SAFRANIN: CARACTERISTICI, UTILIZARE, TEHNICI, TOXICITATE - CHIMIE - 2025

Safranin este un colorant meriquinoide, numit pentru structura sa chimică având două inele benzenoide și de 2 inele chinoidic, aceasta din urmă fiind cele care fac culoarea roșie.

Se mai numește dimetil safranină sau roșu de bază 2 în forma sa scurtă, deoarece denumirea sa științifică este 3,7-diamino-2,8-dimetil-5-fenil-fenaziniumchloro dimetil safranină și formula chimică este C ₂₀ H ₁₉ N ₄ Cl.

Structura chimică a safraninei care indică inele benzenoide și quinoide / Soluție apoasă de safranină. Sursa: NEUROtiker editat de MSc. Marielsa Gil / LHcheM

Există o variantă numită trimetil-safranină, dar nu există o diferență semnificativă între cele două substanțe.

Safranina este un colorant monocromatic și, în funcție de caracteristicile formulei chimice, este o substanță încărcată pozitiv. Prin urmare, are o afinitate pentru structurile încărcate negativ. Aceste structuri vor fi pătate în roșu.

Această proprietate îi conferă aplicabilitate în multe tehnici histologice de a colora diverse structuri celulare, atât de organisme eucariote, cât și de procariote.

Safranina este utilizată ca colorant de contrast în tehnici importante și cunoscute pentru utilizarea de rutină în bacteriologie. Aceste tehnici sunt: ​​pata Gram-Hucker, pata Schaeffer Fulton pentru spori sau colorarea capsulelor bacteriene, printre altele.

caracteristici

Culoarea șofranului (un condiment obținut din stigmele florii Crocus sativus) a fost inspirația pentru denumirea acestui colorant. Din termenul de șofran provine numele de safranin. Acest lucru se datorează marei asemănări între culoarea șofranului și colorarea pe care o oferă acest colorant.

Safranina este disponibilă sub formă de cristale sau pulbere, ambele prezentări fiind solubile în apă. Colorantul de safranin este inodor. Structuri pete roșii. Structurile care atrag colorantul de safranin sunt numite safranofile.

Safranina din punct de vedere structural este complexă, are două inele benzenoide la capete, iar în centru sunt situate cele două inele quinoide unde se găsește cationul N ⁺ . Centrul structurii este sistemul însărcinat să asigure culoarea. Datorită acestei caracteristici, acest colorant este clasificat în categoria II.

Utilizare

Safranin este utilizat pentru a colora diverse structuri. Subliniază în special celulele Kulchitsky prezente în tractul gastrointestinal, numite și celule enterochromaffin.

Este capabil să coloreze microorganisme aparținând familiei Rickettsiaceae. De asemenea, este utilizat în diferite tehnici, cum ar fi metoda Koster, o modificată folosită pentru a colora bacteriile din genul Brucella.

Pe de altă parte, safranina este folosită în tehnica de colorare a sporilor Schaeffer Fulton și în colorarea Gram-Hucker. În ambele tehnici, safranina funcționează ca un colorant de contrast.

În primul, sporii iau culoarea verde malachit, iar restul structurilor sunt roșii prin safranină. În cea de-a doua, bacteriile Gram negative pierd culoarea cristalului violet în etapa de decolorare, prin urmare, safranina este cea care colorează bacteriile Gram negative în roșu.

În plus, safranina este folosită în bacteriologie pentru a prepara Brucella agar media cu o diluare de safranină 1: 5000. Acest mediu servește la diferențierea speciilor Brucella suis de restul speciilor. Brucella melitensis și Brucella abortus cresc pe acest mediu, dar B. suis este inhibat.

În câmpul agroindustrial, safranina a fost utilizată la 2,25% și diluată 1:10 pentru a colora probele de tulpină de la planta de zahăr.

Această plantă este afectată frecvent de bacteriile Leifsonia xyli subsp. xyli, care dăunează xilemului plantei. Tulpinile pătate sunt evaluate pentru a determina funcția vaselor xilem.

Tehnici în domeniul bacteriologiei

Pata Castañeda pentru colorarea r

Un frotiu de sânge sau de țesut este plasat într-o soluție tampon (tampon fosfat pH 7,6). Se lasă să se usuce spontan și apoi se acoperă cu albastru de metilen timp de 3 minute și se reține cu safranină. Rickettsiae sunt albastre colorate, contrastând cu fundalul roșu.

Pata de koster modificată pentru

Pentru fixare se face un frotiu și se aprinde în bricheta. Ulterior, este acoperit cu un amestec de 2 părți de safranină apoasă saturată cu 3 părți de 1 mol / L soluție KOH, timp de 1 minut. Se efectuează o spălare cu apă distilată și se reține cu 1% albastru carbolic de metilen.

Dacă eșantionul conține bacterii din genul Brucella, acestea vor apărea portocaliu pe fond albastru.

Colorarea capsulelor bacteriene

Un amestec de suspensie bacteriană se face cu cerneală India și se adaugă safranină. Sub microscop, va apărea un halogen roșiatic în jurul fiecărei capsule bacteriene cu fond negru.

