AGAR NUTRITIV: JUSTIFICARE, PREPARARE ȘI UTILIZĂRI - BIOLOGIE - 2025

Geloză nutritivă este un mediu neselectiv și nici o cultură solidă diferențială. În acest mediu cresc toate tipurile de bacterii care nu sunt solicitante din punct de vedere nutrițional.

Este un mediu simplu și, în ciuda numelui său, conține o valoare nutritivă mai mică în comparație cu alte medii similare, cum ar fi Brain Heart Infusion Agar sau Trypticase Soy Agar.

Coloniile contează pe agarul nutritiv

Utilitatea sa în laborator este foarte variată. Este utilizat în principal pentru speciile subculturi, menținerea tulpinilor, numărarea coloniilor, ca bază pentru prepararea agarului de sânge, printre altele.

De asemenea, datorită culorii sale bej deschis, producția de pigmenți generați de unele tulpini bacteriene poate fi deosebit de deosebită, cum ar fi pigmentul verzui al Pseudomonas aeruginosa, pigmentul roșu din cărămidă produs de Serratia marcescens la temperatura camerei, pigmentul galben auriu al Staphylococcus aureus, printre altele.

În plus, este unul dintre cele mai ieftine medii în creștere găsite pe piață.

Bază

Așa cum am menționat mai sus, este un mediu foarte simplu care se bazează pe furnizarea de nutrienți pentru creșterea bacteriilor fără restricții și fără reacții complexe de interpretat.

Deoarece mediul este translucid, este ideal pentru numărarea coloniilor prin metoda de însămânțare a adâncimii.

Compoziţie

Este compus în principal din extract de carne sau extract de drojdie, peptone sau gelatină digestivă pancreatică, agar-agar, clorură de sodiu și apă distilată.

Extractul de carne sau drojdie și peptonele reprezintă sursele esențiale de carbon și minerale (azot, fosfor și sulf), care vor fi utilizate de bacterii ca sursă de energie și factori de creștere.

De asemenea, agar-agar este baza tuturor mediilor de cultură solide, venind să înlocuiască gelatina, care a fost primul compus bazic folosit de Robert Koch pentru a conferi consistență solidă mediei sale.

Agar este un polizaharid compus din galactoză, galactomannan, agaroză și agaropectină. Se stabilește la 40 ° C și se topește aproape de 100 ° C.

La rândul său, clorura de sodiu oferă mediului osmolaritatea necesară dezvoltării bacteriene.

În cele din urmă, apa servește pentru hidratarea și dizolvarea compușilor liofilizați. Trebuie utilizată apă distilată ajustată la pH neutru. Apa de la robinet nu trebuie utilizată deoarece conține calciu și magneziu care pot reacționa cu fosfații în mediu și formează săruri insolubile.

preparare

Pentru un litru de agar nutritiv trebuie cântărit 31 g de mediu deshidratat. Puneți-l într-un balon și dizolvați-l într-un litru de apă distilată. După 5 minute de repaus, se încălzește pe o sursă de căldură și se amestecă constant până la fierbere timp de 1 sau 2 minute.

Pregătirea mediului de cultură.

Vasul este apoi introdus într-o autoclavă și sterilizat la 121 ° C timp de 20 de minute.

Sterilizarea în autoclav

La sfârșitul timpului, este scos din autoclav și servit în vase Petri sterile, folosind o hota cu flux laminar sau arzătorul Bunsen.

Dacă vasele Petri sunt de unică folosință (plastic), mediul trebuie distribuit atunci când agarul are o temperatură de aproximativ 50 ° C, pentru a preveni deformarea acestora de căldură excesivă.

Se lasă să se solidifice și să se păstreze pe un suport pentru plăci inversate și să se răcească la 2-8 ° C până la utilizare.

Plăcile trebuie să fie temperate înainte de a fi însămânțate. Plăcile cu agar nutritiv nu trebuie utilizate dacă sunt contaminate sau deshidratate.

PH-ul mediului preparat trebuie ajustat la 7,3 ± 0,2.

Aplicații

Este cel mai simplu mediu de cultură utilizat în laboratorul de microbiologie. Formularea sa este excelentă pentru creșterea bacteriilor neexigente.

Utilizările sale principale sunt explicate mai jos:

Ca bază pentru prepararea agarului de sânge

Acest mediu este uneori utilizat ca bază pentru prepararea agarului de sânge, însă nu este baza cea mai frecvent utilizată.

Stimulează sporularea bacteriilor formatoare de spori

Acest mediu de cultură este util în special pentru stimularea sporulării bacteriilor care formează spori, cum ar fi Bacillus sp.

