Rose Bengal este un test de laborator bazat pe o reacție antigen-anticorp pentru diagnosticul brucelozei. Tehnica permite detectarea anticorpilor specifici împotriva bacteriei Brucella abortus în probele de ser uman. Rezultatul poate fi raportat calitativ sau semi-cantitativ.
Forma calitativă exprimă dacă pacientul este pozitiv sau negativ pentru test, adică dacă există sau nu anticorpi. Între timp, raportul semicantitativ este raportat în UI / ml și indică cantitatea aproximativă de anticorpi prezenți. Trebuie menționat că anticorpii vor fi produși numai dacă pacientul a fost în contact cu microorganismul.
Rose Bengal reacție într-o placă de aglutinare. Sursa: preluată din materialul video https://youtu.be/igAVQ-GiyGY
Datorită marii sale simplități, sensibilității și specificității ridicate, este una dintre tehnicile de seroaglutinare cel mai utilizate în medicină ca test inițial pentru diagnosticul acestei boli.
Unii cercetători au comparat eficacitatea testului Rose Bengal cu alte tehnici, cum ar fi seroaglutinarea (antigene febrile) și au observat că, deși există o corelație bună, au văzut cazuri izolate în care testul antigenului febril a fost negativ și Rose de Flare pozitivă.
Diferența obținută se datora faptului că acești pacienți aveau o subclasă de anticorpi IgG împotriva Brucella abortus cu o capacitate mai bună de legare la pH acid, de aceea puteau reacționa cu reactivul Bengal Rose, dar nu cu cel al antigenelor febrile.
În acest sens, ei au sugerat ca reactivii tehnicii antigenului febril să fie modificați la un pH acid, astfel încât să poată detecta acest tip de caz.
Bază
Reactivul Rose Bengal constă dintr-o suspensie antigenică. Este format din tulpina S99 de Brucella abortus, diluată într-un tampon de lactat acid (pH 3,6), plus fenol și colorant Rose Bengal.
Prin urmare, în eșantion ceea ce se caută sunt anticorpi anti-Brucella, dacă aceștia sunt prezenți vor reacționa cu antigenul reactiv și se va observa o reacție de aglutinare vizibilă macroscopic. Testul detectează fie anticorpi IgM, fie anticorpi IgG.
Aceasta înseamnă că poate detecta boala atât în stadiul acut în care predomină anticorpii IgM, fie în stadiul său cronic în care predomină anticorpii IgG.
Acest lucru reprezintă un avantaj, deoarece crește sensibilitatea testului, dar în același timp este un dezavantaj, deoarece nu face discriminări între o etapă și alta, deoarece reacția cu anticorpii IgM și IgG sunt identice.
Testul trebuie întotdeauna efectuat împreună cu un control negativ și un control pozitiv. Controlul negativ conține ser animal fără anticorpi, iar controlul pozitiv conține ser de origine animală cu 50 UI / ml de anticorpi anti-Brucella.
Utilizare
Bruceloza este o boală gravă care tinde să fie cronică și periculoasă, de aceea este foarte important să fie diagnosticată din timp. Este o zoonoză, iar oamenii pot fi infectați prin contactul direct cu materialul contaminat, persoanele cele mai vulnerabile fiind medicii veterinari și îngrijitorii de animale.
Infecția poate apărea și consumând carne crudă infectată, printre alte forme de infecție.
Această boală atacă local sau sistemic. Forma sistemică este cea mai gravă, deoarece pot fi afectate diverse organe, inclusiv sistemul endotelial al reticulului (ficat, splină, măduva osoasă), pielea (celulită și limfadenopatie), sistemul respirator (pneumonie), sistemul musculo-scheletic (artrită, sacroiliită și spondilită), printre altele.
Testul Rose Bengal este o tehnică foarte utilă pentru efectuarea unui screening inițial, deoarece este foarte ieftin, ușor de utilizat și are o specificitate și o sensibilitate deosebite.
Cazurile de falsuri negative și false pozitive sunt foarte rare și pot apărea la persoane cu titruri de anticorpi foarte scăzute (<25 UI / ml) sau respectiv extrem de ridicate (> 1000 UI / ml).
Proces
materiale
-Rose Kit Bengal
-Plant alb de placă de aglutinare
-50 ul pipetă
-Rotator (opțional)
-Vortex
Tehnică (metodă calitativă)
Trusele comerciale de trandafiri Bengal vin cu reactivii gata de utilizare.
-Timpurați reactivii înainte de a începe să funcționeze.
-Platele de aglutinare au cercuri desenate, fiecare pentru un eșantion diferit. Utilizați 3 cercuri, primul pentru controlul negativ, al doilea pentru eșantion și al treilea pentru controlul pozitiv.
