MEDIO MIO: FUNDAMENT, PREGĂTIRE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Mediul MIO este un test biochimic utilizat pentru a ajuta la identificarea speciilor de bacterii aparținând familiei Enterobacteriaceae. Este destul de hrănitor și este format din glucoză, extract de drojdie, peptonă, tripteină, clorhidrat de L-ornitină, violet bromocresol și agar.

Sensul acronimului său (MIO) descrie fiecare dintre parametrii care pot fi observați în acest mediu; motilitate, indol și ornitină. Motilitatea este capacitatea microorganismului de a se deplasa datorită prezenței flagelelor. Pentru ca această proprietate să fie respectată, consistența mediului trebuie să fie semisolidă, astfel încât preparatul conține mai puțin agar.

Schiță de interpretare a rezultatelor în mediu MIO. Sursa: Pregătit de autor MSc. Marielsa gil

Producția de indol arată prezența enzimei triptofanază care acționează asupra aminoacidului triptofan, fiind necesară utilizarea unui reactiv revelator pentru a face vizibilă producerea de indol.

În cele din urmă, ornitina determină dacă bacteria este capabilă să decarboxileze aminoacidul, adică dacă are enzima orinitină decarboxilază.

Bază

Peptonă, extract de drojdie și tripteină

Aceste elemente contribuie la puterea nutrițională a acestui mediu. Ele servesc ca sursă de nutrienți și aminoacizi esențiali pentru dezvoltarea bacteriilor.

În plus, tripteina este o sursă de triptofan pentru a arăta prezența enzimei triptofanază, care degradează triptofanul prin dezaminare reductivă, eliberând indol, acid piruvic, amoniac și energie.

Indolul este incolor, de aceea prezența sa este dezvăluită prin adăugarea a cinci picături de reactiv al lui Ehrlich sau Kovacs, ambele cu p-dimetilaminobenzaldehidă.

Grupa aldehidă a acestui compus reacționează cu indolul, generând un produs în formă de inel roșu fuchsia pe suprafața agarului.

Orice urmă de culoare trebuie considerată un test pozitiv. Dovada trebuie citită imediat, deoarece în timp culoarea se degradează.

Mai mult, acest test trebuie dezvăluit după ce rezultatele motilității și decarboxilării ornitinei au fost observate.

Interpretare

Test pozitiv: formarea unui inel roșu fuchsia când se adaugă picături de reactiv Kovacs.

Test negativ: nu se formează inel.

motilității

Capacitatea bacteriilor de a se deplasa va fi evidențiată dacă se observă un mediu tulbure sau dacă există o linie de creștere groasă care se extinde în jurul inoculării inițiale.

Un test negativ de motilitate va fi evidențiat prin observarea unei linii subțiri de creștere, iar tot ce se află în jurul său va fi fără creștere.

Este important ca motilitatea să fie citită înainte ca indolul să fie dezvăluit, deoarece adăugarea reactivului se întinde pe întregul mediu.

În bacteriile mobile, dar cu creștere lentă, este dificil să-și demonstreze motilitatea cu acest mediu. În acest caz, este recomandat să folosiți alte teste sau metode, cum ar fi motilitatea medie sau metoda cu scădere în curs.

Glucoză

Glucoza este carbohidratul fermentabil care, pe lângă furnizarea de energie, acidifică mediul înconjurător, o condiție necesară pentru decarboxilarea ornitinei aminoacide să apară.

Fermentarea glucozei trebuie să aibă loc întotdeauna, pornind de la principiul că toate bacteriile aparținând familiei Enterobacteriaceae fermentează glucoza.

L-Ornitina

În cazul în care bacteriile produc enzima ornitină decarboxilază, aceasta poate acționa odată ce mediul a fost acidulat prin fermentarea glucozei.

Enzima ornitină decarboxilază acționează asupra grupei carboxil a aminoacidului producând o amină numită putresină care alcalinizează din nou mediul.

Acest test ar trebui citit după 24 de ore de incubare, deoarece dacă încercați să citiți înainte puteți interpreta greșit testul cu un fals fals.

Trebuie amintit că prima reacție care are loc este fermentarea glucozei, deci mediul devine galben într-o fază inițială (primele 10-12 ore). Dacă ulterior apare decarboxilarea ornitinei, mediul va deveni purpuriu.

Este important să se interpreteze testul de decarboxilare cu ornitină înainte de a dezvălui indol, deoarece adăugarea reactivului Kovacs schimbă culoarea mediului.

Interpretare

Test negativ: galben de culoare medie sau cu fundal galben.

Test pozitiv: mediu complet violet.

