SIM MEDIU: FUNDAMENT, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Mediul SIM este un agar semisolid și diferențial, special conceput pentru a ajuta la identificarea unor bacterii, în special Enterobacteriaceae. Este compus din tripteină, peptonă, sulfat de fier, sulfat de amoniu, tiosulfat de sodiu și agar.

Acest mediu permite executarea a trei teste importante: producerea de sulfură de hidrogen (H ₂ S), formarea de indol și motilitate, de unde și acronimul SIM. Datorită utilității sale mari, nu poate lipsi într-un laborator de bacteriologie.

A. Mediu SIM comercial B. SIM H2S (-), Indole (-) și Motility (+) Test și SIM H2S (+), Indole (-), Motility (+) Test. Sursa: A. Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil B. Mfloayza

Spre deosebire de alte medii, acesta trebuie să fie semi-solid pentru a putea detecta capacitatea de mișcare a unor bacterii. În acest sens, acest test funcționează foarte bine pentru Enterobacteriaceae, dar nu și în tije Gram negative care nu fermentează, unde este de preferat să se utilizeze alte metode, cum ar fi caderea pandantivului.

Mediul SIM permite să distingă anumite proprietăți specifice care caracterizează unele bacterii în raport cu altele. De exemplu, Escherichia coli se distinge prin faptul că este H ₂ S (-), Indole (+) și motilitate (+), în timp ce Proteus mirabilis este H ₂ S (+), indol (-), motilitate (+).

Bază

Este un mediu de cultură care este considerat diferențial, deoarece utilizarea sa distinge între microorganisme capabile să producă hidrogen sulfurat de cele care nu; le evidențiază, de asemenea, pe cele care se formează indole de triptofan de cele care nu, și, în cele din urmă, diferențiază bacteriile motile de cele imobile.

Sursa de putere

Ca orice mediu de cultură, are elemente care furnizează nutrienții necesari, astfel încât microorganismele neexigente să se poată dezvolta. Aceste elemente sunt reprezentate de peptone și triptein.

Dezvoltarea microorganismului în mediu este esențială pentru a putea observa prezența sau absența caracteristicilor pe care le evaluează acest mediu.

Producția de hidrogen sulfurat

Litera S a acronimului SIM se referă la producerea de sulfură de hidrogen (H ₂ S). Bacteriile capabile să formeze hidrogen sulfurat vor prelua sulful din tiosulfatul de sodiu.

Odată H ₂ este format S -colourless gaz-, reacționează cu sarea de fier prezentă în mediu, formând sulfură feroasă, vizibilă în mod clar (precipitat negru). Bacteriile care nu formează H ₂ S, lasă mediu de culoarea inițială (bej).

Prezența precipitatului negru poate împiedica interpretarea motilității. Cu toate acestea, majoritatea H ₂ S- producând Enterobacteriaceae sunt cunoscute a fi pozitiv imobili, cum ar fi Salmonella, Proteus și Citrobacter. Mai mult, precipitatul negru care acoperă aproape întregul mediu sugerează motilitate pozitivă.

Formarea indolilor

A doua literă a acronimului SIM este „I”, care reprezintă formarea de indol.

În acest sens, tripteina, pe lângă faptul că este o sursă de nutrienți, îndeplinește o altă funcție fundamentală. Această peptonă este bogată într-un aminoacid numit triptofan, prin urmare, poate prezenta bacterii care produc triptofanază.

Această enzimă este responsabilă de clivarea triptofanului aminoacid, cu formarea în consecință a indolului (substanță incoloră), acidului piruvic și amoniu.

De aceea, pentru a arăta această reacție, este necesară adăugarea unei substanțe revelatoare (reactivul lui Ehrlich sau reactivul lui Kovac). Fiecare reacționează cu indol, formând o substanță în formă de inel roșu-fuchsia pe suprafața agarului. Dacă apare inelul fuchsia, testul indol este interpretat ca pozitiv.

Bacteriile care nu posedă această enzimă nu vor forma inelul și este interpretat ca un test indol negativ.

Este important să rețineți că testul indol ar trebui să fie ultimul interpretat, deoarece, odată adăugat reactivul, mediul devine tulbure, ceea ce face dificilă vizualizarea motilității.

motilității

În sfârșit, litera "M" a cuvântului SIM înseamnă motilitate. Pentru a evalua motilitatea, acest mediu este semi-solid strategic, deoarece această caracteristică este esențială pentru a putea observa dacă există sau nu mișcare bacteriană. Bacteriile care posedă flagelele sunt cele care dau acest test pozitiv.

