BULION LACTAT: FOND DE TEN, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Lactoza Bulionul este un mijloc de non - mediu de cultură lichid selectiv utilizat în principal ca o pre-îmbogățire în izolarea tulpinilor de Salmonella de la analize microbiologice pentru produsele alimentare prelucrate, produse lactate sau apă. Acest lucru este recomandat de Comisia Internațională privind Specificațiile Microbiologice pentru Alimente (ICMPF).

Mediul conține digestie enzimatică de gelatină, extract de carne și lactoză, substanțe necesare creșterii bacteriene. Mai mult, lactoza este un carbohidrat fermentabil, prin urmare, unele coliforme sunt capabile să-l descompună cu producerea de gaz.

Bulionuri lactate cu turbiditate. Sursa: Fotografie realizată de autor MSc. Marielsa gil

Din acest motiv, bulionul de lactoză este recomandat de Asociația Americană de Sănătate Publică (APHA) pentru studiul prezumtiv al bacteriilor coliforme totale și fecale, calificându-l drept o alternativă excelentă pentru înlocuirea bulionului de lauril sulfat de triptos în tehnica standard a numărului cel mai probabil (MPN). ), utilizat pentru analiza microbiologică a alimentelor, laptelui și apei de suprafață, eșantioanelor subterane, recreative, menajere și industriale.

Bază

Pentru analiza microbiologică a unor probe, etapa de pre-îmbogățire este esențială pentru a putea recupera un microorganism specific care poate fi în cantitate foarte mică sau în condiții nefavorabile care încalcă sau minimizează viabilitatea acestuia.

Acesta este cazul alimentelor uscate și procesate, eventual contaminate cu Salmonellas sp. În aceste cazuri, dacă bacteriile sunt prezente, acestea au suferit abuz fizic și chimic în timpul procesului de producție a produsului.

În așa fel încât microorganismele sunt expuse la factori adversi, cum ar fi deshidratarea, expunerea la produse inhibitoare sau toxice și suprapunerea generată de prezența altor bacterii într-o cantitate mai mare, printre altele.

În acest sens, bulionul de lactoză are un efect reparator asupra structurilor deteriorate ale microorganismului, determinându-l să se recupereze și să se reproducă, astfel încât să poată fi detectat.

De asemenea, bulionul de lactoză are capacitatea de a dilua substanțele inhibitoare care pot afecta viabilitatea acestuia, permițând dezvoltarea acestuia. În plus, compoziția nutrițională a bulionului de lactoză este strategică pentru a favoriza creșterea Salmonella sp față de alte microorganisme.

Pentru identificarea finală, acesta trebuie subcultivat în alte medii de cultură definitive.

Pe de altă parte, compoziția mediului face posibilă și detectarea microorganismelor care fermentează lactoza care produc gaz.

preparare

Pentru a prepara un litru de bulion de lactoză, trebuie cântărit 13 grame de mediu deshidratat și dizolvat în 1000 ml de apă distilată.

Pentru a ajuta la dizolvarea mediului în apă, soluția poate fi încălzită puțin, dar nu prea mult.

Odată omogenă, soluția este pregătită după cum urmează: dacă bulionul este folosit pentru a căuta coliforme, se pregătește un suport de epruvete, în care se introduce un tub de fermentare Durham cu susul în jos.

Tubul Durham este un detaliu foarte important, deoarece va permite detectarea formării gazelor, o valoare de mare valoare în căutarea coliformelor.

Odată ce tuburile sunt gata, se distribuie 10 ml de bulion de lactoză, o cantitate care trebuie să fie suficientă pentru a acoperi întregul tub Durham.

Dacă bulionul de lactoză trebuie utilizat ca bulion de pre-îmbogățire, nu este necesar să se plaseze un tub de fermentație Durham. În acest caz, este necesară o cantitate mai mare de mediu (225 ml), care va fi servită în sticle de 500 ml, cu gura largă și cu un capac cu șurub rezistent la termo.

Ulterior, tuburile sau vasele sunt autoclavate la 121 ° C timp de 15 minute.

Mediul trebuie să rămână la un pH final de 6,9 ​​± 0,2 la 25 ° C.

Bulionii se păstrează la frigider până la utilizare.

Înainte de utilizare, bulionele trebuie aduse la temperatura camerei.

Pe de altă parte, bulionul de lactoză poate fi preparat și în concentrație dublă.

Unele laboratoare adaugă bromocresol violet la bulionul de lactoză ca indicator de pH, pentru a arăta tuburile în care a fost fermentată lactoza din cauza schimbării de culoare. În acest caz, bulionul are o culoare violetă și dacă există fermentație devine galben.

Aplicații

În laboratoarele de microbiologie, bulionul de lactoză este utilizat pe scară largă, deoarece este un mediu relativ ieftin care oferă rezultate fiabile și rapide (24-48 de ore).