Indicator PH

În acest caz, se folosește purpura bromocresol; cel însărcinat să dezvăluie atunci când există o modificare a pH-ului în mediu. După acidifiere, indicatorul devine galben, iar după alcalinizare, devine violet.

Semănarea și dezvoltarea tehnicii

Pentru semănatul mediului MIO, se folosește o buclă dreaptă sau un ac și cu el se colectează o porțiune din colonia care trebuie studiată.

O puncție profundă se face în mijlocul MIO în linie dreaptă. Nu este recomandabil să se efectueze dubla puncție, deoarece poate oferi o imagine falsă a motilității dacă perforațiile nu sunt efectuate în același loc.

Se incubează timp de 24 până la 48 de ore la 37 ° C în aerobioză. Priviți rezultatele în această ordine: motilitatea, decarboxilarea ornitinei și, în cele din urmă, dezvăluiți indol.

Este indicat să îndepărtați aseptic 2 ml de mediu, să-l transferați într-un tub steril și să efectuați testul indole acolo, astfel încât, dacă este negativ, restul tubului original poate fi incubat pentru încă 24 de ore, pentru a revela din nou indolul.

Dezvoltarea indolului se realizează după cum urmează: 3 până la 5 picături de reactiv Kovacs sunt adăugate la mediu MIO și agitate puternic. Se observă dacă apare sau nu un inel roșu-fuchsia.

preparare

Mediu MIO

Se cântăresc 31 g de mediu MIO și se dizolvă într-un litru de apă distilată.

Se încălzește până când amestecul fierbe timp de un minut, agitându-se frecvent până când agarul este dizolvat complet. Distribuie 4 ml de mediu în epruvete de 13/100 cu capace de bumbac.

Sterilizați în autoclave la 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți din autoclav și lăsați să stea drept într-un suport, astfel încât să se formeze un bloc semi-solid.

Păstrați la frigider 2-8 ° C. Lăsați-l să se încălzească înainte de a semăna tulpina bacteriană.

Culoarea mediului deshidratat este bej, iar culoarea mediului preparat ușor pur opalescent.

PH-ul final al mediului preparat este de 6,5 ± 0,2

Mediul devine galben la pH acid și este purpuriu la pH alcalin.

Reactiv Kovacs (Indole Test Developer)

Acest reactiv este pregătit după cum urmează:

Se măsoară 150 ml de amil, izoamil sau alcool butilic (oricare dintre cele trei). În ea se dizolvă 10 g de p-dimetilaminobenzaldehidă. Ulterior se adaugă încet 50 ml acid clorhidric concentrat.

Reactivul preparat este incolor sau galben deschis. Trebuie păstrat în flacon de chihlimbar și păstrat la frigider. O culoare maro închis arată deteriorarea sa.

De asemenea, reactivul Kovacs poate fi înlocuit cu reactivul Ehrlich. Acesta din urmă, fiind mai sensibil, este preferat să dezvăluie indol în bacteriile care îl produc în cantități minime, cum ar fi în unele tije Gram-negative ne fermentante și anumite anaerobe.

Utilizare

Acest mediu este un test care completează o baterie de teste biochimice pentru identificarea bacteriilor aparținând familiei Enterobacteriaceae.

Datele de decarboxilare ale ornitinei servesc la diferențierea Shigella sonnei, care testează pozitiv, de la Shigella boydii, Shigella flexneri și S. dysenterieae, care testează negativ.

De asemenea, diferențiază genul Klebsiella, care se dovedește negativ, de genul Enterobacter, unde majoritatea speciilor sale sunt pozitive.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

QA

De fiecare dată când se prepară un lot de mediu MIO, se poate efectua un test de control. Pentru aceasta se folosesc tulpini cunoscute sau certificate pentru a observa comportamentul mediului.

Tulpinile care pot fi utilizate sunt Escherichia coli, Morganella morganii, Klebsiella pneumoniae, Enterobacter aerogenes și Proteus mirabilis.

Rezultatele așteptate sunt E. coli și M. morganii. Dan M: +, I: + și O: +.

Klebsiella pneumoniae este totul negativ (M: -, I: -, O :-). Proteus mirabilis și Enterobacter aerogen dau M: + I: - și O: +.

Referințe

1. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratoarele Britannia. MIO Medio 2015. Disponibil la: britanialab.com
5. Laboratoare BD. BBL Motility Indole Ornithine (MIO) Mediu. 2007. Disponibil la adresa: bd.com
6. Laboratoarele Valtek. Motivitate medie MIO, Indol, Ornitină. 2010. Disponibil la adresa: andinamedica.com