BULION DE SOIA TRYPTICASEIN: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Tripton bulion de soia este un mediu de cultură lichid, foarte hrănitoare, neselectiv. Datorită marea versatilitate, este unul dintre cele mai utilizate medii de cultură lichidă în laboratorul de microbiologie.

De asemenea, este cunoscut prin denumirea de bulion de soia triptic sau cazeină-soia digerată, a cărei prescurtare este TSB pentru acronimul său în engleză Tryptic Soy Broth sau CST pentru acronimul său în spaniolă. Utilizările sale sunt foarte variate datorită compoziției sale. Este compus din tripteină, peptonă de soia, clorură de sodiu, fosfat dipotasiu și glucoză.

Bulion de soia Trypticasein însămânțat cu o tulpină de Pseudomonas aeruginosa ATCC 27853 unde se observă producția de pigment. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa Gil.

Este capabil să reproducă bacterii patogene importante din punct de vedere clinic, inclusiv cele care necesită nutriție și bacterii anaerobe. Unele ciuperci oportuniste și contaminante se pot dezvolta și în acest mediu.

Datorită puterii sale nutritive ridicate, are o sensibilitate ridicată pentru a detecta contaminarea microbiană, din acest motiv a fost aleasă de Serviciul de inspecție pentru sănătatea animalelor și a plantelor USDA pentru analiza microbiologică a vaccinurilor.

De asemenea, bulionul de soia trypticasein îndeplinește cerințele diferitelor farmacopee (PE european, JP japonez și USP nord-american) pentru studiul microbiologic al produselor la nivel industrial, cum ar fi produsele cosmetice și alimentare.

Pe de altă parte, merită menționat faptul că, în ciuda utilității sale mari, acest mediu este relativ ieftin, ceea ce îl face accesibil pentru majoritatea laboratoarelor de microbiologie. De asemenea, este foarte ușor de preparat.

Bază

Tripteina, peptona și glucoza îi asigură proprietăți nutritive esențiale pentru a-l face un mediu ideal pentru o creștere rapidă microbiană.

În aproximativ 6 până la 8 ore de incubare, creșterea poate fi deja observată în majoritatea microorganismelor. Cu toate acestea, există tulpini cu creștere lentă care pot dura zile în creștere.

Clorura de sodiu și fosfatul dipotazic acționează ca echilibru osmotic și, respectiv, regulator de pH. Prezența creșterii este evidențiată de apariția turbidității în mediu; dacă nu există creștere, mediul rămâne translucid.

Datorită culorii sale deschise, este posibilă observarea producției de pigmenți, cum ar fi cea prezentată în imaginea situată la începutul articolului, care corespunde cu pigmentul produs de Pseudomonas aeruginosa.

preparare

-Triptysein bulion de soia

Pentru prepararea bulionului de soia triptic, trebuie cântărite 30 g de mediu comercial deshidratat la scară digitală. Apoi este dizolvată într-un litru de apă distilată conținută într-un balon.

Amestecul este lăsat să se odihnească 5 minute și apoi este dus la o sursă de căldură pentru a ajuta la dizolvarea mediului. Trebuie agitat frecvent în timp ce fierbe timp de 1 minut.

Odată dizolvat, acesta este distribuit în tuburi de dimensiunea corespunzătoare, după cum este necesar. Se pot folosi tuburi cu dopuri de bumbac sau cu capace Bakelite. Ulterior, tuburile sunt sterilizate cu mediul în autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute.

PH-ul mediului trebuie să rămână la 7,3 ± 0,2

Trebuie menționat că culoarea mediului de cultură deshidratată este bej deschis și trebuie păstrată între 10 și 35 ° C, într-un loc uscat. În timp ce bulionul pregătit are culoare deschisă de chihlimbar și trebuie păstrat la frigider (2 până la 8 ° C).

-Variante de bulion de soia cu tripticaseină

Bulionul de soia trypticasein modificat poate fi preparat prin adăugarea de săruri biliare și novobiocină pentru a-l face selectiv pentru izolarea E. coli. O altă opțiune în același scop este pregătirea bulionului de soia cu tripticază suplimentat cu vancomicină, cefiximă și telurită (2,5 pg / ml).

Pe de altă parte, se poate adăuga mai multă glucoză (0,25%) la bulionul de soia triptic atunci când obiectivul este stimularea formării de biofilme.

Utilizare

Este suficient de hrănitor pentru a permite creșterea bacteriilor fastidioase sau fastidioase, cum ar fi Streptococcus pneumoniae, Streptococcus sp și Brucella sp, fără a fi necesară suplimentarea cu sânge sau ser.

De asemenea, în acest bulion se pot dezvolta unele ciuperci, cum ar fi Complexul Candida albicans, Aspergillus sp și Histoplasma capsulatum.

În plus, acest mediu în condiții anaerobe este ideal pentru recuperarea bacteriilor aparținând genului Clostridium, precum și pentru bacteriile anaerobe neporulate de importanță clinică.