Colorarea sporilor

Se face o răspândire cu suspensia bacteriană. Apoi se fixează la căldură. Este acoperit cu 5% verde de malacit, flăcând frecvent până la emiterea de vapori. Procesul se repetă timp de 6-10 minute. În final, se spală cu apă și se reține cu 0,5% safranină timp de 30 de secunde. Bacilii sunt pete roșii și sporii verzi.

Pata Gram-Hucker

Un frotiu este făcut cu suspensie bacteriană și fixat la căldură. Acoperiți diapozitivul cu violet de cristal timp de 1 minut. Apoi lugolul se pune ca soluție mordantă timp de 1 minut. Ulterior, este albit cu alcool acetonic și în cele din urmă contracarat cu safranină timp de 30 de secunde.

Bacteriile Gram pozitive coloreaza albastru violet si bacteriile Gram negative rosii.

Unele laboratoare au încetat să utilizeze tehnica Gram-Hucker pentru a adopta tehnica Gram-Kopeloff modificată. În aceasta din urmă, safranina este înlocuită de fuchsin de bază. Acest lucru se datorează faptului că safranina pătează slab speciile din genurile Legionella, Campylobacter și Brucella.

Tehnici în domeniul histologiei

Colorarea celulelor Kulchitsky (enterochromaffins)

Secțiunile de țesut din tractul gastro-intestinal sunt colorate cu clorură de argint. Este apoi decolorat cu tiosulfat de sodiu și în cele din urmă contracarat cu safranină.

Celulele Kulchitsky se disting prin prezența granulelor maroniu-negricioase.

Pata de osteoartrita

Deoarece safranina are o încărcare pozitivă, se leagă foarte bine de grupurile carboxil și sulfați de glicozaminoglicani. Acestea fac parte din proteoglicanii care alcătuiesc cartilajul articular. În acest sens, la colorarea cu safranină O, este posibil să se identifice dacă există sau nu pierdere de cartilaj.

Pierderea țesutului cartilaginos poate fi măsurată folosind scala Mankin sau, de asemenea, numită scara osteoartritei.

Tehnica este explicată mai jos: secțiunea histologică este imersată într-o tavă cu soluție de hematoxilină de fier Weigert, apoi trecută prin alcool acid și spălată cu apă.

Continuați procesul de colorare imersând foaia în verde rapid, este spălată cu acid acetic și acum este scufundată în safranină O. Pentru a finaliza procesul este deshidratată folosind alcooli la diferite concentrații în ordine crescătoare. Ultima etapă necesită clarificare a probei de xilen sau xilen.

Diapozitivele sunt condiționate cu balsam Canada sau similare pentru a fi observate la microscop.

Cu această tehnică, nucleele sunt pătate de negru, verdele osului și cartilajul în care proteoglicanii se găsesc roșii.

Stain pentru identificarea macroalgei

Pérez și colab., În 2003, au propus o tehnică simplă și ieftină pentru a vopsi macroalge. Probele sunt preparate în secțiuni histologice de parafină. Secțiunile sunt fixate cu 1% glicerină, permițându-le să se usuce complet. Este apoi plasat în xilol pentru a îndepărta parafină.

Secțiunea este rehidratată trecând-o printr-o serie de tăvi care conțin etanol în diferite grade de concentrație (ordine descrescătoare), timp de 2 minute în fiecare.

Ulterior, este colorată timp de 5 minute cu un amestec 3: 1 de safranină 1% cu 1% albastru toluenic, ambele preparate cu 50% etanol. La amestec se adaugă trei picături de acid picric, care acționează ca un mordant.

Apoi este deshidratat trecând din nou prin tăvile de alcool, dar de data aceasta într-un mod ascendent. În cele din urmă, se clătește cu xilol și proba se prepară cu balsam Canada pentru a fi observată.

Toxicitate

Din fericire, safranina este un colorant care nu reprezintă un pericol pentru cei care se ocupă de el. Este un colorant inofensiv, nu este cancerigen și nu este inflamabil.

Contactul direct cu pielea sau cu mucoasa poate provoca o ușoară roșeață în zonă, fără complicații majore. Pentru aceasta, se recomandă spălarea zonei afectate cu multă apă.

Referințe

1. García H. Colorante safranina O. Tehnician în sănătate, 2012; 1 (2): 83-85. Disponibil la: medigraphic.com
2. Gil M. Gram colorare: fundament, materiale, tehnică și utilizări. 2019. Disponibil la adresa: lifeder.com
3. Colorarea sporilor Gil M.: rațiuni, tehnici și utilizări. 2019. Disponibil la adresa: lifeder.com
4. Safranina ". Wikipedia, enciclopedia gratuită. 7 mar 2017, 10:39 UTC. 3 august 2019, 20:49 ro.wikipedia.org
5. Pérez-Cortéz S, Vera B, Sánchez C. Tehnică utilă de colorare în interpretarea anatomică a Gracilariopsis tenuifrons și Gracilaria chilensis (Rhodophyta). Act Bot. Venez. 2003; 26 (2): 237-244. Disponibil pe: scielo.org.
6. Biserica Aleika, Peralta Esther Lilia, Alvarez Elba, Milián J, Matos Madyu. Relația funcționalității vaselor xylem și prezența Leifsonia xyli subsp. xyli. Rev. Protecția Veg. 2007; 22 (1): 65-65. Disponibil la adresa: scielo.sld