ORCEINA: FUNDAMENT ȘI PREGĂTIRE - CHIMIE - 2025

Orceína este o culoare naturală violet, extrase din diverse lichenilor ca Orchilla sau archill, fruticose lichen Rocella tinctoria și Lecanora Parella principal. Rocella tinctoria se găsește pe continentul african și american, deși poate fi înlocuită cu alte specii situate în Europa.

Această pată a fost utilizată pe scară largă în studiile citogenetice încă din cele mai vechi timpuri. În acest sens, preparatul de orceină care include acid acetic a fost introdus de LaCourt în 1941, motiv pentru care a fost numit inițial tehnica LaCourt.

Structura chimică a soluției de orceină și orceină. Sursa: Wikipedia.org/ Oguenther la de.wikipedia (Dr. Guenther)

De asemenea, datorită simplității și costului redus, a fost utilizat pentru fabricarea litmului (o pată extrasă din licheni) și în studii histologice (colorarea celulelor și țesuturilor).

Mai multe studii au utilizat această colorare combinată cu alte substanțe chimice, cum ar fi picrocarminatul de amoniac și acidul acetic, pentru a colora fibrele elastice și respectiv cromozomii. În prezent, orceina continuă să fie utilizată în studiile citogenetice asupra animalelor și plantelor.

Recent, Silva și colab. 2017 a folosit cu succes această pată pentru a observa diferitele modificări care apar în fibrele elastice ale pielii degetului mare la adulții vârstnici din Chile. Acest studiu a relevat modul în care fibrele degetului mare se modifică odată cu înaintarea în vârstă.

În acest sens, fibrele elastice au fost observate ca fiind de culoare maro-negru la persoanele mai mari de 80 de ani; în timp ce la cei mai tineri (de la 60 de ani) sunt văzuți ca maronii roșiatice. Citoplasma și alte structuri celulare devin verzuie-gălbui.

Acest lucru a permis coroborarea prezenței și stării fibrelor elastice, în ceea ce privește dispoziția, cantitatea și integritatea acestora. Pe de altă parte, s-a indicat, de asemenea, că orceina este de mare ajutor în identificarea anevrismelor și diagnosticarea arteritei, printre alte afecțiuni.

Bază

Orceina face parte din grupul de coloranți oxazin, iar colorarea se bazează pe afinitatea sa pentru ADN. Colorantul se leagă de sarcina negativă a acestei molecule, reprezentată de grupul fosfați. De aceea, cromozomii sunt pete de culoare purpurie.

Cu toate acestea, restul structurilor celulelor iau o culoare diferită. Mai exact, în cazul fibrelor elastice, acestea sunt colorate maroniu roșiatic, nuclee celulare de la albastru la purpuriu închis, în timp ce colagenul nu se colorează.

Din acest motiv, orceina este folosită pentru a colora cromatina și pentru a diferenția sexul în unele specii de muște. De asemenea, pot fi colorate nucleele și unele incluziuni hepatice produse de antigenele hepatitei B.

Soluțiile de orceină au funcții specifice în colorare. Orceina A are funcția de a înmuia membranele celulare, de a provoca moartea acestora și de a paraliza procesul de divizare a acestora. Între timp, orceina B este responsabilă de completarea colorației prin aderența sa la cromozomi.

preparare

Soluție de aceto-orceină 1%

Pentru a prepara o soluție de aceto-orceină cu 1%, se dizolvă 2 grame de orceină în 45 ml de acid acetic glacial, de preferință fierbinte, și la temperatura camerei se adaugă 55 ml de apă distilată.

Apoi, este amestecat constant pentru a omogeniza soluția, pentru a o lăsa mai târziu până se răcește. În cele din urmă, se păstrează la 4ºC în borcane întunecate. Acest preparat a fost utilizat de Flores 2012, pentru a observa fazele de maturare ale ovocitelor de vacă.

În acest caz, de exemplu, soluția de aceto-orceină este plasată pe țesutul fixat anterior în acid acetic-etanol timp de 24 de ore. Acest proces de colorare se realizează timp de 30 de minute, iar țesutul este decolorat ulterior.

De asemenea, poate fi utilizat pentru identificarea organelelor în țesuturile multicelulare. În acest caz, un frotiu al mucoasei bucale este colorat cu o picătură a soluției de aceto-orceină, capacul este plasat pe lamelă și nucleul celulei cu substructurile sale poate fi observat imediat.

Soluție lacto-proponică orceină 1%

În plus, orceina poate fi preparată cu alte substanțe chimice, cum ar fi acidul lactic și acidul propionic. Pentru a face acest lucru, un gram de orceină este dizolvat într-o soluție preamestecată la temperatura camerei de 23 ml acid lactic și 23 ml acid propionic; formând volumul cu apă distilată până la 100 ml.

