REACȚIA DE XANTHOPROTEINĂ: JUSTIFICARE, PROCEDURĂ, UTILIZARE - CHIMIE - 2025

Reacția xanthoprotein este o procedură chimică utilizată pentru a determina prezența sau absența aminoacizilor aromatici, cum ar fi tirozina și triptofan, care pot fi sub formă liberă sau constituie proteine solubile, peptide sau polipeptide.

De asemenea, a fost utilizat pentru a detecta substanțe toxice din sânge care conțin o grupă de benzen în structura lor. Acest test este cunoscut și sub numele de reacția de xanthoproteină Becher.

Reacție xanthoproteină pozitivă Sursa: preluată din videoclip: https://youtu.be/GzGMbw5w4Wo

Reacția de xanthoproteină folosește acid azotic concentrat, căldură și un alcalin neutralizant. Dacă soluția se transformă de la galben la portocaliu după neutralizarea reacției, testul este considerat pozitiv. Colorația observată se datorează formării compușilor azotati derivați din nitrificarea grupărilor de benzen.

Dacă trebuie cantificată cantitatea de proteine ​​totale, este necesar să se utilizeze alte metode de determinare a proteinelor, cum ar fi Biuret.

Reacția de xanthoproteină este utilizată mai ales atunci când sunt analizate substanțe a căror compoziție chimică nu este cunoscută. Această reacție este de obicei parte dintr-un set de teste care vor ajuta la determinarea compoziției chimice a unei anumite substanțe sau extract. Acesta este motivul pentru care este utilizat pe scară largă de cercetători.

Pe de altă parte, reacția de xanthoproteină Becher este utilizată pentru a detecta substanțe fenolice și indole în sânge, făcând posibilă prezicerea apariției nefropatiei, înainte de a crește alți parametri ulterior.

Bază

Reacția detectează practic prezența grupării benzenului, atât în ​​aminoacizi, cât și în proteine ​​și peptide. Acidul nitric acționează asupra inelului benzenic al aminoacizilor care îl posedă, formând compuși nitro fenolici.

Reacția are nevoie de căldură pentru a fi realizată, în general, se formează un precipitat care înnegrește mediul, transformându-l lăptos. Precipitatul poate fi alb sau galben. În cele din urmă, necesită o etapă de alcalinizare care accentuează culoarea. Pentru aceasta, se utilizează o bază precum hidroxidul de sodiu 40% sau amoniacul.

Reacția va fi interpretată ca fiind pozitivă dacă se observă o colorare galbenă puternică în timpul procesului de încălzire sau portocaliu închis când reacția se alcalinizează. Aminoacizii pe care îi detectează sunt în principal tirozina și triptofanul.

Reacția de xanthoproteină. Sursa: http://esteroisomeras.blogspot.com/2013/06/caracterizacion-de-proteinas.html

În cazul fenilalaninei, deși este un aminoacid aromatic, nucleul benzenic al acestui aminoacid este greu de nitrat într-o reacție simplă, prin urmare, va emite o reacție negativă sau slabă.

În general, testul cu xanthoproteină poate fi completat cu testul Hopkins-Cole, care este utilizat pentru identificarea specifică a triptofanului. Dacă testul cu xanthoproteină este pozitiv și testul Hopkins-Cole este negativ, este exclusă prezența triptofanului în această soluție, indicând prezența în principal a tirozinei. De asemenea, poate fi completată și cu reacția Millon pentru detectarea tirozinei, printre altele.

Această reacție poate fi utilizată și pe probe de sânge, plasmă sau ser desalbuminat pentru diagnosticul de uremie sau insuficiență renală. În acest caz, ceea ce se caută este detectarea substanțelor toxice (fenolice și indole) produse din putrefacția intestinală.

Aceste substanțe au grupa benzen și, prin urmare, dau o reacție de xanthoproteină pozitivă, deși substanța care reacționează nu este nici un aminoacid și nici o proteină.

Proces

- Reacția de xanthoproteină pentru detectarea aminoacizilor cu grupări aromatice

Puneți 1 ml probă de test într-o eprubetă curată și uscată.

-Adăugați 0,5 ml de acid azotic concentrat.

-Incubați amestecul într-o baie de apă la 70 ° C timp de 2 minute. Pregătiți anterior baia de apă la temperatura menționată.

-La scoaterea tubului din baia de apă se poate observa că soluția a devenit lăptoasă și a luat o anumită culoare alb-gălbui.

-Soluția este răcită prin picurarea apei reci la baza tubului.

-Preparatul este alcalin, prin adăugarea lentă (picătură prin picătură) a unei soluții de hidroxid de sodiu 40% până când se schimbă culoarea.

-Dacă testul este pozitiv, se va forma un inel portocaliu închis la interfața lichidelor.

-Dacă reacția este negativă, nu va exista formare de culori.

- Reacția de xanthoproteină pentru detectarea substanțelor fenolice și indole în sânge

-Dispuneți 5 cc de acid tricloroacetic 20% pe 5 cc de sânge venos, plasmă sau ser, acesta din urmă fiind cel mai indicat. Se amestecă bine și se filtrează.

- 2 cc de filtrat se iau și se amestecă cu 0,5 cc de acid azotic. Apoi se încălzește la fierbere, pentru aceasta tubul este așezat direct peste flacăra mai ușoară timp de 30 de secunde. Se răcește cu apă și se adaugă 1,5% de 33% clorură de sodiu.

