prin eșantion și accentuează imaginea, adică crește deschiderea numerică a obiectivului și corectă pentru aberații cromatice și sferice.

Utilizări sau aplicații

Utilizarea uleiului de imersie este în special necesară atunci când este necesară observarea unei imagini într-un mod mai larg, folosind obiectivul de mărire cel mai mare (obiectiv 100X) pentru a vedea detalii esențiale pentru stabilirea unui diagnostic.

Prin urmare, este utilizat pe scară largă în studii microscopice în diverse domenii precum: histologie, citologie, hematologie și bacteriologie. De exemplu, este util pentru studierea caracteristicilor celulelor și țesuturilor unui pacient.

De asemenea, este utilizat pentru analiza frotiurilor de sânge, unde dorim să detaliem caracteristicile hemoparazitelor în interiorul și în afara eritrocitelor, precum și în preparatele Gram, pentru a defini caracteristicile morfotintoriale ale microorganismelor.

Este utilizat în general în preparate fixe, deoarece nu este recomandat în preparate proaspete. Acest lucru se datorează faptului că tensiunea de suprafață a uleiului determină mișcarea capacului de acoperire, determinând schimbarea eșantionului în timpul observației și prevenirea analizei.

Pe de altă parte, uleiul de imersie nu este util doar în microscopia ușoară convențională, ci este utilizat și în microscopurile cu fluorescență de reflexie internă totală (TIRFM) și în aplicații de fluorescență confocală.

Pași pentru observarea unui preparat folosind ulei de imersiune

Pentru a vizualiza o diapozitivă la microscop, diapozitivul trebuie să fie mai întâi focalizat cu obiectivul cu cea mai mică mărire, de obicei 10X, cu intensitate redusă a luminii.

Apoi trece la obiectivul 40X, iar calea de lumină este ușor crescută. Unele analize pot fi efectuate la această mărire, dar pentru a vedea detalii structurale este necesară o mărire 100X.

Înainte de a trece la obiectivul 100X, o picătură de ulei de imersiune este plasată pe capacul de acoperire, chiar unde doriți să observați, apoi turela microscopului este mutată pentru a localiza obiectivul 100x în preparat.

Intensitatea luminii este reglată (crescută) (prin mișcarea condensatorului și deschiderea diafragmei). Apoi, câteva mișcări mici ale șurubului micrometrului (înainte sau înapoi) ar trebui să se concentreze perfect dacă microscopul folosește obiective parafocale.

Dacă încercați să focalizați pregătirea direct cu lentilele de imersie, este posibil să aveți probleme în a găsi focalizarea. Nu este o acțiune imposibilă, dar dificultatea crește semnificativ.

Îngrijire

Pentru a utiliza uleiul de imersiune, trebuie luate în considerare anumite condiții.

Când s-a făcut un preparat colorat, cum ar fi un frotiu colorat cu Giemsa sau un Gram, așteptați ca frotiul să se usuce complet înainte de a pune imersiunea în ulei. În caz contrar, uleiul împreună cu apa vor forma micelele care nu vor permite observarea preparatului.

Pe de altă parte, după observarea lotului de preparate, adică la sfârșitul zilei de lucru, obiectivul 100X trebuie curățat cu atenție, folosind o hârtie lentilă cu etanol. Dacă lentila este lăsată murdară, uleiul se va usca pe ea și va fi foarte dificil să o îndepărtați, dăunând câmpului vizual.

De asemenea, trebuie luat în considerare faptul că uleiul este inflamabil și trebuie păstrat departe de sursele de căldură (brichete). Este important să evitați încălzirea acestuia peste 65 ° C.

În cele din urmă, uleiul este un produs toxic. Prin urmare, trebuie evitat contactul direct cu pielea și mucoasele, unde poate provoca o ușoară iritație. Pentru a evita accidentele, se recomandă utilizarea mănușilor și a ochelarilor de siguranță pentru manipularea acestuia.

În caz de contact cu uleiul, zona trebuie spălată cu multă apă. Dacă uleiul se stropește în ochi, trebuie spălat în același mod, păstrând ochii deschiși. În caz de ingestie accidentală, este important să ingerați apă caldă și să induceți vărsături, pe lângă faptul că mergeți la cel mai apropiat medic.

Referințe

1. "Microscopul cu fluorescență totală de reflexie internă." Wikipedia, enciclopedia gratuită. 30 Dec 2018, 22:46 UTC. 14 mai 2019, 01:54
2. IVD. Microscopie Imersiune în ulei. Disponibil la: Utilizatori / Echipa / Descărcări.
3. Biologie de mediu și microbiologie. Funcționarea microscopului optic. Disponibil la adresa: eumed.net/libros.
4. Sánchez Lera Rita María, Oliva García Ninfa Rosa. Istoricul microscopului și impactul acestuia asupra microbiologiei. Rev Hum Med, 2015; 15 (2): 355-372. Disponibil în: scielo.
5. Herrero J. Practica nr. 1: Bazele și utilizarea microscopului optic comun compus. Universitat d´Alacant Disponibil la adresa: rua.ua.es/dspace
6. Scharlau - MSDS. Ulei de imersie, pentru microscopie. 2001. Disponibil la: insumos-labcentral.