Cu această soluție lacto-propionică de orceină este posibilă observarea diferitelor faze ale diviziunii meiotice a celulelor vegetale. În acest caz, proba pre-fixată și hidrolizată este plasată timp de 15 minute în soluția de orceină lacto-propionică și apoi țesutul este răspândit pe lamelele microscopului.

În studiul Duque 2016 privind cromozomii poligenici, el a folosit un preparat de 2 grame de orceină diluată în acid acetic și 85% acid lactic, diluând cu o soluție de acid acetic 65%. În cele din urmă, s-a uitat la cromozomii din glandele salivare din Drosophila melanogaster.

Orceina A și Orcein B

Este important de menționat că, în funcție de eșantion și ce trebuie evaluat, se prepară soluția de orceină adecvată. Astfel, de exemplu, la soluția de orceină A se adaugă acid clorhidric 1 N pentru a observa celulele divizante.

În timp ce soluția de orceină B este dizolvată în acid acetic 45%. Această tehnică este o metodă de colorare prescurtată și este utilizată în general ca adjuvant la colorarea structurilor cromozomiale.

Gânduri finale

Încă din secole trecute, lichenele precum Lecanora, Parmelia și Umbilicaria pot fi găsite în țări ale continentului american, cum ar fi Argentina, care sunt surse mari de orceină. De asemenea, zone europene, cum ar fi Insulele Canare, au fost la acea vreme mari producători de orchilă.

Aceasta a fost exportată în alte orașe ale aceluiași continent, cum ar fi Genova și țări precum Anglia, în timp ce Olanda a monopolizat fabricarea litmului din orchilă. Prin urmare, acest lichen a fost mai târziu redus până a fost pe cale să dispară.

Aceasta a dus la înlocuirea orhilelor cu alte plante cu proprietăți de vopsea. Cu toate acestea, apariția coloranților sintetici a contribuit la încetarea comerțului cu acest lichen de sursă de orceină.

Acest lucru a fost posibil grație lui Cocq, care în 1812 a descris sinteza de orceină, știind atunci că este sintetizat de un compus fenolic numit orcinol. Cu toate acestea, în ciuda acestui fapt, orceina naturală este încă cea preferată astăzi.

Aceasta se poate datora faptului că orcinolul este un compus cu miros foarte puternic, iar expunerea sa prelungită ar putea avea riscuri pentru sănătate, cum ar fi pierderea capacității de a detecta mirosurile. Aceste daune aduse hipofizei pot merge de la temporar la permanent cu cât expunerea este mai mare.

Referințe

1. Ortega L, García R, Morales C. „Aplicarea lacezei produse de ciuperci pentru degradarea coloranților microbiologici (orceină și cristal violet)." Tinerii în știință 2. 2015; 633-637. Disponibil la adresa: jovenesenlaciencia.ugto.mx.
2. Barcat J. Orceína și fibre elastice. Medicină (Buenos Aires) 2003; 63: 453-456. Disponibil la: Medicinabuenosaires.com.
3. Silva J, Rojas M, Araya C, Villagra F. Caracteristici istologice ale pielii feței zburătoare a degetului mare la persoanele chiliene cu decolorarea Dactilogramei. J. Morphol. 2017; 35 (3): 1107-1113. Disponibil la adresa: scielo.conicyt.
4. Orrillo M, Merideth B. „Biologia reproducerii cartofului și citogenetica.” Centrul Internațional al Cartofului (CIP). Manual tehnic. Disponibil la adresa: research.cip.cgiar.org/
5. Flores F. „Colecția, cultura și maturizarea in vitro a ovocitelor de vaci (bos taurus) în zonele înalte ale Boliviei." . Universitatea Națională din Altiplano, Puno-Peru; 2012.Disponibil la: repositorio.unap.edu.pe.
6. Duque C. Cromozomii poltenici: o privire asupra fenomenului endoreduplicării. Universitatea Națională din Columbia, Medellín; 2016. Disponibil la: edu.
7. Camarena F. Biologie celulară și moleculară. Manual de practică. Universitatea Autonomă din Baja California. 2017. Disponibil la adresa: pez.ens.uabc.mx.
8. FAO / AIEA. 2018. Manual pentru diferențierea Anastrepha ludens (Loew) sălbatice și crescute de la tulpina normală („bi-sexuală”) și de tulpina sexuală genetic (Tapachula-7), iradiată și neirradiată. Guillen Aguilar JC, López Muñoz L, López Villalobos EF și Soto García DN Organizația pentru Alimentație și Agricultură a Organizației Națiunilor Unite. Roma, Italia, 95 pp.
9. Orceină. (2018, 30 noiembrie). Wikipedia, enciclopedia gratuită. Data consultării: 03:38, 31 iulie 2019 es.wikipedia.org.
10. Merck Millipore. (2018, 16 iulie). Microscopie Orcein pentru microscopie Certistain. Disponibil la: merckmillipore.com