Se interpretează astfel:

-Rezultat negativ: culoare gălbuie.

-Rezultat pozitiv (+) galben lămâie.

- (++) galben auriu.

- (+++) galben închis până la maro

Poate fi, de asemenea, interpretat folosind o scală colorimetrică referențială Autenrieth, constând din diferite concentrații de dicromat de potasiu. Aceasta este preparată în 10 diluții din 10 dintr-o soluție stoc 0,03874%. Fiecare tub reprezintă un procent.

Scale de interpretare

Există două scale de interpretare numite vechi și moderne. Valorile normale sunt:

Masă veche: între 75 și 85%

Masă modernă: între 15 și 25%

Dacă culoarea epruvetei este în mijlocul a două tuburi standard, se realizează o medie între cele două măsurători.

Soluția standard de dicromat de potasiu este pregătită după cum urmează: 7,9 ml de 10 N dicromat de potasiu se măsoară și se formează până la 100 ml într-un balon volumetric. Diluțiile sunt urmate așa cum se arată în tabelul colorimetric Autenrieth.

Tabel colorimetric Autenrieth. Sursa: Vásquez A. Reacția de xanthoproteină. Jurnal clinic spaniol. 1949; 35 (5): 326-327. Disponibil la: Elsevier

Utilizare

Utilizarea reacției de xanthoproteină face parte dintr-un set de teste biochimice care ajută la cunoașterea compoziției chimice a unei substanțe necunoscute. Acest test contribuie la analiza chimică a detectării proteinelor care conțin grupe de benzen în structura lor.

Această reacție este utilizată pe scară largă de cercetători în diferite studii asupra substanțelor de interes.

În acest sens, Vásquez-Jorge și colaboratorii au utilizat această reacție și alte pentru a investiga conținutul de proteine ​​din fluidele extrase din stridia de mangrove (Crassostrea rhizophorae).

De asemenea, Rojas și colaboratorii (2009) au utilizat o serie de teste, printre care se numără reacția de xanthoproteină, pentru a analiza gliccomacropeptidele din precipitatele de zer ricotta.

Pe de altă parte, reacția de xanthoproteină Becher a fost modificată de Volhard pentru a fi utilizată în alte scopuri. În acest caz, pentru detectarea substanțelor fenolice și indole care pot crește mult mai devreme (săptămâni sau luni) înainte de creșterea nivelului de uree și azot rezidual în sânge.

Aceste deșeuri toxice sunt formate din putrefacția intestinală a alimentelor.

Aceste substanțe se acumulează în sânge atunci când nu sunt eliminate în mod corect, prin urmare, un test pozitiv de xanthoproteină poate prezice debutul precoce al insuficienței renale corespunzătoare sau a unei stări de uremie.

În funcție de intensitatea culorii, puteți determina cât de avansată este. În acest caz, testul este cantitativ.

La persoanele sănătoase, acest test dă o ușoară culoare galbenă, corespunzătoare nivelurilor normale de triptofan și tirozină care pot fi în sânge.

În timp ce, la pacienții renali, reacția de xanthoproteină este puternic pozitivă datorită prezenței următoarelor substanțe: fenol, indol, paracresol, oxiacide aromatice, printre altele.

Precauții

Acest test trebuie efectuat de profesioniști instruiți. Trebuie luate în considerare toate reglementările biosecurității, deoarece reactivii folosiți sunt acizi și baze corozive.

Dacă din întâmplare câteva picături de acid azotic cad pe piele sau pe unghii, acestea se vor îngălbeni, deoarece ambele structuri conțin proteine. În plus, pe piele și mucoase provoacă arsuri severe.

Dacă apare contactul cu pielea, protocolul care trebuie urmat ar trebui să fie spălarea imediată a zonei cu săpun și apă timp de aproximativ 20 de minute.

Dacă stropește în ochi, trebuie spălat cu multă apă proaspătă, încercând să menții ochii deschiși.

Referințe

1. „Reacția de Xanthoproteină” Wikipedia, Enciclopedia liberă. 2 sept. 2019, ora 17:49 UTC. 21 Oct 2019, 20:31 wikipedia.org/
2. Vásquez-Jorge Y, Guerra-Molina L, Quintana-Tamayo J, Ramírez-Arzuaga J, Fernando-Ballesteros R, Vásquez-Jorge Y. Caracterizarea fizico-chimică și conținutul proteic al extractelor fluide din stridia de mangrove (Crassostrea rhizophorae). Rev Cubana de Chimică, 2014; 26 (1): 66-74. Disponibil în Redalyc.
3. Rojas E, Valbuena E, Torres G, García A, Piñero M, Galindo L. Izolarea și performanța GMP prin precipitarea zerului cu acid tricloroacetic. Ciente. (Maracaibo) 2009; 19 (3): 295-302. Disponibil la: ve.scielo.
4. Vásquez A. Reacția de xanthoproteină. Jurnal clinic spaniol. 1949; 35 (5): 326-327. Disponibil la: Elsevier
5. Gálvez I, Gárate O. Reacțiile lui Becher și Andrewes în chirurgia urinară. Serviciul de urologie al Spitalului spaniol. Jurnal argentinian de urologie 395-404