AGAR LIA (FIER DE LIZINĂ): FUNDAȚIE, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

ALI agar (Lizina de fier) este un test biochimic utilizat pentru a identifica bacteriile din familia Enterobacteriaceae. Acest mediu a fost creat de Edwards și Fife, pe baza formulei Falkow.

Inițial, acest test a fost un bulion care conține peptone, extract de drojdie, glucoză, L-lizină, bromocresol purpuriu și apă distilată. Edwards și Fife au adăugat agar-agar, citrat feric de amoniu și tiosulfat de sodiu.

Test pozitiv și negativ pentru decarboxilarea lizinei. Sursa: Proprietatea foto și diagrama autorului MSc. Marielsa gil

În principal, testul constă în demonstrarea prezenței enzimei lizina decarboxilază, capabilă să reacționeze cu gruparea carboxilică a aminoacidului L-lizină. O deaminare a aminoacidului poate să apară și datorită prezenței enzimei lizina deaminază.

În plus, compoziția mediului arată capacitatea unor gene bacteriene de a produce hidrogen sulfurat. În cele din urmă, este posibil să se observe și generarea sau nu de gaz în mediu.

Bază

Peptone și extract de drojdie

Ca majoritatea mediilor de cultură, Lysine Iron Agar conține componente care asigură sursa de nutrienți necesară creșterii bacteriene. Aceste componente sunt reprezentate de peptone și extract de drojdie.

Glucoză

De asemenea, acest agar conține glucoză ca carbohidrat fermentabil. Toate bacteriile din familia Enterobacteriaceae sunt cunoscute pentru a fermenta glucoza.

Această etapă este crucială, deoarece va fi responsabilă de acidifierea mediului, o condiție esențială pentru ca enzima lizină decarboxilază, dacă este prezentă, să acționeze asupra substratului său.

În unele genuri bacteriene, se poate observa producția de gaze datorată fermentației de glucoză.

Gazul este evidențiat atunci când există o deplasare a agarului în tub, lăsând un spațiu gol în partea de jos a tubului sau prin fracturarea mediului în două sau mai multe porțiuni.

L-lizină

Odată ce lizina este decarboxilată, se formează o diamină (cadaverină) și dioxid de carbon.

Decarboxilarea are loc în prezența fosfatului de coenzim piridoxal. Această reacție este ireversibilă.

Indicator PH (violet bromocresol)

Toate modificările de pH care apar în mediu prin diferitele reacții sunt detectate de indicatorul de purpură bromocresol.

În acest sens, atunci când există acidifiere, mediul devine galben, iar atunci când există alcalizare, mediul revine la culoarea purpurie sau violetă inițială.

Atunci când deaminarea lizinei apare datorită prezenței enzimei lizina deaminazei, pe suprafață se formează o culoare roșiatică, tipică la genurile Proteus, Providencia și unele specii Morganella.

Acest lucru se datorează faptului că în timpul procesului de deaminare se formează acid alfa-ceto-carbonic, care reacționează cu citratul de amoniu în prezența oxigenului, provocând culoarea menționată mai sus.

Citrat de amoniu feric și tiosulfat de sodiu

Pe de altă parte, bacteriile care produc hidrogen sulfurat vor fi evidențiate prin prezența tiosulfatului de sodiu (sursa de sulf) și a citratului de amoniu feric, care este dezvoltatorul H ₂ S.

Bacteriile care au enzima tiosulfat reductază au capacitatea de a acționa reducând tiosulfatul de sodiu prezent, formând sulfit și hidrogen sulfurat (H ₂ S).

Acesta din urmă este un gaz incolor, dar când reacționează cu sarea de fier formează sulfură metalică feroasă, care este un compus insolubil (precipitat negru vizibil).

Cu toate acestea, capacitatea de a forma H ₂ S cu acest mediu nu este foarte fiabilă, deoarece unele bacterii negative ale lizinei decarboxilazei capabile să producă H ₂ S nu vor forma precipitatul negru, deoarece aciditatea mediului interferează. De aceea, se recomandă verificarea cu alte suporturi care conțin fier.

Interpretarea testului

Decarboxilarea lizinei

Tuburile trebuie citite după 24 de ore de incubare, altfel există riscul de a interpreta greșit reacția, raportând falsuri negative.