Pentru aceasta, o tulpină din genul Bacillus este semănată și incubată timp de 24 de ore la 37 ° C în aerobioză. Odată ce coloniile au crescut, placa este supusă unui stres de temperatură, adică temperatura cuptorului este crescută la 44 ° C și lăsată încă 24 de ore sau plasată la frigider pentru 24 de ore.

La sfârșitul timpului, frotiile de cultură sunt făcute și colorate cu colorație Gram sau cu pata de spori Shaeffer-Fulton. În ele se vor observa bacili cu endospoare (spori în interiorul bacilului) și exospoare (spori în afara bacilului).

Întreținerea tulpinilor

Unele laboratoare de asistență pentru cercetare sau universități necesită menținerea bacteriilor viabile de importanță clinică cât mai mult timp posibil, pentru a utiliza banca de bacterii (bacterioteca) pentru lucrările de cercetare sau pentru pregătirea practicilor didactice, unde Elevii vor învăța să manipuleze și să identifice aceste microorganisme.

Agar nutritiv, precum și agar de infuzie a inimii creierului, pot fi utilizate în acest scop. Agarul este pregătit, turnat în tuburi cu un capac de bakelită și înclinat pe o bază, astfel încât agarul se solidifică formând un bloc în partea de jos și un tevic la suprafață (cioc de flaut).

Fiecare tub este etichetat cu numele bacteriilor care trebuie însămânțate și data. Fiecare dintre bacterii va fi însămânțată pe teș și incubată timp de 24 de ore. După ce coloniile au crescut, tuburile sunt depozitate la temperatura camerei.

Bacterioteca trebuie reînnoită de la 1 la 3 luni, pentru a evita contaminarea și deshidratarea mediului, precum și moartea bacteriilor.

Doar bacteriile non-picky pot fi menținute în acest mod.

Numărul de colonii

Deși există mijloace specializate pentru numărarea coloniilor, cum ar fi agar-ul de numărare standard, agar-ul nutritiv poate fi utilizat în acest scop, fie prin însămânțarea suprafeței cu o spatulă drigalski, fie prin adâncime. Din acest motiv este foarte util în analiza microbiologică a alimentelor și a apei.

Executarea testelor de diagnostic

Deoarece este un mediu care nu conține sânge sau orice alt aditiv, este ideal pentru a lua colonii cultivate pe acest mediu pentru a efectua testul catalazei.

De asemenea, datorită culorii sale deschise, este indicat să efectueze teste de oxidază direct pe o suprafață de agar însămânțată, fără interferențe.

Recuperarea aerobelor mezofile din apele sărate de agrement (Plaje)

Agarul de nutrienți preparat cu 10% apă de mare este util pentru evaluarea aerobelor mezofile din apele de plajă.

În acest fel, nivelul real de contaminare pe care îl au apele cu aceste microorganisme poate fi apreciat, deoarece în acest tip de probe rezultatele sunt suprapuse atunci când se utilizează medii de cultură preparate în mod convențional.

Acest lucru a fost demonstrat de Cortez și colab. în 2013 într-o lucrare de cercetare.

Acest lucru poate fi explicat datorită schimbării bruște pe care bacteriile o suferă atunci când trec dintr-un mediu hipersaltat într-un mediu cu sare scăzută, prin urmare microorganismele intră într-o stare de letargie în care acestea sunt viabile, dar nu sunt cultivabile.

Referințe

1. „Agar nutritiv”. Wikipedia, enciclopedia gratuită. 13 Sep 2016, ora 20:33 UTC. 29 Dec 2018, 21:04 ro.wikipedia.org
2. Forbes B, Sahm D, Weissfeld A. (2009). Diagnostic microbiologic Bailey & Scott. 12 ed. Argentina. Editorial Panamericana SA
3. Koneman E, Allen S, Janda W, Schreckenberger P, Winn W. (2004). Diagnosticul microbiologic. (Ediția a 5-a). Argentina, Editorial Panamericana SA
4. Cortez J, Ruiz Y, Medina L, Valbuena O. Efectul mediilor de cultură preparate cu apa de mare asupra indicatorilor de sănătate în apele marine ale spa-urilor din Chichiriviche, statul Falcón, Venezuela. Rev Soc Ven Microbiol 2013; 33: 122-128
5. Paredes V, Dias V, Silva de Almeida M și Cardoso M. Calitatea microbiologică a apei pentru doze inseminante, pentru suine. Cient.Agro.Amaz. 2013; 1 (2): 42-49.
6. García P, Paredes F, Fernández del Barrio M. (1994). Microbiologie clinică practică. Universitatea din Cadiz, ediția a II-a. Serviciul de publicații UCA