BULION DE UREE: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Bulionul uree este un mediu de cultură lichid, utilizat pentru a detecta prezența enzimei ureazei în anumite microorganisme. Ureza este o enzimă microbiană care este produsă în mod constitutiv, adică este sintetizată indiferent dacă este sau nu substratul pe care acționează.

Funcția ureazei este legată de descompunerea compușilor organici. Nu toate microorganismele sunt capabile să sintetizeze această enzimă, prin urmare, determinarea acesteia în laborator permite identificarea anumitor tulpini bacteriene și chiar diferențierea între speciile din același gen.

Test negativ de uree pozitiv. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

Există două tipuri de test de uree: Stuart și Christensen. Ele diferă prin compoziție și sensibilitate. Primul este special pentru a arăta o cantitate mare de urare produsă de speciile din genul Proteus.

Al doilea este mai sensibil și poate detecta cantități mici de urare generată târziu de alte genuri bacteriene, precum Klebsiella, Enterobacter, Staphylococcus, Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus, Helicobacter și Mycobacterium.

Bulionul de uree Stuart este compus din uree, clorură de sodiu, fosfat dipotazic, fosfat monopotasiu, extract de drojdie, roșu de fenol și apă distilată.

Întrucât, bulionul sau agarul Christensen este compus din peptone, clorură de sodiu, fosfat monopotasiu, glucoză, uree, roșu fenol, apă distilată și agar-agar. Acesta din urmă numai dacă este mediul solid.

Bază

Enzima urează hidrolizează uree pentru a forma dioxid de carbon, apă și două molecule de amoniac. Acești compuși reacționează formând produsul final numit carbonat de amoniu.

Bulionul de Uree Stuart

Bulionul de uree Stuart este mai tamponat cu un pH de 6,8. Prin urmare, microorganismul trebuie să poată forma cantități mari de amoniac pentru a deveni roșu fenol. PH-ul ar trebui să crească peste 8.

Prin urmare, bulionul de uree Stuart este selectiv pentru speciile Proteus, dând rezultate pozitive în 24 până la 48 de ore de la incubare și nu este eficient pentru bacteriile care produc cantități mici de uree sau care hidrolizează lent uree.

Acest lucru se datorează faptului că speciile Proteus sunt capabile să utilizeze uree ca sursă de azot. În schimb, alte bacterii producătoare de ureeze au nevoie de o sursă suplimentară.

Cu toate acestea, Pérez și colab. (2002) a stabilit că bulionul de uree Stuart a fost la fel de eficient ca agarul de uree al lui Christensen pentru determinarea ureazei în tulpinile de drojdie ale genurilor Candida, Cryptococcus, Rhodotorula, Trichosporon și Saccharomyces.

Autorii studiului susțin că au ajuns la un acord de 100% cu ambele mass-media (Stuart și Christensen) atunci când au incubat timp de 24 și 48 de ore; cu excepția faptului că tulpinile care au reușit să transforme media într-o culoare roz-fuchsia puternică au fost considerate pozitive.

Această clarificare este necesară, întrucât Lodder (1970) a afirmat că aproape toate drojdiile reușesc să transforme tegumentul de Christensen urea agar în roz pal. Acest lucru se datorează faptului că pot hidroliza uree în cantități minime și formarea de amine prin decarboxilarea oxidativă a aminoacizilor la suprafață. Aceasta nu trebuie interpretată ca fiind pozitivă.

Urea Agar sau bulionul lui Christensen

Bulionul de uree sau agar Christensen este mai puțin tamponat, putând detecta cantități mici de amoniac. Mai mult, acest mediu este îmbogățit cu peptone și glucoză. Acești compuși determină creșterea altor microorganisme producătoare de uree care nu cresc în bulionul Stuart.

De asemenea, testul Christensen uree oferă rezultate mai rapide, în special pentru Proteus, putând da puternic pozitiv în doar 30 de minute ca timp minim și până la 6 ore ca timp maxim.

Restul microorganismelor producătoare de urare reușesc să transforme ușor culoarea mediului după 6 ore și puternic după 24, 48, 72 de ore sau mai mult, ba chiar unele tulpini pot da reacții slabe după 5 sau 6 zile.

Interpretarea ambelor medii (Stuart și Christensen)

Mediul are culoare galben-portocaliu inițial și o reacție pozitivă va transforma culoarea mediului spre roz-fuchsia. Intensitatea culorii este direct proporțională cu cantitatea de amoniac produsă.

O reacție negativă va lăsa mediul de culoare originală, cu excepția drojdiilor, care pot deveni roz pal pe mediul de agă de uree Christensen.

preparare

Bulionul de Uree Stuart

Cântărește gramele necesare conform indicațiilor companiei comerciale. Se dizolvă în apă distilată de preferință sterilă. Nu folosiți căldura pentru a se dizolva, deoarece urea este sensibilă la căldură.