-Așezați o picătură sau 50 ul din controale și proba în cercul corespunzător.
-Mestecați reactivul Rose Bengal folosind un vortex. Plasați o picătură lângă cele plasate anterior.
-Mix cu scobitori din lemn (folosiți unul pentru fiecare epruvetă sau control). Faceți mișcări circulare și răspândiți astfel încât să acoperiți întregul cerc.
Sursa: imagini preluate de pe video: https://youtu.be/igAVQ-GiyGY. Aspect de imagine editat.
-Puneți placa pe un rotator automat la 80 până la 100 rot / min sau rotiți manual timp de 4 minute. Citiți dovada la sfârșitul acestei perioade.
-Verificați că controalele au dat așa cum era de așteptat. Comparați reacția probei de testare cu controalele. Raportați la fel de pozitiv dacă se observă aglutinarea și la fel de negativ dacă nu există aglutinare.
Un test pozitiv indică faptul că pacientul are o cantitate egală sau mai mare de 25 UI / ml de anticorpi anti-Brucella.
Interpretarea unei reacții pozitive (cu aglutinare) și negativă (fără aglutinare). Sursa: Citrulline. Imagine editată.
Tehnică (semi-cantitativă)
Dacă în reacția calitativă eșantionul este puternic pozitiv, acesta poate fi semicantificat. Pentru aceasta, diluțiile duble ale probei sunt făcute cu soluție salină fiziologică. Procedura descrisă anterior se realizează cu fiecare diluție.
Se interpretează, de asemenea, prin observarea macroscopică a aglutinării. Rezultatul va fi titlul celei mai mari diluții în care a fost observat un rezultat pozitiv.
Pentru a calcula valoarea aproximativă a anticorpilor anti-Brucella, se utilizează următoarea formulă:
25 UI / ml x titru de reacție = UI / ml
Exemplu, dacă un pacient din testul semicantitativ testează pozitiv la diluția ½, ¼ și 1/8 și începe să fie negativ de la diluția 1/16 înainte, aceasta înseamnă că pacientul are un titru de 8 .
Aplicând formula:
25 UI / ml x 8 = 200 UI / ml
QA
-Kiturile au o dată de expirare și trebuie respectate. Nu trebuie utilizat dacă reactivul a expirat.
-În timpul utilizării, asigurați-vă că reactivul nu conține particule solide, deoarece acesta este un semn de deteriorare.
-Se păstrează între 2 și 8 ° C.
-Nu înghețați, acest act dăunează iremediabil reactivului.
-Întotdeauna efectuați testul împreună cu controalele negative și pozitive.
-Tehnica tolerează probele de ser cu un anumit grad de lipemie și hemoliză, cu toate acestea nu este recomandată utilizarea unor seruri excesiv de lipemice și hemolizate, ambele condiții modificând rezultatele testului.
-Întotdeauna aduce reactivi la temperatura camerei înainte de a începe analiza.
-Nu interpretați reacțiile care durează mai mult decât timpul recomandat, deoarece acest lucru generează raportul falselor pozitive, deoarece, după un anumit timp, reactivul precipită, simulând o reacție pozitivă.
-Tehnica este 100% sensibilă și are o specificitate de 98%.
-După o semi-cuantificare de 1000 UI / ml există posibilitatea observării unui efect prozonal (fals negativ datorită excesului de anticorpi comparativ cu cantitatea de antigene).
Referințe
- Rubio M, Barrio B și Díaz R. Valoarea testelor Rosa de Bengala, Coombs și contraimunoelectroforeză testează diagnosticul de cazuri de bruceloză umană în care aglutinarea serică este negativă. Catedra de Microbiologie. Serviciul Clinic de Microbiologie. Clinica universitară. Universitatea din Navarra. 406-407. Disponibil la: elsevier.es/es-revista-enfermedades-infecciosas
- "Bruceloză." Wikipedia, enciclopedia gratuită. 6 dec 2019, ora 14:37 UTC. 18 Dec 2019, 18:09 ro.wikipedia.org.
- Laboratoare Monlab. Trandafir Monlab Bengal - test. 2016. Disponibil la adresa: monlab.es/
- Carrillo C, Gotuzzo E. Bruceloza. Rev. Peru. Med. Exp. Sănătate publică 1997; 14 (1): 63-66. Disponibil pe: scielo.org
- Morales-García R, García-Méndez N, Regalado-Jacobo D, López-Merino A, Contreras-Rodríguez A. Urmărirea clinică, serologică și a reacției în lanț a polimerazei unei familii cu bruceloză. Rev. chil. Infectol. 2014; 31 (4): 425-433. Disponibil la adresa: scielo.conicyt.