Dacă se adaugă 6,5% clorură de sodiu, acesta poate fi utilizat pentru creșterea Enterococcus și a altor Streptococuri din grupa D.

La nivel de cercetare, a fost foarte util în diferite protocoale, în special în studiul bacteriilor care formează biofilm sau biofilm. De asemenea, este utilizat pentru a pregăti suspensia bacteriană Mac Farland de 0,5% necesară pentru efectuarea antibiogramei prin metoda Kirby și Bauer.

În acest caz, se iau 3 - 5 colonii cu aspect similar și se emulsionează în 4-5 ml de bulion de soia cu tripticaseină. Apoi este incubat timp de 2 până la 6 ore la 35-37 ° C și apoi este ajustat la concentrația dorită folosind soluție salină sterilă. Bulionii de soia cu tripticaseină nu trebuie folosiți de la 18 la 24 de ore de la incubare.

însămânțat

Eșantionul poate fi însămânțat direct sau pot fi subculturi colonii pure prelevate din medii selective. Inoculul trebuie să fie mic pentru a nu bloca mediul înainte de incubare.

În mod normal, este incubat la 37 ° C în aerobioză timp de 24 de ore, dar aceste condiții pot varia în funcție de microorganismul căutat. Poate fi, de asemenea, incubat în condiții anaerobe la 37 ° C timp de câteva zile, dacă este necesar. De exemplu, microorganismele cu creștere rapidă sau fastidioase pot fi incubate până la 7 zile.

În analiza microbiologică a substanțelor farmaceutice - cum ar fi vaccinurile - protocoalele sunt mai stricte. În aceste cazuri, bulionul fără creștere nu este aruncat până când ajunge la 14 zile de incubare continuă.

QA

De la fiecare lot pregătit, trebuie să fie incubate 1 sau 2 tuburi neinoculate pentru a demonstra sterilitatea lor. Trebuie să rămână neschimbat.

Tulpinile cunoscute pot fi, de asemenea, plantate pentru a evalua comportamentul acestora. Printre tulpinile care pot fi utilizate se numără:

Aspergillus brasiliensis ATCC 1604, Candida albicans ATCC 10231, Bacillus subtilis ATCC 6633, Staphylococcus aureus ATCC 6538 sau 25923, Escherichia coli ATCC 8739, Streptococcus pyogenes ATCC 19615, Streptococcus pneumoniae ATCC28CC305, Pneumoniae, Pneumoniae

În toate cazurile, creșterea trebuie să fie satisfăcătoare în condițiile corespunzătoare de atmosferă și temperatură pentru fiecare microorganism.

limitări

-Fermentarea glucozei determină scăderea pH-ului mediului datorită producției de acizi. Acest lucru poate fi defavorabil pentru supraviețuirea unor microorganisme sensibile la aciditate.

-Nu este recomandat pentru întreținerea tulpinilor, deoarece pe lângă aciditate, bacteriile epuizează nutrienții după câteva zile, cu acumularea în consecință a substanțelor toxice care fac ca mediul să fie inospital.

-Trebuie să lucrezi având grijă de toate protocoalele de sterilitate, deoarece bulionele sunt ușor contaminate.

-După pregătirea bulionului de soia cu tripticaseină, nu trebuie să încercați să transferați bulionul într-un alt tub steril, deoarece acest tip de manevră este foarte vulnerabil la contaminare.

Referințe

1. Cona E. Condiții pentru un studiu de susceptibilitate bun prin test de difuzie de agar. Rev. chil. infectol. 2002; 19 (2): 77-81. Disponibil pe: scielo.org
2. Laboratorul Britannia. Bulion de soia Triptein. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
3. Laboratorul MCD. Tripticasein bulion de soia. Disponibil pe: electronic-systems.com
4. Neogen Laborator. Triptic Bulion de soia. Disponibil la adresa: foodafety.neogen.com
5. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
6. Rojas T, Vásquez Y, Reyes D, Martínez C, Medina L. Evaluarea tehnicii de imunoseparare magnetică pentru recuperarea Escherichia coli O157: H7 în cremele de lapte. ALAN. 2006; 56 (3): 257-264. Disponibil pe: scielo.org.ve
7. Gil M, Merchán K, Quevedo G, Sánchez A, Nicita G, Rojas T, Sánchez J, Finol M. Formarea biofilmului în izolatele Staphylococcus aureus în funcție de susceptibilitatea antimicrobiană și originea clinică. Vitae. 2015; 62 (1): 1-8. Disponibil la adresa: saber.ucv.ve
8. Narváez-Bravo C, Carruyo-Núñez G, Moreno M, Rodas-González A, Hoet A, Wittum T. Izolarea Escherichia coli O157: H7 în probe fecale bovine cu dublu scop din municipiul Miranda, statul Zulia, Venezuela. Rev. Cient. (Maracaibo), 2007; 17 (3): 239-245. Disponibil pe: scielo.org