Poate fi utilizat pentru analiza coliformelor totale și fecale din alimente și apă sau ca un bulion de pre-îmbogățire pentru Salmonella.

Pre-îmbogățire

Pre-îmbogățirea este un pas înainte de îmbogățirea eșantionului, ceea ce îmbunătățește mult recuperarea bacteriilor din genul Salmonella din alimentele procesate.

Pentru a face acest lucru, proba de alimente solide (25 grame) sau lichid (25 ml) este semănată în 225 ml bulion de lactoză, incubând timp de 24 până la 48 de ore. Ulterior, acesta va fi subcultivat într-un mediu îmbogățit, cum ar fi bulionul de cistină de selenit sau bulionul de tetrathionate. Apoi treceți la media selectivă XLD și SS.

Analiza coliformă totală și fecală

Este un mediu excelent ca indicator al contaminării fecale.

Din acest motiv, bulionul de lactoză este ideal pentru faza prezumtivă a studiului coliform prin metoda Numărul cel mai probabil.

Pentru probele în care este suspectată o cantitate mare de coliforme, va fi inoculată o cantitate mai mică din aceasta (1 ml), în timp ce pentru eșantioanele în care este suspectată o cantitate mai mică de coliforme, va fi inoculat un volum mai mare de eșantioane (10 ml).

Pentru analiză, se realizează diluții 10 ^-1 , 10 ^-2 , 10 ^-3 , formând o baterie de 3-5 tuburi pentru fiecare concentrație utilizată.

Din fiecare diluție, același volum este însămânțat în bulionii de lactoză.

Tuburile sunt incubate timp de 24 de ore. Bulii negativi sunt incubați pentru încă 24 de ore.

Interpretarea rezultatelor se face prin respectarea a două caracteristici: prima este prezența sau absența turbidității și întrucât acest mediu nu conține un indicator de pH, nu va exista schimbare de culoare.

Al doilea este producția sau nu de gaz. Gazul este ușor evidențiat în tubul Durham prin apariția uneia sau a mai multor bule de aer în interiorul său.

Se consideră pozitiv dacă se observă ambele caracteristici, adică turbiditatea cu producția de gaz. Tuburile pozitive ar trebui să fie semințiate în medii de confirmare (2% bulion de bile verzi strălucitoare și bulion CE).

Controlul calității mediului

- Atunci când pregătiți mediul, este important să nu uitați să plasați tuburile Durhams dacă scopul acestuia este studierea coliformelor.

- Nu supraîncălziți mediul înainte de sterilizare.

- Distribuie în eprubete înainte de sterilizare, niciodată după.

- Nu folosiți dacă mediul are mai mult de 3 luni.

- Nu folosiți dacă observați vreo modificare a caracteristicilor obișnuite ale mediului.

- Când pregătiți un lot de bulion de lactoză, testați calitatea acestuia prin însămânțarea tulpinilor cunoscute precum Escherichia coli, Enterobacter aerogenes, Citrobacter freundii și Klebsiella pneumoniae. Ele cresc foarte bine, cu producția de gaz (control pozitiv).

- Poate include, de asemenea, Pseudomonas aeruginosa, Salmonella typhimurium sau Enterococcus faecalis, care cresc bine, dar fără producție de gaze (control negativ).

- Trebuie menționat că culoarea originală a mediului deshidratat este bej și cea a mediului preparat este de culoare galbenă foarte deschisă și transparentă. Dacă se observă o schimbare de culoare sau aspect, aceasta se poate deteriora.

Referințe

1. Acevedo R, Severiche C, Castillo M. Biologie și microbiologie de mediu. (2013) ediția I. Universitatea din Cartagenas, Columbia.
2. Camacho A, Giles M, Ortegón A, Palao M, Serrano B și Velázquez O. (2009). Tehnici pentru analiza microbiologică a alimentelor. A 2-a ed. Facultatea de Chimie, UNAM. Mexic.
3. Laboratoarele Conda Pronadisa. 2017. Concentrație dublă a bulionului de lactoză (European Pharm.)
4. Fernández-Rendón C, Barrera-Escorcia G. Compararea tehnicilor pentru extragerea bacteriilor coliforme din sedimentul lacului Xochimilco, Mexic. Rev. argent. Microbiol. 2013; 45 (3): 180-184. Disponibil pe: scielo.org.
5. Sotomayor F, Villagra V, Cristaldo G, Silva L, Ibáñez L. Determinarea calității microbiologice a apelor cu puțuri arteziene în raioanele din departamentele Central, Cordillera și Capitala. Mem. Inst. Investig. Ştiinţă. Sănătate 2013; 11 (1): 5-14. Disponibil de la: scielo.iics.