Un test pozitiv va fi evident atunci când se observă turbiditate, atât în ​​inoculul inițial, cât și în jurul acesteia. Întrucât, bacteriile nemotile se dezvoltă numai pe calea inoculului inițial.

preparare

SIM medie

Se cântărește 30 g de mediu deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată. Amestecul este lăsat să stea 5 minute și apoi încălzit la fierbere, amestecând frecvent până la dizolvarea completă.

Distribuie amestecul în eprubete cu capace de bumbac și autoclav la 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți raftul de tub din autoclav și lăsați-l să se solidifice într-o poziție verticală, astfel încât mediul să aibă forma unui bloc.

Pentru conservarea sa se păstrează la frigider până la utilizarea sa. Mediul preparat trebuie să aibă un pH final de 7,3 ± 0,2.

În momentul inoculării mediului, acesta trebuie să fie la temperatura camerei. Culoarea mijlocie este bej.

Reactivul lui Kovac

Măsurați 150 ml de amil sau izoamil sau alcool butilic. (Folosiți una dintre cele trei menționate).

Se dizolvă 10 g de p-dimetilaminobenzaldehidă. Apoi adăugați încet 50 ml de acid clorhidric concentrat.

Reactivul gata de utilizare este incolor sau galben deschis. Trebuie păstrat într-o sticlă de chihlimbar și păstrat la frigider. Nu folosiți dacă devine maro închis; asta indică faptul că este deteriorat. Acest reactiv este preferat atunci când vine vorba de Enterobacteriaceae.

Reactivul lui Erlich

Se cântăresc 2 g de p-dimetilaminobenzaldehidă și se dizolvă în 190 ml alcool etilic absolut și se amestecă lent cu 40 ml acid clorhidric concentrat. Păstrați în același mod reactivul Kovac. Reactivul Ehrlich este utilizat cel mai mult pentru bacteriile nefermentante și anaerobe.

Aplicații

Mediul SIM este foarte utilizat în laboratoarele de bacteriologie. Avantajul său este că trei caracteristici esențiale pot fi observate în același tub în identificarea Enterobacteriaceae.

însămânțat

Modul corect de a semăna acest mediu este folosind acul, cu care o parte din colonia pură de studiat este luată și introdusă vertical în centrul mediului. Trebuie efectuată o singură lună. Puncția nu trebuie să ajungă la partea inferioară a tubului, lucrul corect este să acopere doar două treimi din adâncime.

Repetarea inoculului nu este recomandată, deoarece acest lucru poate duce la interpretări false ale motilității pozitive. Mediul inoculat este incubat aerob la 37 ° C timp de 24 de ore.

După trecerea timpului, se observă dacă există sau nu a fost producerea de H ₂ S și motilitatea este citită. În sfârșit, se dezvăluie indolul, adăugând 3 - 4 picături din reactivul Ehrlich sau Kovac, amestecă ușor și interpretează.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

Ca un control de sterilitate, unul sau două tuburi sunt incubate fără inoculare într-un cuptor la 37 ° C timp de 24 de ore. Este de așteptat ca după acest timp să nu existe creștere sau schimbare de culoare.

Ca control al calității, pot fi utilizate tulpini certificate cunoscute, precum: Escherichia coli ATCC 25922, Enterobacter aerogenes ATCC 13048, Klebsiella pneumoniae ATCC 13883, Salmonella typhimurium ATCC 14028, Shigella sonne ATCC 29930, Proteus vulgaris ATCC 13315.

Rezultatele scontate sunt: ​​Escherichia coli H ₂ S motilitate negativă, indolă și pozitivă, Enterobacter aerogenes doar motilitate pozitivă, Salmonella typhimurium H ₂ S și ​​motilitate pozitivă, cu indol negativ. Proteus vulgaris este pozitiv, în timp ce Klebsiella pneumoniae și Shigella sunt toate negative.

limitări

-Unele tulpini de Morganella morganii, printre alte tulpini, pot produce un pigment maroniu în acest mediu datorită producerii de melanină, acest lucru nu trebuie confundat cu precipitatul de sulfură feroasă. La profesioniștii fără experiență, această situație poate genera falsuri pozitive în interpretarea testului H ₂ S.

-Bacteriile aerobe stricte vor crește doar pe suprafața tubului, ceea ce face dificilă interpretarea motilității.

Referințe

1. Laboratoare BD. BBL SIM Mediu. 2008. Disponibil la adresa: bd.com
2. Laboratoare Neogen. SIM mediu. Disponibil la: foodFety
3. Difco Francisco Soria Melguizo. SIM mediu. 2009. Disponibil la: http://f-soria.es
4. Laboratorul Brizuela-Lab. SIM medie. Disponibil la: .brizuela-lab.com
5. Laboratoarele Britannia. SIM medie. 2015. Disponibil la adresa: Studyres.es/doc
6. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.