Filtrarea membranelor este utilizată pentru sterilizare. Pentru aceasta, se folosește un filtru Millipore cu pori cu diametrul de 0,45 p. Nu folosiți o autoclavă. După filtrarea soluției, aceasta este distribuită în tuburi sterile. Pentru a obține rezultate fiabile, acesta trebuie transferat între 1,5 ml ca o cantitate minimă și 3 ml ca o cantitate maximă pe tub.

Păstrați la frigider și încălziți înainte de utilizare.

Dacă metoda de filtrare nu este disponibilă, mediul trebuie utilizat imediat pentru a obține rezultate fiabile.

Un alt mod de a pregăti bulionul de uree Stuart este următorul:

Unele case comerciale vând mediul de bază pentru testul ureei, fără a include urea.

Cantitatea indicată de societatea comercială este cântărită. Se dizolvă în apă distilată și se sterilizează în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Se lasă să se odihnească puțin și când mediul este cald, se adaugă 100 ml de soluție de uree preparată la 20% și sterilizată prin filtrare.

Este distribuit în tuburi sterile, așa cum s-a descris anterior.

Urea Agar sau bulionul lui Christensen

-Prepararea soluției de uree

Se cântărește 29 g de uree deshidratată și se dizolvă în 100 ml apă distilată. Folosiți metoda de filtrare pentru a steriliza. Nu vă autoclavează.

-Uar de bază agar

Se dizolvă 24 g de agar bază deshidratată în 950 ml apă distilată. Sterilizați în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Lăsați-l să se odihnească până când atinge temperatura de 50 ° C și adăugați ureea pregătită anterior aseptic.

Turnați 4-5 ml în tuburi sterile și înclinați până la solid. Ar trebui să existe un cioc lung de flaut.

Acest mediu poate fi preparat și sub formă lichidă.

Aplicații

Testul de uree este extrem de eficient în distingerea genului Proteus de celelalte genuri din familia Enterobacteriaceae, având în vedere reacția rapidă oferită de Proteus.

Folosind compoziția Christensen, testul ajută la diferențierea dintre speciile din același gen. De exemplu, S. haemolyticus și S. Warneri sunt stafilococul coagulaz negativ și beta-hemolitic, dar diferă prin faptul că S. haemolyticus este uree negativă și S. Warneri este uree pozitivă.

Pe de altă parte, McNulty a utilizat cu succes bulionul de uree de 2% Christensen pentru a studia prezența Helicobacter pylori în probele de biopsie prelevate din mucoasa gastrică (regiunea antrală).

Prezența H. pylori este evidențiată printr-un test de uree pozitiv. Durata de observare a rezultatelor este direct proporțională cu cantitatea de microorganisme prezente.

După cum se poate observa, este o metodă simplă pentru diagnosticul Helicobacter pylori în biopsiile gastrice.

În sfârșit, acest test este util și pentru diferențierea speciilor de genurile Brucella, Bordetella, Bacillus, Micrococcus și Micobacteria.

Semănatul testului ureei

Ambele metode necesită un inocul microbian puternic pentru a optimiza rezultatele. Coloniile bacteriene sunt de preferință prelevate din agar de sânge și drojdiile de la agoura Sabouraud, cu câteva excepții. Inoculul este emulsionat în mediu lichid.

Pentru bulionul de uree Stuart, incubați la 37 ° C timp de 24 până la 48 de ore, știind că sunteți în căutarea tulpinilor Proteus doar atunci când tulpina este o bacterie. Pentru drojdii, poate fi incubat la 37 ° C sau la temperatura camerei pentru 24 până la 48 de ore de incubare.

În cazul bulionului de uree al lui Christensen, acesta este incubat la 37 ° C timp de 24 de ore. Dacă testul este negativ, poate fi incubat până la 6 zile. Dacă testul este pozitiv înainte de 6 ore, indică faptul că este o tulpină a genului Proteus.

În cazul agarului ureei Christensen, tegumentul agar este puternic inoculat, fără a perfora. Bulionul este incubat și interpretat în același mod.

QA

Pentru testarea mediului pot fi folosite tulpini de control, precum Proteus mirabilis ATCC 43071, Klebsiella pneumoniae ATCC 7006003, Escherichia coli ATCC 25922 și Salmonella typhimurium. Primele două ar trebui să dea rezultate pozitive, iar ultimele două rezultate negative.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Referințe

1. Pérez C, Goitía K., Mata S, Hartung C, Colella M, Reyes H. și colab. Utilizarea bulionului de uree Stuart pentru testul de ureeză, ca test în diagnosticul drojdiei. Rev. Soc. Ven. Microbiol. 2002; 22 (2): 136-140. Disponibil la adresa: Scielo.org.
2. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
3. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
5. Laboratoarele Britannia. Christensen Medium (bază de agar Urea) 2015. Disponibil la: britanialab.com