Trebuie amintit că prima reacție care va avea loc va fi fermentarea glucozei, prin urmare, toate tuburile după 10 până la 12 ore se vor îngălbeni.

Dacă la sfârșitul timpului de incubație (24 ore) se observă un fundal galben cu o suprafață purpurie sau violetă, reacția este negativă. Culoarea purpurie a suprafeței corespunde alcalinizării mediului prin utilizarea peptonelor.

O reacție pozitivă este cea în care partea inferioară și suprafața tubului sunt complet mov, adică revine la culoarea inițială.

Prin urmare, cine determină pozitivitatea testului este baza sau fundalul mediului. Dacă aveți îndoieli despre culoare, acesta poate fi comparat cu un tub LIA neinoculat.

Deaminarea lizinei

Un tub care arată dezaminarea lizinei va avea o suprafață maronie roșiatică și un fundal galben (acid) sau întregul tub roșiatic.

Această reacție este interpretată ca negativă pentru decarboxilarea lizinei, dar pozitivă pentru dezaminarea lizinei.

Această reacție este definită și interpretată pe lună.

Producția de hidrogen sulfurat (H

O reacție pozitivă este observată prin apariția unui precipitat negru în tot sau o parte a mediului. De obicei, între marginea tevii și baza.

Dacă precipitatul are loc în tot tubul, nu va dezvălui celelalte reacții care apar la mijloc.

Înregistrarea rezultatelor

La interpretarea testului, rezultatele sunt înregistrate după cum urmează:

Mai întâi se citește conotul, apoi partea inferioară sau blocul, apoi producția de H ₂ S și, în sfârșit, producția de gaz.

Exemplu: K / A + (-). Asta înseamnă:

• K: lunetă alcalină (culoare violet)
• A: Fundal acid (galben), adică reacție negativă de decarboxilare și dezaminare negativă.
• +: Producția de hidrogen sulfurat
• (-): Fără gaz.

preparare

Se cântărește 35 g de mediu de lizină de agar de fier deshidratat și se dizolvă într-un litru de apă distilată.

Se încălzește până când agarul se dizolvă complet, pentru a face acest lucru lăsați-l să fiarbă un minut, amestecând frecvent. Distribuie 4 ml de mediu în epruvete de 13/100 cu capace de bumbac.

Sterilizați într-o autoclavă la 121 ° C timp de 15 minute. Scoateți-vă de pe autoclav și lăsați-vă să stați într-un unghi, astfel încât să existe o bază adâncă și un bizon scurt.

Păstrați la frigider 2-8 ° C. Lăsați-l să se încălzească înainte de a semăna tulpina bacteriană.

Culoarea mediului deshidratat este bej și mediul pregătit este purpuriu roșiatic.

PH-ul final al mediului preparat este 6,7 ± 0,2

Mediul devine galben la pH 5,2 sau mai puțin și este violet la pH 6,5 și mai mare.

Aplicații

Acest test, împreună cu alte teste biochimice, sunt utilizate pentru identificarea bacililor din familia Enterobacteriaceae.

Mediul este însămânțat cu o buclă dreaptă sau un ac, una sau două puncții sunt făcute în partea de jos a tubului, iar apoi suprafața mediului este marcată într-un zig-zag.

Se incubează timp de 24 de ore la 35-37 ° C în aerobioză. Dacă este necesar, se lasă să se incubeze încă 24 de ore.

Este util în principal pentru diferențierea speciilor Citrobacter lacto-negative de Salmonellas sp.

Sursa: Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.

Referințe

1. Mac Faddin J. (2003). Teste biochimice pentru identificarea bacteriilor de importanță clinică. 3. ed. Editorial Panamericana. Buenos Aires. Argentina.
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. 5 ed. Editorial Panamericana SA Argentina.
4. Laboratoarele Britannia. Agar de fier de lizină. 2015. Disponibil la adresa: britanialab.com
5. Laboratoare BD. Slant BBL Lysine Agar Iron. 2007. Disponibil la adresa: bd.com
6. Laboratoarele Valtek. LIA medie 2009. Disponibil pe: andinamedica.com